Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
В.Е.КОВШИЛО
23 марта 1978 г. N 1829-78
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТОКСИЧНОСТИ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР И ПРОДУКТОВ
ИХ ПЕРЕРАБОТКИ, ПОРАЖЕННЫХ ГРИБАМИ РОДА ФУЗАРИУМ
СЕКЦИИ SPOROTRICHIELLA
Методические указания подготовлены
Институтом питания АМН СССР и Оренбургским медицинским институтом.
Методические указания рекомендуются для
использования в работе лабораторий санэпидстанций.
В зерновых
культурах, убранных или произраставших в неблагоприятных метеорологических
условиях (обильные дожди, ранний снег), запоздалой уборки урожая, поздно осенью
вывезенных с поля, а также своевременно убранных, но недостаточно просушенных или
хранившихся в условиях повышенной влажности, может отмечаться повышенная их
пораженность токсигенными микроскопическими грибами
из рода Фузариум и вследствие этого зерно приобретает ядовитые свойства. Продукты жизнедеятельности этих грибов не теряют своих свойств при термической обработке: выпечке хлеба, варке пищи и
т.д. Поэтому употребление в пищу такого зерна и продуктов его переработки может
стать причиной в некоторых случаях протекающих очень тяжело заболеваний людей
(алиментарно-токсическая алейкия, расстройства
функции кишечного тракта и др.).
В последние годы в урожае хлебов иногда
обнаруживают зерна с розовым и красным оттенками, особенно в зерне ржи, имеющие
внешние признаки, характерные для зерна, пораженного Фузариум. Однако следует
иметь в виду, что окраска зерна не всегда связана с его токсичностью. Такое
зерно является лишь "подозрительным" на токсичность.
С целью профилактики зерновых пищевых микотоксикозов людей зерно, подозрительное по вышеуказанным
показателям, должно исследоваться на токсичность биологическими методами.
Обязательным является испытание зерна на голубях. Биопроба
с культурой дрожжей желательна в качестве
подтверждающего теста.
I. Материал для
исследования
Исследованию подлежат:
1. Зерно нормальных сроков уборки, но
имеющее окрашенные в розовый или красный цвет зерна, что вызывает подозрение на
обсеменение их микроскопическими грибами из рода Фузариум, а также продукты
переработки такого зерна.
2. Зерно нормальных сроков уборки, но
хранившееся при неблагоприятных условиях, имеющее следы плесневения
(подозрительное при визуальном осмотре), а также продукты переработки такого
зерна.
II. Отбор зерна и
его паспортизация
Пробы отбираются от каждой поступающей
партии зерна, в соответствии с ГОСТом 3040-55.
Отобранные образцы должны быть
паспортизованы. На этикетках указывается:
а) место отбора зерна (область, район,
колхоз, совхоз и т.д.);
б) наименование зерновой культуры
(пшеница, рожь, просо и др.);
в) количество зерна, от которого взята
проба (или размер партии);
г) откуда взят образец (снят на корню, из
валков, со склада);
д) дата отбора пробы;
е) вес взятого образца;
ж) фамилия ответственного
за отбор проб.
Отобранные образцы направляют на исследование
в ближайшую санитарно-эпидемиологическую станцию.
III. Подготовка
материала для исследования
и получение экстракта липидов
Из поступившего на исследование зерна
отбирают среднюю пробу около 200 г, подсушивают ее при температуре 40 - 50°, из
них 100 г измельчают на лабораторной мельнице в течение двух минут и
экстрагируют диэтиловым эфиром в аппарате Соколета в течение 6 часов. Эфирный экстракт высушивают
безводным сернокислым натрием, отфильтровывают и эфир отгоняют на водной бане
при температуре не выше 40 - 50 °C. Полученный масляный остаток - свободные
липиды - используют для определения токсичности.
В каждом случае при проведении анализа
необходимо ставить контрольную пробу с доброкачественным зерном.
IV. Биологическая
проба на голубях
В качестве тест-объекта
используют голубей породы "Сизарь" в количестве не менее трех птиц на
каждый образец зерна. Кормление голубей проводят испытуемым зерном натощак из
расчета 5 г зерна на 1 кг веса птицы в течение 14 дней (кормят из чайной ложки,
насильственно открывая клюв). После кормления ставят в клетку воду, а через 2
часа обязательно обычный корм <*>.
--------------------------------
<*> Нормы питания голубей:
1. Вика
- 30%
2. Горох
- 20%
3. Ячмень
- 10%
4. Просо
- 20%
5. Пшеница - 15%
6. Конопля - 5%
-----------------
40 г
При отсутствии указанных ингредиентов можно
использовать следующие:
1. Пшено
- 20 г
2. Семечки - 10 г
3. Конопля - 5 г
4. Пшеница - 5 г
-----------------
40 г
Каждый голубь содержится в отдельной
клетке, на дно которой стелится светлая бумага, чтобы
не пропустить выделения рвотных масс и наличия жидкого стула.
В течение опыта следят за общим
состоянием и весом птицы. При отсутствии положительной реакции голубей в
течение опытного периода птиц забивают методом декапитации и производят макро-
и микроскопические изучения органов тканей (слизистых оболочек клюва, гортани,
пищевода, желудочно-кишечного тракта, обращая особое внимание на состояние
печени, почек, селезенки).
При наличии симптомов заболевания голубей
(рвота, понос) или гибели испытуемое зерно оценивается как токсичное.
При отсутствии клинической картины
заключение о зерне дают уже по патоморфологическим данным, исключая интеркурентные заболевания.
V. Определение
токсичности зерна при помощи чувствительного
к фузариотоксину штамма
дрожжей Saccharomyces fragilis
25Д
(ориентировочный метод)
В качестве тест-организма
для определения фузариотоксинов этот штамм дрожжей
был предложен Институтом микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболотного АН
УССР.
Для анализа используют 24-часовую
культуру дрожжей на сусловом агаре.
В пробирку с культурой дрожжей наливают 5 - 10 мл стерильной водопроводной
воды. Пробирку взбалтывают до образования суспензии. Суспензию готовят по
эталону N 5, что соответствует 5 единицам мутности (0,5 млрд./1 мл) стандарта
мутности. 1 - 2 мл суспензии наливают в заранее приготовленные чашки Петри и
заливают расплавленным и охлажденным до 60° сусло-агаром
из расчета 20 мл на чашку и тщательно перемешивают. На застывшую поверхность
среды помещают стерильные диски, вырезанные из фильтровальной бумаги, диаметром
5 мм, на которые наносят 0,01 мл липидов, выделенных из исследуемого зерна.
Чашки Петри помещают в термостат при
температуре 35 °C на сутки, после чего определяют результаты опыта. Степень
токсичности липидов определяют по диаметру стерильных зон: диаметр стерильной
зоны до 15 мм - зерно слаботоксичное; 15 - 25 мм - среднетоксичное; выше 25 мм
- резкотоксичное; контроль - отсутствие стерильных
зон.
VI. Заключение по
результатам исследования образца зерна
Заключение о пригодности исследуемого
образца зерна в питании дается на основании результатов биологических проб на
голубях и дрожжевых грибах.
1. Отсутствие клинической картины
заболевания у голубей и отсутствие зон задержки роста дрожжей на чашках Петри -
зерно нетоксичное.
2. Наличие симптомов заболевания у
голубей и наличие задержки роста дрожжей - зерно токсичное.
3. Наличие симптомов заболевания у
голубей при отсутствии зон задержки роста дрожжей - зерно токсичное.
4. Отсутствие симптомов заболевания у
голубей, но наличие зон задержки роста дрожжей - зерно сомнительное.
Необходимо повторить исследования с новой
пробой зерна данного образца.
Настоящие методические указания издаются
временно сроком на 2 года взамен "Методических указаний по определению
токсичности зерновых культур и продуктов их переработки в связи с поражением их
токсигенными грибами Фузариум", утвержденных
заместителем Главного санитарного врача СССР от 12.01.1967 за N 661-67.