Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6273-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭЛЛИПСА В ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР
МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Действующее вещество -
N-(O-хлорфенилсульфонил)-N'-(4-диметиламино-6-(а-метил)пропилидениминоокси-1,3,5-триазин-2-ил)мочевина.
Cl N(CH
)
_____/ N_____/ 3 2 C H
N O S.
// \\_SO -NH-C-NH_// \\N 16 20 7 4
\ ___ / 2 ││ \ ___ /
CH
--- O N --- \
/ 3 М.м. 441,5.
O-N=C
\
C H
2 5
Синонимы: эллипс, хлорсульфоксилеметил.
Химически чистое вещество без запаха. Т.
пл. = 173 °C. Препарат плохо растворим в воде, растворим в спирте, ацетоне.
Применяется в качестве регулятора роста
растений и гербицида на зерновых культурах.
ПДК в воде - 0,005 мг/л, МДУ в пищевых
продуктах не допускается (в зерне хлебных злаков), ОБУВ в воздухе рабочей зоны
- 0,25 мг/куб. м.
2. Методика
определения эллипса в почве, в зерне
зерновых культур методом тонкослойной и
газожидкостной
хроматографии
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на определении эллипса в
почве, зерне зерновых культур способом тонкослойной и газожидкостной
хроматографии после экстракции препарата из проб и очистки экстракта.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Минимально детектируемое количество эллипса
- 0,2 - 0,5 мкг.
Диапазон определяемых концентраций:
почва: ГЖХ - 0,004 - 0,04, ТСХ - 0,01 -
0,1;
зерно зерновых культур: ГЖХ - 0,005 -
0,05, ТСХ - 0,01 - 0,1.
Среднее значение определения 90,0 -
95,0%.
Суммарная погрешность определения - +/-
16 - 20%.
2.2. Реактивы и
материалы
Эллипс (ВНИИХСЗР), 97-процентный
препарат.
Натрия сульфат, хч,
ГОСТ 4328-77.
Азот газообразный, ГОСТ 9283-74, в
баллоне с редуктором.
Ацетон, ч, ГОСТ
2603-79.
Хлороформ, ч,
ГОСТ 20015-74.
Кислота хлористоводородная, хч, ГОСТ 3118-78, 1 н водный раствор (1:1).
Этиловый спирт, 96-процентный, ТУ
6-09-1900-77.
Хромосорб-750, 3% OV-17.
Эфирный раствор диазометана.
О-толидин,
0,5-процентный раствор в ацетоне.
Азотнокислое серебро, чда,
ГОСТ 1277-81.
Аммиак водный, чда,
ГОСТ 3760-79.
Метанол, хч, ТУ
6-09-1709-77.
Калия гидрат окиси, ГОСТ 9285-78.
Гидразин-гидрат, хч, ГОСТ 5832-65.
Бензол, хч,
ГОСТ 5955-81.
Серебро азотнокислое, ГОСТ 1277-81.
О-толидин, ТУ
6-09-2232-75.
Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.
Кислота уксусная, хч,
ГОСТ 18290-72, 5-процентный водный раствор.
Кислота лимонная, хч,
ГОСТ 3652-74, 2-процентный водный раствор.
Бромфеноловый синий, чда, ТУ
6-09-3719-83.
Кальций хлористый, хч,
ГОСТ 4460-77.
Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.
Пластинки "Силуфол"
(Kavalier, ЧССР).
Диэтиловый эфир, хч, ГОСТ 6262-79.
Вата гигроскопическая.
2.3. Приборы,
посуда
Лампа ртутно-кварцевая ПРК-4, ТУ
16-535-280-74.
Весы аналитические ВЛА-200М.
Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ
25-11-917-76.
Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.
Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ
10396-75.
Колбы грушевидные, ГОСТ 25336-82,
вместимостью 50 - 100 мл.
Колбы мерные, цилиндры, мензурки,
пробирки, ГОСТ 1770-74.
Колбы конические плоскодонные, ГОСТ
25336-82.
Воронки химические, диаметр 5 - 6 см,
ГОСТ 25336-82.
Воронки делительные, ГОСТ 25336-82,
вместимостью 250 мл, 1 л.
Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 1, 5, 10 мл.
Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1; 0,2
мл.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.
Скальпель.
Камера для хроматографирования,
ГОСТ 25336-82.
Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.
Колба КГУ-2-1-100-14/23 ТС, ГОСТ
25336-82.
Колба ОГ-2-100-14/23 ТС, ГОСТ 25336-82.
Камера.
Холодильник ХШ-1-200-14/23 ХС, ГОСТ
25336-82.
Воронка ВК-50 ХС, ГОСТ 25336-82 (с
байпасом).
Трубка ТХ 45°-14/23, ГОСТ 25336-82.
Капилляр 14/23.
Шланг резиновый.
Микрошприц МШ-10, ТУ 2-833-106.
Стакан полиэтиленовый.
Мельница электрическая лабораторная, ТУ
46-22-236-79.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Отбор и подготовка проб
Отбор проб проводят в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,
пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом
СССР 21.08.79 N 2051-79.
2.4.2. Приготовление стандартного,
рабочих растворов эллипса
Стандартный раствор эллипса с
концентрацией 100 мкг/мл готовят растворением соответствующей навески препарата
(10,3 г) в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике. Годен к употреблению в течение 30 дней.
Рабочие растворы эллипса с концентрацией
2,5; 5,0; 10,0; 20,0 мкг/мл готовят в градуированных пробирках вместимостью 10
мл соответствующим разбавлением ацетоном стандартного раствора. Хранят рабочие
растворы эллипса в холодильнике. Годен к употреблению
в течение 3 - 5 дней.
2.4.3. Проявляющий реактив - бромфеноловый реагент
Смесь растворов бромфенолового
синего (БМФ) и азотнокислого серебра. Готовят два раствора: 1. 0,5%
водно-ацетоновый (1:3) раствор азотнокислого серебра. 2. 10 мл 0,05-процентного
раствора бромфенолового синего в ацетоне. Раствор 2
разбавляют раствором 1 до объема 100 мл. Хранят проявляющий реактив в темном
прохладном месте. Годен к употреблению в течение 3 - 5
дней.
После обработки хроматограмм
бромфеноловым синим реагентом осветляют фон
обработкой пластин 2-процентным водным раствором лимонной кислоты или
5-процентным водным раствором уксусной кислоты.
2.4.4. Проявляющий реактив - раствор о-толидина в ацетоне
Готовят 0,5% раствор о-толидина в ацетоне. После опрыскивания пластинки следует
облучать УФ-светом.
2.4.5. Получение диазометана
В круглодонную двугорлую колбу
вместимостью 100 мл, снабженную капельной воронкой с байпасом и обратным
холодильником, помещают 12 г (0,2 моля) гидрата окиси калия, 6 мл или 6,1 г
(0,12 моля) гидразингидрата и 6 мл или 5,3 г (0,17 моля) метанола. Затем,
охлаждая колбу до +5 °C смесью воды со льдом, начинают медленно прибавлять из
капельной воронки 10 мл или 14,9 г (0,12 моля) хлороформа, постепенно
увеличивая скорость, при этом реакционная масса приобретает желтую окраску.
Выделяющийся в ходе реакции диазометан через обратный холодильник, соединенный с
капилляром резиновым шлангом, поступает в двугорлую грушевидную колбу
вместимостью 100 мл и растворяется в 50 мл осушенного диэтилового
эфира. Предварительно эту колбу, заполненную диэтиловым
эфиром, укрепляют в полиэтиленовом стакане с водой и помещают в морозильную
камеру холодильника (Т. = -12 - 18 °C) на 6 - 8 часов.
По окончании прибавления хлороформа
реакционную колбу нагревают до +40 °C на водяной бане для полного удаления диазометана из реакционной массы. Когда реакционная масса и
поверхность холодильника обесцветятся, реакцию считают завершенной. Выход диазометана 25% от теоретического.
2.4.6. Подготовка пластин "Силуфол"
Пластинку "Силуфол"
помещают в хроматографическую камеру, содержащую
смесь растворителей ацетон - 25-процентный аммиак в соотношении 7:3 (об./об.). Глубина погружения в
растворитель составляет 0,5 см. После подъема фронта растворителя до верхнего
края пластинки ее вынимают из камеры и выдерживают на воздухе до испарения
растворителей. После этого пластинка готова к употреблению. Хранят
подготовленные пластинки в эксикаторе.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция и очистка
Зерно (30 - 50 г) предварительно
измельчают на электрической мельнице. Почву (50 - 100 г) просеивают через сито.
Помещают в коническую колбу, прибавляют ацетон или спирт и настаивают в течение
1 часа. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр. Остаток зерна (почвы) в колбе
встряхивают дважды с 50 мл растворителя в течение 10 - 15 мин. В объединенные
экстракты приливают 100 мл 1 н HCl, перемешивают,
фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку и экстрагируют трижды
хлороформом по 20 - 25 мл. Хлороформный экстракт пропускают через слой
безводного сульфата натрия и упаривают досуха.
2.6.2. Хроматографирование
Метод тонкослойной хроматографии
Сухой
остаток в колбе
растворяют в 1 мл ацетона, закрывают
колбу герметично
пробкой, перемешивают содержимое
и 0,2 мл
полученного раствора
наносят микропипеткой на подготовленную
пластинку "Силуфол". Рядом
с пробой наносят по 0,2 мл каждого
рабочего раствора
эллипса, что соответствует
содержанию в пятне
0,5; 1,0;
2,0; 4,0 мкг
препарата. Пластинку помещают
в
хроматографическую
камеру, куда за
10 - 15
мин. до
хроматографирования наливают подвижный растворитель: бензол:ацетон
(4:1) - 1
или гексан:ацетон (1:1) -
2 в таком количестве, чтобы
глубина погружения
пластинки в растворитель
составила 0,5 см.
После подъема фронта растворителя от линии старта
на высоту 10 см
хроматографирование
прекращают. Пластинку выдерживают
в вытяжном
шкафу до
испарения растворителей и
обрабатывают бромфеноловым
реагентом, затем
раствором лимонной (или
уксусной) кислоты. О
наличии эллипса
в пробе свидетельствует проявление
на
хроматограмме
серо-синего пятна препарата.
Или обрабатывают
пластинку раствором
о-толидина.
Сразу же после
опрыскивания
пластинку облучают
УФ-светом.
О наличии эллипса
в пробе
свидельствует
проявление на хроматограмме синего пятна
препарата.
Величины R
эллипса равны при использовании подвижной фазы
(1)
f
0,43, при
использовании подвижной фазы (2) - 0,63.
Метод прямого газохроматографического определения
3
- 5 мкл
ацетонового экстракта вводят в испаритель газового
хроматографа "Цвет-106" с
детектором постоянной скорости
рекомбинации
(ДПР).
Проводят хроматографирование
при следующих условиях:
Колонка стеклянная - 1000 x 3 мм.
Твердый носитель - Хромосорб-750.
Жидкая фаза - 5% OV-17.
Температура термостата колонки - 185 °C;
детектора - 250 °C;
испарителя - 200 °С.
Газ-носитель - азот особой чистоты.
Скорость движения диаграммной ленты - 240
мм/час.
Скорость потока азота через колонку - 60
мл/мин.
Скорость потока азота через детектор - 150
мл/мин.
-12
Рабочая шкала электрометра - 20 x 10 .
Время удерживания эллипса - 7 мин. 30 сек.
Метод газохроматографического определения
с использованием диазометана
К сухому остатку в грушевидной колбочке
приливают 5 мл эфирного раствора диазометана и
выдерживают 30 минут. Затем эфир отгоняют на ротационном испарителе досуха,
остаток растворяют в 1 мл ацетона и 1 - 5 мкл вводят
в испаритель газового хроматографа. Проводят хроматографирование
при следующих условиях:
Колонка стеклянная - 1000 x 3 мм.
Твердый носитель - Хромосорб-750.
Жидкая фаза - 5% OV-17.
Температура термостата колонки - 175 °C;
детектора - 200 °C;
испарителя - 200 °C.
Газ-носитель - азот особой чистоты.
Скорость движения диаграммной ленты - 240
мм/час.
Скорость потока азота через колонку - 60
мл/час.
Скорость потока азота через детектор - 150
мл/мин.
-12
Рабочая шкала электрометра - 20 x 10 .
Время удерживания эллипса - 5 мин. 40 сек.
2.7. Обработка
результатов анализа.
Газохроматографический метод
Для количественного анализа измеряют
площади пиков проб и стандартных растворов. Содержание эллипса в зерне пшеницы
рассчитывают по формуле:
S x G x V x V
пр ст
X = -----------------,
S x V x P
ст a
где:
X - содержание препарата "эллипс"
в зерне, мг/кг;
G - содержание эллипса в стандартном
растворе, нг;
S -
площадь пика анализируемой пробы, кв. мм;
пр
V - общий объем пробы, мл;
S -
площадь пика стандартного раствора, кв. мм;
ст
V -
объем хроматографируемой пробы, мкл;
a
P - навеска пробы, г.
Тонкослойная хроматография
Количественная оценка
проводится путей сравнения
площадей и
интенсивности
окраски пятен пробы и рабочих растворов.
Содержание
эллипса в анализируемой
пробе рассчитывают по
следующей
формуле:
A x V
X = ------,
V x P
1
где:
X - содержание эллипса в исследуемой пробе,
мг/кг;
A
- количество эллипса,
найденное путем сравнения
со
стандартами,
мкг;
V - конечный объем пробы, мл;
V
- объем аликвоты,
отобранной для хроматографирования,
мл.
1
При нанесении
всей пробы V = V.
1
P - навеска исследуемой пробы, г.
3. Требования
безопасности
Соблюдать все необходимые требования
безопасности при работе в химических лабораториях. При работе с ядовитыми и
взрывчатыми веществами реакции следует проводить только в вытяжном шкафу,
строго соблюдая правила производственной санитарии и личной гигиены.