Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6172-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФЕНОКСАПРОП-ЭТИЛА (ФУРОРЕ-СУПЕР)
В ВОДЕ,
ПОЧВЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ ПШЕНИЦЫ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Фуроре-супер - пума-супер. Хое 046360.
Химическое название:
(D+)-этил-(4-(6-хлор-2-бензоксазолилокси)фенокси)-пропионат.
N CH
// \ /\\ --- │ 3
│
││ \\---O---// \\--O-CH-C-OC H C
H ClNO
.
│
││ // \ ___ / \\
2 5 18 16 5
/\\ / \// --- O
Cl O
М.м. 361,8.
Бесцветное
кристаллическое вещество, температура
плавления
84,5 °C,
растворимость в воде
0,7 мг/л, растворим в этаноле,
н-гексане, циклогексане,
легко растворим в
ацетоне, толуоле,
-9
этилацетате.
Давление паров при 20 °C 5,3 x 10 гПа; летучесть
-5
при 20 °C 7,8 x
10 мг/куб. м.
Основной метаболит фуроре
- (D+)-2-(4-(6-хлор-2-
бензоксазолилокси)фенокси)-пропионовая кислота (Хое 088406).
N CH
// \ /\\ --- │ 3
│ ││ \\---O---// \\---O--CH-C-OH C
H ClN.
│ ││ /
\ ___ / \\ 16 12
/\\ / \ / --- O
Cl O М.м. 333,7.
Продукт
гидролиза фуроре -
6-хлор-2,3-дигидробензоксазол-2-он
(Хое
054014).
H
│ C H ClNO .
N 7
4 2
// \ /\\
│
││ \\C=O М.м. 169,6.
│
││ /
/\\ / \ /
Cl O
Хроматографируемое ГЖХ производное фуроре - 3-ацетил-6-хлор-
2,3-дигидробензоксазол-2-он
(Хое 083312).
H C-C=O
3
│ C H ClNO .
N 9
6 3
//
\ /\\
│
││ \\C=O М.м. 211,6.
│
││ /
/\\ / \ /
Cl O
2. Методика
определения фуроре-супер в окружающей среде
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Определение основано на извлечении
препарата органическими растворителями, очистке экстрактов активированным углем
и последующем анализе методом реакционной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) на
неподвижной фазе XE-60 с детектором по захвату электронов (ДЭЗ или ДПР) или хроматографировании в тонком слое (ТСХ) пластинок "Силуфол" с обнаружением препарата по реакции с
2,6-дибром-N-хлорхинонимином или бромфеноловым
синим.
2.1.2. Метрологическая характеристика
Метрологическая характеристика
определения фуроре приведена в таблице 2.1.
Таблица 2.1
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУРОРЕ
ТОНКОСЛОЙНОЙ И РЕАКЦИОННОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ
ХРОМАТОГРАФИЕЙ
(P = 0,95, N = 5 - 7)
┌─────────────┬─────┬────────────┬────────────┬─────────────┬─────────────┐
│
Исследуемый │Метод│ Предел │
Среднее │ Стандарт.
│Доверительный│
│ объект
│ │обнаружения,│ значение
│отклонение, %│ интервал, % │
│ │ │мг/л, мг/кг │определения,│ │ │
│ │ │ │ %
│ │ │
├─────────────┼─────┼────────────┼────────────┼─────────────┼─────────────┤
│Вода │ТСХ │0,0005 │90 │9,3 │14,9 │
│-"- │ГЖХ │0,0025 │72 │5,4 │5,7 │
│Почва │ТСХ │0,05 │84 │12,6 │17,3 │
│-"- │ГЖХ │0,05 │75 │8,1 │13,0 │
│Зеленая
масса│ │ │ │ │ │
│растений │ТСХ
│0,1 │91 │17,1 │21,4 │
│Пшеница │ТСХ │0,2 │84 │12,7 │8,5 │
└─────────────┴─────┴────────────┴────────────┴─────────────┴─────────────┘
2.1.3. Избирательность метода
Рекомендуемые в методике условия очистки
экстрактов, применение метода ТСХ с избирательным проявляющим реагентом
2,6-дибром-N-хлорхинонимином или метода реакционной
ГЖХ дают возможность идентифицировать исследуемое соединение в присутствии
хлор-, фосфорсодержащих пестицидов, триазинов,
производных фенилмочевины, синтетических пиретроидов.
2.2. Реактивы и
растворы
Общие для ТСХ и ГЖХ
Ацетон, чда, ТУ
6-09-3313-86.
Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.
Бензол, хч,
ГОСТ 5955-81.
Хлороформ, хч,
ГОСТ 20015-74.
Хлороводородная кислота, хч, ГОСТ 3118-77,
концентрированная.
Активированный уголь марки ОУ-"А".
Вода дистиллированная.
Натрия сульфат безводный, хч, ГОСТ 4166-81.
Фильтры бумажные беззольные "красная
лента", ТУ 6-09-1678-77.
Фильтры бумажные беззольные "синяя
лента", ТУ 6-09-1678-77.
Фуроре-супер (98%).
Основной стандартный раствор фуроре-супер (ОСР): 10 мг фуроре-супер растворяют в 100 мл
ацетона (100 мкг/мл). Хранить в холодильнике не более 3-х месяцев.
К методу ГЖХ
Неподвижная фаза 3% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS.
Азот газообразный, ГОСТ 9293-74, в
баллоне с редуктором.
Трифторуксусный ангидрид, ТУ
6-09-4135-75.
Пиридин, ч, ГОСТ
13647-78.
Рабочие стандартные растворы фуроре-супер 10, 5, 2 мкг/мл готовят разведением ОСР
ацетоном. Хранить в холодильнике не более 2-х недель.
Хроматографируемое производное фуроре (Хое
083312), хч.
Основной стандартный раствор Хое 083312 100 мкг/мл в ацетоне.
Рабочие стандартные растворы Хое 083312 2, 1, 0,5 мкг/мл готовят разведением ОСР
раствора Хое 083312 ацетоном. (При отсутствии Хое 083312 стандарт хроматографируемого
производного фуроре готовят одновременно с
анализируемым образцом, гидролизуя и ацилируя рабочие стандартные растворы фуроре.)
К методу ТСХ
Стандартные пластинки "Силуфол" (Хемапол,
Чехословакия) или отечественные пластинки "Армсорб".
Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-3719-83.
Серебро азотнокислое, ГОСТ 1277-81.
Кислота лимонная, ГОСТ 3652-74, 2-процентный
водный раствор (или уксусная ледяная кислота, хч,
ГОСТ 18270-72, 10-процентный водный раствор).
2,6-дибром-N-хлорхинонимин,
хч, ТУ 6-09-06-951-79.
Едкое кали, ч,
ГОСТ 9285-78.
Проявляющие реагенты:
1. Реагент на основе бромфенолового
синего (БФС): в 10 мл ацетона растворяют 0,05 г БФС и доводят до 100 мл
1-процентным раствором нитрата серебра в водном ацетоне (ацетон - вода 3:1).
Хранят в темной склянке.
Через 5 мин. после опрыскивания хроматограмму обрабатывают 2-процентным раствором лимонной
или 10-процентным раствором уксусной кислоты.
2. Реагент на основе 2,6-дибром-N-хлорхинонимина: пластинку после хроматографирования
нагревают в течение 10 мин. при 150 °C, a затем опрыскивают свежеприготовленным
0,5-процентным раствором 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в н-гексане
и сразу же обрабатывают 0,5-процентным водным раствором едкого кали.
2.3. Приборы,
аппаратура, посуда
Общие для ТСХ и ГЖХ
Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ
64-1-1081-73.
Баня водяная электрическая, ТУ
64-1-2850-76.
Весы аналитические лабораторные, ГОСТ
19491-74.
Весы технические ВЛКТ-500 г М.
Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ
25-11-917-76.
Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ
10696-75.
Колбы грушевидные на шлифах емкостью 50,
100 мл, ГОСТ 10394-72.
Колбы плоскодонные конические емкостью
50, 100, 250 мл, ГОСТ 1770-74.
Колбы мерные емкостью 100, 250 мл, ГОСТ
1770-74.
Цилиндры мерные емкостью 50, 100 мл, ГОСТ
1770-74.
Воронки делительные емкостью 250, 500 мл,
ГОСТ 8613-81.
Воронки химические, 0,60 мм, ГОСТ
8613-81.
Пипетки емкостью 0,1, 1, ГОСТ 1770-74.
Индикаторная бумага универсальная, ТУ
6-09-1181-71.
К методу ГЖХ
Газовый хроматограф серии
"Цвет" или аналогичный с ДЭЗ (ДПР).
Колбонагреватели для круглодонных колб (50 мл) или электроплита с закрытой спиралью и
терморегулятором.
Холодильник Либиха 200 - 400 мм, ГОСТ
9499-70.
Колбы грушевидные емкостью 25, 50 мл,
ГОСТ 10394-72.
Пробирки мерные емкостью 5, 10 мл, ГОСТ
1770-74.
Микрошприцы на 10 мкл МШ-10М, ТУ 2-833-106.
Колонка стеклянная, длина 1 м, диаметр
3,5 см.
Секундомер, ГОСТ 5772-79.
Термометр ртутный на 200 °C, ГОСТ
16590-71.
К методу ТСХ
Камера хроматографическая,
ГОСТ 10565-74, или аналогичная.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74.
Камера для опрыскивания - колпак для
насосов с кнопкой диаметром 160 - 200 мм, высотой 220 мм, ТУ 25-11-1022-75.
Капиллярные пипетки для нанесения проб.
2.4. Проведение
определения
2.4.1. Отбор проб
Отбор проб производят в соответствии с
требованиями, изложенными в "Унифицированных правилах отбора проб
сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды
для определения микроколичеств пестицидов",
утвержденных заместителем Главного государственного санитарного врача СССР (N
2051-79 от 21.08.79).
2.4.2. Экстракция
2.4.2.1. Вода. 200 мл воды помещают в
делительную воронку, подкисляют концентрированной хлористоводородной кислотой
до pH = 4 - 5 и экстрагируют фуроре-супер
хлороформом, предварительно насыщенным водой, 3 раза по 30 мл, осторожно
встряхивая по 3 - 4 минуты. Объединенный хлороформный экстракт отфильтровывают
в колбу для отгонки растворителей через обезжиренный ватный тампон (или
бумажный фильтр "красная лента") с помещенным на него слоем
безводного сульфата натрия (15 г). Отгоняют хлороформ на ротационном испарителе
под вакуумом при температуре водяной бани не более 45 °C до ~= 0,5 мл. Остаток
упаривают досуха при комнатной температуре. Далее проводят определение, как
описано в п. 2.4.3.
2.4.2.2. Почва. 50 г почвы помещают в
коническую колбу, заливают 100 мл ацетона и экстрагируют 30 мин. на аппарате
для встряхивания. Экстракт отфильтровывают через бумажный фильтр "красная
лента" в делительную воронку емкостью 500 мл. Экстракцию повторяют дважды
с 30 мл растворителя в течение 15 мин., экстракты объединяют в делительной
воронке.
Для очистки к полученному ацетоновому
экстракту приливают дистиллированной воды (по объему примерно в два раза
больше, чем объем экстракта) и экстрагируют препарат хлороформом трижды по 50,
30, 30 мл, осторожно встряхивая 3 - 4 мин.
Объединенный хлороформный экстракт
отфильтровывают в колбу для отгонки растворителей через обезжиренный ватный
тампон (или бумажный фильтр "красная лента") с помещенным на него
слоем безводного сульфата натрия (15 г) и концентрируют на ротационном
вакуумном испарителе до 0,5 мл. Остаток упаривают досуха при комнатной
температуре. Далее проводят очистку активированным углем, как описано в п.
2.4.2.3.
2.4.2.3. Растительный материал (зеленая
масса пшеницы)
Измельченные листья или зеленые колоски
пшеницы (20 г) экстрагируют 50 мл смеси гексан -
ацетон 9:1 в течение 30 мин. на аппарате для встряхивания. Экстракцию повторяют
дважды. Экстракты объединяют, сушат над безводным сульфатом натрия, упаривают
на ротационном испарителе и проводят очистку активированным углем.
Для проведения очистки сухой остаток
растворяют в 10 мл смеси бензол - ацетон 1:3 и добавляют 0,1 г активированного
угля, хорошо перемешивают. Колбу опускают в стакан с горячей водой (60 °C) на
20 мин., затем раствор отфильтровывают через фильтр "красная лента" в
колбу для отгонки растворителей. Уголь дважды промывают смесью бензол - ацетон
1:3 по 5 мл, присоединяют смывы к фильтрату. Объединенный фильтрат упаривают
досуха на ротационном испарителе при температуре не более 40 °C.
2.4.2.4. Пшеница. Из измельченного до 1 -
2 мм зерна (навеска 25 г) экстрагируют смесью ацетон - вода (1:1) на аппарате
для встряхивания в течение 30 мин. Дают отстояться 15 - 20 мин. и сливают
растворитель, фильтруя через фильтр "красная лента". Промывают пробу
дважды смесью ацетон - вода (1:1) по 20 мл, энергично встряхивая и давая
отстояться по 20 мин. Объединяют отфильтрованные экстракт и смывы, переносят в
делительную воронку и прибавляют 80 мл воды. Экстрагируют гексаном
трижды по 50 мл, сливая верхний (гексановый) слой
через безводный сульфат натрия (10 - 15 г на фильтровальной воронке с
обезжиренной ватой) в колбу для отгонки. Упаривают растворитель под вакуумом на
ротационном испарителе при температуре бани не более 45 °C до ~= 0,5 мл,
остаток упаривают досуха при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в
1 мл ацетона, берут аликвоту (0,1 - 0,2 мл) и
проводят определение методом ТСХ, как описано в п. 2.4.3.1.
2.4.3. Хроматографический
анализ
2.4.3.1. Определение методом ТСХ
Полученный
после упаривания сухой остаток растворяют в 1,0 мл
ацетона или диэтилового эфира, аликвоту этого раствора (0,1 мл)
количественно наносят
на хроматографическую
пластинку. Справа и
слева от пробы наносят
рабочие стандартные растворы фуроре (0,2 -
15 мкг). Пластинку
помещают в камеру для хроматографирования, в
которую за
30 мин. до хроматографирования
наливают смесь
растворителей н-гексан - ацетон 3:1. После того как подвижная фаза
поднимется на
10 см, пластинку
вынимают из камеры,
дают
растворителю испариться и
обрабатывают либо проявляющим реагентом
N 1 (на
основе БФС), либо
реагентом N 2
(на основе
2,6-дибром-N-хлорхинонимина). Фуроре и его кислотное производное
проявляются обоими реагентами в виде голубых пятен.
R фуроре 0,6
f
(идет с
фронтом), R кислотного
производного фуроре 0,3.
f
Реагент N 2 специфичнее и чувствительнее
реагента N 1. Предел обнаружения препарата реагентом N 1 - 1 мкг, реагентом N 2
- 0,2 мкг на пластинке.
Количество фуроре
в пробе определяют сравнением интенсивности окраски и площади пятна пробы и
стандарта. Пропорциональная зависимость между концентрацией и площадью пятна
соблюдается в интервале 0,2 - 20 мкг.
Содержание фуроре
(X) в пробе вычисляют по формуле:
A x V
X = ------,
P x V
a
где:
X - количество фуроре в пробе, мг/кг (мг/л);
A
- количество фуроре,
найденное путем сравнения
со
стандартными
растворами препарата, мг;
V - общий объем анализируемой пробы, мл;
V -
объем аликвоты, мл;
a
P - масса пробы, взятой для анализа, кг (л).
2.4.3.2. Определение методом реакционной ГЖХ
Получение производного
Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона,
отбирают аликвоту <*> (0,1 - 0,5 мл),
прибавляют 1 мл трифторуксусного ангидрида, 100 мкл
пиридина, присоединяют колбу к обратному холодильнику и нагревают в течение 3
часов на колбонагревателе при температуре 130 °C.
Затем отсоединяют колбу от холодильника и после того, как она остынет, отдувают
остаток ангидрида током азота. К остатку в колбе прибавляют 1 мл бензола, 9 мл
дистиллированной воды и переносят все в мерную пробирку. Для анализа методом
ГЖХ отбирают аликвоту (1 - 3 мкл)
из верхнего бензольного слоя.
--------------------------------
<*> Примечание: при определении в
воде берут всю пробу.
Условия ГЖХ анализа
Измерения проводят на хроматографе с ДЭЗ
(ДПР).
Колонка стеклянная, длина 1 м, диаметр
3,5 мм.
Фаза 3% XE-60 на хроматоне
N-AW-DMCS.
Температура колонки - 160 °C, испарителя
- 200 °C, детектора - 230 °C.
Скорость газа-носителя азота 65 мл/мин.
Скорость продувочного газа (ДПР) азота
150 мл/мин.
-12
Рабочая шкала электрометра 2 x 10 .
Скорость диаграммной ленты 240 мм/час.
Объем вводимой пробы 1 - 3 мкл.
Линейный диапазон определения 0,2 - 10 нг.
Количественное определение проводят
методом соотношения со стандартом по высоте хроматографируемого
пика.
Содержание фуроре
в пробе рассчитывают по формуле:
C x V
x H x V
ст ст пр пр
X = ---------------------,
H
x V x P
ст a
где:
X - содержание фуроре
в пробе, мг/кг (мг/л);
C -
содержание вещества в стандарте, мкг/мл;
ст
V -
объем стандарта, введенный в хроматограф, мкл;
ст
V -
общий объем анализируемой пробы, мл;
пр
V -
объем анализируемой пробы, введенный в хроматограф, мкл;
a
H -
высота пика стандарта, мм;
ст
H -
высота пика анализируемой пробы, мм;
пр
P - масса (объем) пробы, взятой для
анализа.
3. Требования
безопасности
Соблюдаются требования безопасности,
рекомендуемые для работы с органическими растворителями и токсическими
веществами.