Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6113-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БИЦИКЛАДА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ
ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ
(Дополнение к Методическим указаниям N 2085-79)
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Бициклад - 0,0-диметил-0-(6-хлоробицикло/3,2,0/гептадиен-1,5-ил)фосфат. Относится к классу фосфорорганических инсектицидов.
Структурная формула:
┌───┬───┬┬───────OP
(OCH ) C H ClO P.
│
│ ││ ││ 3 2 9 12 4
│
_____│ O
\\ /
\
М.м. 250,5.
\/
Cl
Синонимы - гептенофос,
хостаквик.
Химически чистое вещество бициклада - жидкость, T кип. - 90 - 91 °C.
Препарат хорошо растворим в ацетоне,
метаноле, ксилоле (при 25 °C до 1000 г/л), хуже - в н-гексане
(130 г/л).
2. Методика
определения
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении бициклада из сырья облепихи и шиповника 50% водным
ацетоном. Очистка экстракта проводится ацетонитрилом
и на колонке с активированным углем с последующим количественным определением
методом ТСХ на пластинках "Силуфол".
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Минимально детектируемое количество - 1,5 - 2,0 мкг
Нижний предел обнаружения - 0,04 мг/кг
Размах варьирования - 66 - 70%
Среднее значение определения - 68,6%
Стандартное отклонение - +/- 2,3%
Доверительный интервал - +/- 5,74
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон ч, ГОСТ
2603-79.
Гексан ч, хч, ТУ 6-09-3375-78.
Ацетонитрил ч, ТУ 6-09-3534-74.
Хлороформ ч,
ГОСТ 20015-74.
Натрий сернокислый безводный,
свежепрокаленный, ГОСТ 4166-76.
Аммиак, 25% водный р-р, ч, ГОСТ 3760-79.
Серебро азотнокислое, ГОСТ 1277-81.
Пластинки "Силуфол"
UV-254.
Уголь активированный ОУ-2.
Проявляющий реагент:
1. 0,25 г азотнокислого серебра
растворяют в 2,5 мл дистиллированной воды, прибавляют 3,5 мл 25% раствора
аммиака (плотностью 0,9 г/куб. см) и доводят объем до 50 мл ацетоном.
Стандартный раствор бициклада
в гексане с содержанием 1 мг/мл. Хранят в
холодильнике.
2.3. Приборы и
посуда
Колбы плоскодонные 300 мл, ГОСТ 25336-82.
Колбы круглодонные со шлифами для отгонки
растворителей, ГОСТ 25336-82.
Делительные воронки на 250 мл, ГОСТ
25336-82.
Воронки, ГОСТ 25336-82.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74.
Колонки для адсорбционной хроматографии
(300 x 15 мм).
Аппарат для встряхивания.
Испаритель ротационный вакуумный, МРТУ
42-2589-66.
Камера хроматографическая,
ГОСТ 25336-82.
Микропипетки 0,1 - 0,2 мм, ГОСТ 20292-74.
Лампа УФ кварцевая, ТУ 16-535-280-74 или
аналогичная.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.
2.4. Отбор проб и
подготовка к определению
2.4.1. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с
требованиями, изложенными в "Унифицированных правилах отбора проб
сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды
для определения микроколичеств пестицидов",
утвержденных Минздравом СССР, N 2051-79, 21.08.1979.
Для анализа отбирают среднюю пробу.
2.4.2. Подготовка пластинок "Силуфол"
Перед нанесением экстракта пластинки
"Силуфол" прогоняем в системе аммиак -
ацетон (1:1).
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция. Анализируемые пробы -
навески (5 г сухого, 50 г сырого сырья) помещают в конические колбы емкостью
300 мл, заливают 50 мл (сухое сырье) или 200 мл (сырое сырье) 50% водного
ацетона и помещают на аппарат для встряхивания на 2,5 - 3 часа. Затем пробы
фильтруют через бумажный фильтр, остаток в колбе и на фильтре промывают дважды
30 мл 50% водного ацетона. Водно-ацетоновые экстракты объединяют и переносят в
делительную воронку. Бициклад из водного ацетона
трижды экстрагируют хлороформом порциями по 30 мл. Далее хлороформную фракцию
фильтруют в круглодонную колбу через безводный сернокислый натрий
и хлороформ отгоняют на роторном испарителе при температуре 50 °C. К сухому
экстрактному остатку приливают 5 мл ацетонитрила и
встряхивают до полного растворения. Затем приливают 100 мл воды и трижды
экстрагируют н-гексаном порциями по 30 мл. Собирают гексановую фракцию. Н-гексан отгоняют
на роторном испарителе до 1 - 2 мл. Дальнейшую очистку проводят на колонке с
активированным углем.
2.5.2. Очистка на колонке. Колонки
диаметром 15 мм заполняют 2 г активированного угля и промывают 30 мл
хлороформа, который отбрасывается. Хлороформный экстракт из круглодонной колбы
переносят на колонку и элюируют 60 - 70 мл
хлороформа.
2.5.3. Хроматографирование
Хлороформ
отгоняют на ротационном испарителе, сухой остаток
растворяют в
0,1 - 0,2
мл н-гексана и
наносят полностью на
хроматографическую
пластинку. Параллельно на
пластинку наносят
серию стандартных
растворов бициклада с содержанием 2, 4, 5...10
мкг. Пластинку
помещают в хроматографическую
камеру с подвижным
растворителем гексан:ацетон (2:1).
После подъема фронта
растворителя на
10 см пластинку извлекают из камеры и сушат на
воздухе. После испарения
растворителя пластинку обрабатывают
проявляющим реагентом и подвергают ультрафиолетовому облучению (20
мин.). Бициклад
проявляется в виде темных пятен на светлом фоне с
R 0,50 +/- 0,05. Линейный диапазон определения
2 - 10 мкг.
f
2.6. Обработка
результатов
Количественное определение бициклада проводят путем сравнения размера и интенсивности
окраски пятен бициклада в рабочей пробе с пятнами
стандарта.
Содержание препарата в анализируемой
пробе рассчитывают по формуле:
X
Y = -,
M
где:
Y - искомое количество бициклада в пробе;
X - количество бициклада
в навеске;
M - вес навески, кг.
3. Требования
техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила
техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными
веществами, электронагревательными приборами.