Утверждаю
Начальник Главного
санитарно-эпидемиологического
управления Минздрава СССР
А.В.ПАВЛОВ
20 августа 1970 г. N 859-70
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОЦЕНКЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИХ СРЕДСТВ,
ПРЕДНАЗНАЧЕННЫХ ДЛЯ ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ОБЪЕКТОВ
И САНИТАРНОЙ ОБРАБОТКИ ЛЮДЕЙ
I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
1. Методические указания содержат
материалы по оценке эффективности дезинфицирующих средств, предназначенных для
санитарной обработки людей и обеззараживания белья, одежды, обуви, помещения и
воздуха в лабораторных, полупрактических и
практических условиях.
2. Оценка эффективности дезинфицирующих
средств предусматривает использование их при различных
методах обеззараживания: влажном, газовом, аэрозольном и камерном.
3. Использование единых методов
исследования эффективности дезинфицирующих средств на разных этапах их изучения
предоставит возможность сопоставлять получаемые результаты разными авторами.
4. Дезинфекционный процесс зависит от
ряда факторов: устойчивости микроорганизмов, плотности заражения, наличия
органических веществ, температуры, влажности, физико-химических свойств
обеззараживаемого объекта, концентрации используемого дезинфектанта,
времени его действия и т.п.
5. При разработке эффективных методов
дезинфекции особое внимание уделяют исходной плотности заражения объектов и
допустимого количества остаточной микрофлоры на них.
6. Методические указания предназначены
для научно-исследовательских и практических учреждений, занимающихся вопросами дезинфекции.
II. ТРЕБОВАНИЯ К
ДЕЗИНФЕКЦИОННЫМ АГЕНТАМ,
ИСПОЛЬЗУЕМЫМ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДАХ ДЕЗИНФЕКЦИИ
7. К химическим веществам, применяемым
для целей влажной дезинфекции, предъявляют следующие требования: хорошая
растворимость в воде, высокая эффективность в отношении микроорганизмов,
сохранение активности в присутствии органических веществ, малая токсичность для
людей и животных; отсутствие раздражающего запаха, маркости, должны быть
стойкими при хранении как в сухом виде, так и в виде
растворов.
8. Препараты, предназначаемые для газовой
дезинфекции, должны обладать широким спектром антимикробного действия и
обеззараживать предметы в относительно сухом состоянии при невысоких
температурах порядка 20 - 60 град. C.
9. Препараты, используемые при
аэрозольной дезинфекции, должны обладать широким спектром антимикробного
действия при различных температурных режимах и легко переводиться в высоко-дисперсное состояние.
III. ОЦЕНКА
ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИХ СРЕДСТВ
В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ
А. Методы
исследования эффективности растворов препаратов
10. Определение бактерицидных свойств
новых дезинфицирующих веществ проводят с использованием микробной взвеси или
зараженных микроорганизмами батистовых тест-объектов
по методике, утвержденной Министерством здравоохранения СССР 06.05.1968 N
739-68.
11. Для определения эффективности
дезинфицирующих средств, методов и режимов используют следующие виды
микроорганизмов:
а) кишечную палочку B. coli, как наиболее устойчивый вид из кишечной группы
бактерий;
б) золотистый стафилококк St. aureus, наиболее устойчивый
вид из кокковой группы микробов;
в) антракоид B.
anthracoides в споровой форме, как представитель
спорообразующих микробов.
12. Тест-культуры
проверяют систематически на морфологические, биохимические и культурные
свойства, кроме того, вегетативные формы проверяют на устойчивость к действию
фенола и хлорамина, а споровую культуру антракоида -
на устойчивость к пару и хлорамину.
13. Тест-культуры
должны отвечать следующей устойчивости:
а) кишечная палочка:
к фенолу 1:90 не менее 15 - 20 мин.;
к хлорамину 0,1% не менее 10 мин.;
б) золотистый стафилококк:
к фенолу 1:70 не менее 20 - 25 мин.;
к хлорамину 0,2% не менее 10 минут;
в) споры антракоида:
к пару с температурой 100 град. C 6 - 7
мин.;
к хлорамину 10% не менее 6 часов.
Устойчивость штаммов проверяют не реже 1
раза в месяц.
14. Музейные штаммы хранят при
температуре +4 град. C в виде сухой культуры в ампулах (после лиофильной сушки)
или на мясопептонном агаре (посев уколом) под слоем
стерильного вазелинового масла (толщина слоя 1,5 - 3 мм).
15. При испытании растворов препаратов
обязательно используют нейтрализаторы, в тех случаях, когда нейтрализатор
неизвестен, проводят исследования на наличие бактериостатических свойств.
16. Критерием эффективности
дезинфицирующих средств является 100% гибель тест-культур,
что устанавливают по отсутствию роста на питательных средах.
17. Разработанные с применением указанных
тест-культур методы и средства дезинфекции апробируют
на патогенных микроорганизмах, для уничтожения которых они предназначены
(туберкулез, дерматомикозы, вирусы, сибирская язва и др.).
Б. Методы
исследования эффективности газообразных
препаратов
18. Антимикробную активность газообразных дезинфектантов
оценивают по гибели тест-культур на тест-объектах. Проверку проводят при
оптимальных условиях относительной влажности и температуры.
19. Определение антимикробной активности
газообразных препаратов проводят в герметически закрывающихся емкостях (микроанаэростаты). Используемые емкости присоединяют к
вакуумному насосу для откачивания из них воздуха и к мановакуумметру
для измерения давления в них.
20. Время полной гибели микроорганизмов
определяют на тест-объектах при концентрации
испытуемого газа 1 г/л. Наиболее точным способом введения столь малых дозировок
является способ введения газа с учетом парциального давления.
21. При изучении проникающей способности
исследуемых препаратов инфицированные тест-объекты
помещают в пакетики размером 7 x 7 см, изготовленные из бязи, пергаментной
бумаги или герметически запаянной полиэтиленовой пленки. Учитывают разность в
скорости обеззараживания в указанных упаковках при прочих равных условиях
обеззараживания.
22. В качестве тест-объектов
используют материалы, для которых разрабатывают режим обеззараживания.
23. Эффективность дезинфекции при газовом
методе проверяют следующими бактериологическими методами:
а) посевом тест-объектов
в жидкую питательную среду;
б) посевом смыва с тест-объекта
в твердую питательную среду.
24. Критерием эффективности газовой
дезинфекции является 100% гибель тест-культур.
В. Методы
исследования эффективности дезинфектантов
в форме аэрозолей
25. Эффективность методов и средств
обеззараживания воздуха аэрозолями дезинфицирующих средств в лабораторных
условиях изучают в камерах различного объема: 0,5; 2, 6, 14 куб. м. В камере
распыляют бульонную культуру тест-микробов с помощью
аппаратуры, которая обеспечивает бактериальный аэрозоль с дисперсностью частиц
до 10 мю в 80%.
26. Аэрозоли дезинфицирующих веществ вводят в камеру путем их распыления или испарения.
Расчет активнодействующего вещества производят на единицу объема камеры (л, куб. м).
27. Контроль результатов обеззараживания
воздуха осуществляют седиментационным или фильтрационным методами.
Седиментационный метод основан на принципе самопроизвольного осаждения частиц
бактериального аэрозоля на питательные среды.
Чашечный метод. В различных точках камеры
расставляют чашки Петри с питательной средой. В зависимости от предполагаемой
бактериальной обсемененности воздуха чашки открывают на срок от 5 до 30 минут,
после чего помещают в термостат. Учет результатов - через 24 - 48 часов инкубирования в термостате при температуре 37 град. C.
Фильтрационный метод основан на принципе
поглощения частиц бактериального аэрозоля на поверхности фильтров или
питательной среды при пропускании через них определенного объема воздуха.
Улавливание микроорганизмов из опытной камеры путем направленного ударного
действия воздушной струи на твердые питательные среды производят в аппарате
Кротова.
28. Критерием эффективности
обеззараживания воздуха является 99,9% гибели тест-микробов
через 20 минут.
IV. ОЦЕНКА
ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИХ СРЕДСТВ
И МЕТОДОВ В ПОЛУПРОИЗВОДСТВЕННЫХ УСЛОВИЯХ
29. Определение эффективности исследуемых
дезинфицирующих средств и методов обеззараживания проводят на различных
объектах с учетом специфики использования их в условиях практики с учетом
методик, изложенных в Инструкции по определению бактерицидных свойств новых
дезинфицирующих средств, утвержденной Министерством здравоохранения СССР в 1968
г., N 737-68.
30. Критерием эффективности
обеззараживания различных объектов являются приведенные ниже показатели,
полученные при 3-кратном проведении опытов с одинаковыми результатами.
А.
Поверхности (помещение, мебель, оборудование,
транспорт, здания, технические сооружения и т.д.)
31. Тест-объектами
служат пластинки размером 10 x 10 см из материалов, встречающихся в практике,
или сами объекты, искусственно инфицированные тест-микробами. В каждом опыте
используют не менее 2-х тестов каждого вида поверхностей.
32.
Интенсивность заражения
рассчитывают исходя из плотности
7
заражения 1 x 10 /кв. см при капельном методе
нанесения культуры
для разработки режимов
обеззараживания пола и
других
горизонтальных поверхностей. При
разработке режимов
обеззараживания вертикальных
поверхностей и других
различных
объектов (оборудование, мебель, стены помещений и
т.д.) применяют
5
аэрозольный
метод заражения тест-поверхностей
из расчета 2 x 10 /
кв. см микробных
тел.
В качестве органической защиты микробов
используют 20 - 40% инактивированную сыворотку крупного рогатого скота или
лошадей, дефибринированную кровь, глицерин,
мясопептонный бульон и т.д.
33. За критерий эффективности принимают
гибель культур на 99,99% - 100% при условии выживания единичных микроорганизмов
не более чем в 10 - 20% взятых контрольных смывов.
Б. Воздух
34.
Заражение воздуха тест-микробами производят аэрозольным
6
путем. Плотность заражения не менее 1 x 10 /куб. м микробных тел
создают распылением
суточной бульонной культуры
золотистого
стафилококка или
2-млрд. бульонной суспензией спор антракоида из
расчета 300
мл/куб. м (по весу).
35. Критерием эффективности
обеззараживания воздуха является снижение общей микрофлоры на 95 - 100% через
20 минут после воздействия дезинфицирующего агента и 100% гибель патогенных
гемолитических кокков.
В. Белье
36. В соответствии с утвержденной
Инструкцией по определению бактерицидных свойств дезинфицирующих средств тест-объектами служат образцы соответствующей ткани,
размером 2 x 2 см, импрегнированные 2-млрд. взвесью тест-культуры с белковой
защитой, опыты проводят с обеззараживанием целых изделий не менее 1 кг по
сухому весу белья при расходе 4 л дезинфицирующего раствора.
37. Критерием обеззараживания белья
является 100% гибель тест-микробов.
Г. Одежда и обувь
При камерном методе обеззараживания
применяют в качестве тест-объектов образцы
соответствующих обрабатываемой одежды, материалов, импрегнированных 2-млрд.
взвесью тест-микробов. Опыты проводят в камерах, загруженных вещами в
соответствии с Инструкцией.
Критерием обеззараживания является 100%
гибель тест-культур.
Д. Посуда
Взятие проб и методы исследования такие
же, как и при работе с поверхностями. В качестве защиты используют пищевые
продукты полужидкой консистенции с примесью жиров.
Критерием
обеззараживания является 100% гибель тест-культуры,
7
при плотности
заражения 2 x 10 /кв. см.
Е. Кожные покровы
Предлагаемые для обеззараживания кожи
методы и средства должны быть совершенно безвредны для организма человека как при однократном, так и при повторных
применениях и не оказывать отрицательного влияния на трудовую деятельность.
Интенсивность заражения открытых частей
тела (на добровольцах)
5
составляет 2 x
10 /кв. см.
Методика взятия контрольных смывов и
бактериологического исследования та же, что и с поверхностей.
Критерием обеззараживания является 100%
гибель тест-микробов.
V. ОЦЕНКА
ЭФФЕКТИВНОСТИ РАЗРАБОТАННЫХ РЕЖИМОВ ДЕЗИНФЕКЦИИ
ПРИ ИСПЫТАНИИ В ПРАКТИЧЕСКИХ УСЛОВИЯХ
Разработанные режимы дезинфекции подлежат
проверке в широком практическом опыте.
Для оценки эффективности режима влажного
метода дезинфекции проводят не менее 10 опытов в практических условиях.
Контроль эффективности обеззараживания в
условиях практики осуществляют в зависимости от разработанного режима.
а) Путем исследования на кишечную палочку
по принятым методам.
Удовлетворительная оценка - отсутствие
роста кишечной палочки во всех исследованных пробах, взятых немедленно после
окончания экспозиции обеззараживания.
б) Путем исследования на общую микрофлору
с взятием проб до и после дезинфекции.
Забор проб производят с поверхности тех
предметов, которые играют преимущественную роль в механизме передачи инфекций.
В каждом опыте берут не менее 15 - 20 проб.
в) Путем использования опытных тест-объектов, инфицированных тест-культурами, или при
заражении тест-культурами непосредственно обеззараживаемых объектов.
Исходная интенсивность заражения каждого
обеззараживаемого теста или объекта та же, что и в полупрактических
условиях.
Удовлетворительная оценка - гибель тест-культур на 99,99% - 100% при условии выживаемости
отдельных тест-микробов не более чем в 10 - 20% взятых контрольных проб.
г) Путем исследований на возбудителей
инфекционных заболеваний (в очагах инфекционных больных).
Удовлетворительная оценка - отсутствие
роста возбудителя во всех взятых контрольных пробах, последние берут из расчета
15 - 20 смывов на площадь 1000 кв. м.
Проверка эффективности дезинфекции
газовым методом в практических условиях аналогична оценке эффективности
влажного метода дезинфекции.
Газовую дезинфекцию проводят:
1) в специальных камерах и аппаратах;
2) в приспособленных помещениях и
емкостях;
3) в герметизированных полиэтиленовых
мешках.
Проверка
эффективности аэрозольного метода дезинфекции в практических условиях
аналогична оценке эффективности влажного и газового методов дезинфекции. Критерием эффективности является 100% гибель микроорганизмов.
VI. ОЦЕНКА
ЭФФЕКТИВНОСТИ ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ
РАЗЛИЧНЫХ ОБЪЕКТОВ
1. Средства защиты (противогаз,
респираторы, маски всех марок, защитные очки) при применяемых методах
дезинфекции - влажном, газовом - критерием обеззараживания является 100% гибель
патогенной микрофлоры.
2. Кожа - критерием обеззараживания
является 100% гибель патогенной микрофлоры при влажном методе обработки.
3. Одежда и обувь - при камерном методе
обеззараживания критерием является 100% гибель патогенной микрофлоры и 99,99%
при использовании влажного или аэрозольного метода обеззараживания на людях.
4. Белье - критерием обеззараживания
является 100% гибель патогенной микрофлоры при методе кипячения, замачивании в
дезинфицирующих растворах и при использовании камерного метода обеззараживания.
5. Воздух - при дезинфекции аэрозольным или газовым методом критерием обеззараживания
является гибель гемолитической микрофлоры - 100% и 95% - общей микрофлоры.
6. Посуда - критерием обеззараживания
является 100% гибель патогенной микрофлоры при погружении в дезинфицирующий
раствор или при применении метода кипячения.
7. Помещения, предметы обстановки,
транспорт - критерием обеззараживания является 99,99% гибель патогенной
микрофлоры при влажном и аэрозольном методах обеззараживания.
8. Территория, здания и сооружения -
выборочная дезинфекция с применением различной распыливающей
техники, критерием обеззараживания является 99,99% гибель микроорганизмов при
условии выживания единичных микроорганизмов в 10 - 15% взятых смывов.
9. Выделения - при химическом методе
обеззараживания критерием является 100% гибель патогенной микрофлоры.