Утверждаю

Начальник Главного управления

эпидемиологии и гигиены

Министерства здравоохранения РСФСР

Р.И.ХАЛИТОВ

17 августа 1990 года

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПО ПРОВЕДЕНИЮ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ПРИ ПИЩЕВЫХ ОТРАВЛЕНИЯХ <*>

 

--------------------------------

<*> Разработаны специалистами Красноярской краевой санэпидстанции и одобрены Лабораторным Советом при Главном управлении эпидемиологии и гигиены Минздрава РСФСР 28.05.90.

 

Настоящие Методические рекомендации разработаны на основании нормативно-технических документов:

1. Инструкция о порядке расследования, учета и проведения лабораторных исследований в учреждениях санитарно-эпидемиологической службы при пищевых отравлениях, утв. МЗ СССР 20 декабря 1973 г. N 1135-73.

2. Методические указания по диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями, утв. МЗ СССР 17 декабря 1984 г. N 04-23/3-84.

3. Письмо ГСЭУ МЗ РСФСР по количественному определению стафилококков в пищевых продуктах, N 08 с/б-3-1310 от 14.06.75.

4. ГОСТ 10444.7-86 "Продукты пищевые. Методы выявления ботулинических токсинов и C. botulinum".

5. ГОСТ 10444.9-88 "Продукты пищевые. Метод определения C. perfringens".

6. ГОСТ 10444.8-88 "Продукты пищевые. Метод определения B. cereus".

Настоящие Методические рекомендации имеют цель при ограниченных возможностях лабораторий выполнить максимальный объем исследований по сокращенной схеме на все потенциально опасные, известные виды микроорганизмов - возбудителей пищевых отравлений (при наличии методик исследований) качественно или количественно. Для эффективного использования результатов бактериологических исследований при пищевых отравлениях необходимо иметь в виду:

1. Не следует направлять на бактериологическое исследование продукты и другие материалы, неблагоприятные по своей природе для развития микроорганизмов (продукты, содержащие высокие концентрации сахара, соли, а также крупы, хлеб, сало, при подозрении на ботулизм - продукты, хорошо аэрируемые и т.п.).

2. В сопроводительном документе к материалам, направляемым на бактериологическое исследование, необходимо указать предполагаемый диагноз (этиологию отравления) и цель исследования (на какие группы возбудителей проводить исследование).

3. Материалы от пострадавших забирают и направляют на бактериологическое исследование в соответствии с клиникой заболевания и его патогенезом: так при подозрении на стафилококковую этиологию от пострадавших нецелесообразно забирать кровь на гемокультуру и серологические исследования; при подозрении на ботулизм - нецелесообразно направлять материалы для исследования на патогенные и условно-патогенные энтеробактерии и т.д.

4. Определение абсолютных патогенов (шигелл, сальмонелл, возбудителей ботулизма и др.) во всех материалах проводят качественно: определение условно-патогенных возбудителей (энтеробактерии, стафилококк, B. cereus, Cl. perfringens и др.) в некоторых материалах от больных (фекалии, мазки из зева и носа на стафилококковое носительство) и пищевых продуктах - количественно; в смывах - качественно.

5. Исследование проб воды, пищевых продуктов целесообразно проводить на соответствие ГОСТов, др. НТД (при соблюдении правил хранения и реализации) и параллельно на патогенную и условно-патогенную микрофлору в зависимости от цели исследования, указанной в направлении. Суточные пробы пищевых продуктов исследуют только на патогенную микрофлору.

Отбор проб, их доставку и подготовку к исследованию проводят по Инструкции МЗ СССР ... N 1135-73.

6. При выделении однотипных культур из материалов от больных и из внешней среды проводят их углубленное изучение с целью установления идентичности (определяют серо-, био-, фаго-, колициновары, антибиотикорезистентность, термоустойчивость и другие эпид. маркеры).

7. Обращаем внимание, что предлагаемые схемы рассчитаны на проведение бактериологических исследований. Поэтому необходимость проведения серологических исследований устанавливается в каждом конкретном случае по показаниям.

Настоящие Рекомендации включают 2 раздела:

1. Исследование проб пищевых продуктов (Приложение N 1).

2. Исследование материалов от пострадавших (Приложение N 2).

 

 

 

 

 

Приложение N 1

 

ИССЛЕДОВАНИЕ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ

 

    Готовят  исходное разведение продукта 1:10 (для твердых продуктов: 15 г

продукта + 135 мл 0,1-процентной  пептонной  воды  или  физ. раствора,  для

жидких продуктов:  10 мл продукта + 90 мл 0,1-процентной пептонной воды или

физ. раствора) и из него в  9 мл  0,1-процентной  пептонной  воды или  физ.

                                         -3     -5

раствора два дополнительных разведения 10   и 10  .

    При  целенаправленном  исследовании  на   C. perfringens  дополнительно

                     -8    -9    -10

готовят разведения 10  , 10  , 10   .

Посев в среды обогащения проводят в больших объемах: 25 мл/г цельного продукта (для твердых продуктов необходимо предварительно размельчить в ступке) в 100 мл хлористо-магниевой среды обычной концентрации или 25 мл хлористо-магниевой среды двойной концентрации.

5 мл/г - в 25 мл желчного бульона, 30 мл/г - в 120 - 150 мл среды Китт-Тароцци и т.д.

Исследование на C. botulinum и C. perfringens проводят по клинико-эпидемиологическим показаниям.

Дальнейший ход исследования и идентификацию на все виды возбудителей проводят в соответствии с вышеперечисленной НТД.

 

ПРИМЕРНАЯ СХЕМА ПОСЕВА ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ

 

                 Твердый продукт            Жидкий продукт

                       ││                         ││

┌───────────┐   25 гр  ││                         ││ 25 мл  ┌────────────┐

│100 мл     │<─────────┤│                         │├───────>│  100 мл ХМ │

│хлористо-  │          ││                         ││        │   обычн.   │

│магниевой  │          ││                         ││        │концентрации│

│обыч. конц.│  15 гр продукта + 135 мл  10 мл прод. + 90 мл │ или 25 мл  │

└───────────┘  0,1-процентного ПВ       0,1-процентного ПВ  │  двойной   │

               или физ. р-ра            или физ. р-ра       └────────────┘

┌──────────────┐       ││                         ││ 5 мл  ┌──────────────┐

│     5 мл     │  5 гр ││                         │├──────>│    25 мл     │

│10-процентного│<──────┘│                         │└────┐  │10-процентного│

│ желч. бульона│        \/                        \/    │  │  желч. б-на  │

└──────────────┘      ┌────┐  0,1 мл    0,1 мл  ┌────┐  │  └──────────────┘

          ┌───────────┤  -1├─────────┬──────────┤  -1│  │

          │           │10  │         │          │10  │  │

          │ по 0,1 мл └────┘         │          └────┘  │ по 0,1 мл

          \/                         │                  \/

  ──┬─────┬─────┬───                 │          ──┬─────┬─────┬───

    \/    \/    \/                ┌──┴─┐          \/    \/    \/

  ┌────┐┌─────┐┌───┐       ┌──────┤    │        ┌────┐┌─────┐┌───┐

  │Эндо││Плоск││ВСА│       │      ├────┤        │Эндо││Плоск││ВСА│

  └────┘└─────┘└───┘       │      │  -3│        └────┘└─────┘└───┘

                по 0,1 мл  │      │10  │

             ┌─────────────┘      └──┬─┘

             \/                      │   9,9 мл 0,1-процентного

──┬─────┬───┬────┬────┬────          │   ПВ или физ. р-ра

  \/    \/  \/   \/   \/             │

┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐          │ 0,1 мл

│Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│          │

└────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘          \/

                                  ┌────┐   по 0,1 мл

                                  │    ├────────────────┐

                                  ├────┤                \/

                                  │  -5│     ──┬─────┬───┬────┬────┬────

                                  │10  │       \/    \/  \/   \/   \/

            9,9 мл 0,1-процентного└────┘     ┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐

            ПВ или физ. р-ра                 │Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│

                                             └────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘

 

Примечание: 1. При отсутствии среды МИС идентификацию энтерококков возможно проводить со среды КР.

2. При отсутствии среды ЖАМПФ (желточный агар с маннитом, полимиксином и феноловым красным) идентификацию B. cereus возможно проводить со среды ЖСА.

 

 

 

 

 

Приложение N 2

 

ИССЛЕДОВАНИЕ МАТЕРИАЛОВ ОТ ПОСТРАДАВШИХ

 

1. Кровь засевают в питательную среду (Раппопорт и др.) в соотношении 1:10 (5 мл на 45 мл среды).

Термостатируют 10 дней при 37 °С, делая высевы на среду Эндо через 18 - 24 часа, на 3, 4, 6, 10 сутки. При наличии роста работают по общепринятой методике.

2. Мочу центрифугируют, засевают осадок в 5 мл хлористо-магниевой среды обычной концентрации (или 10 мл мочи на 10 мл среды двойной концентрации), через 18 - 20 часов инкубации при 37 °С делают высев петлей на ВСА (48 часов при 37 °С).

При наличии подозрительного роста идентификацию проводят по общепринятой методике.

3. Желчь засевают в количестве 5 мл на 45 - 50 мл МПБ (1:10), помещают на 7 суток в термостат при 37 °С и делают высевы через 18 - 20 часов и 3, 5, 7 сутки на среду Эндо. При наличии подозрительного роста работают по общепринятой методике.

4. Промывные воды желудка после нейтрализации (1 мл 10-процентной соды на 10 мл пробы) засевают по 0,1 мл на плотные чашечные питательные среды Эндо (Левина), Плоскирева, ЖСА, КА и в среды обогащения (хлористо-магниевая, желчный бульон, солевой бульон, сахарный бульон) в соотношении 1:5 - 1:10 (1 мл на 4 - 5 мл среды).

Дальнейшее исследование проводят в зависимости от характера роста по общепринятой методике.

5. Рвотные массы после нейтрализации, испражнения.

    Готовят на 0,1-процентной пептонной воде или физ.  растворе  10-кратные

                -1      -3      -5

разведения:   10  ,   10  ,   10  ,  для  исследования   на  C. perfringens

                 -8    -9    -10

дополнительно: 10  , 10  , 10    и далее проводят посевы:

    5.1. На шигеллы и сальмонеллы:

                       -1

    по  0,1  мл  из  10   на среды Эндо (Левина), Плоскирева, ВСА и в среды

                                  -1

обогащения:  по 0,3 - 1,0 мл из 10   на 2,5 - 5 мл хлористо-магниевой среды

(селенитовой).

                                      -3     -5

    5.2. На S. aureus: по 0,1 мл из 10   и 10   на ЖСА.

                                            -3     -5

    5.3. На  B. cereus:  по  0,1  мл  из  10   и 10   на желточный  агар  с

маннитом, полимиксином и феноловым  красным  (ЖАМПФ),  при  отсутствии - на

ЖСА.

    5.4. На энтерококки:

                   -3     -5

    по 0,1 мл из 10   и 10   на МИС, при отсутствии - на КА.

                                                               -3     -5

    5.5.  На условно-патогенные энтеробактерии: по 0,1 мл из 10   и 10   на

Эндо.

                                        -8    -9    -10

    5.6. На C. perfringens по 1 мл из 10  , 10  , 10    в пробирки  с 8 - 9

мл среды Вильсон - Блера.

    5.7. На C. botulinum:

                           -1

    по  3  -  5  мл  из  10    в  4  флакона  (пробирки) с 30 - 50 мл среды

Китт-Тароцци  (при  отсутствии среды возможно применение среды для контроля

стерильности).

Примечание: посевы на Cl. perfringens и Cl. botulinum проводят только по клинико-эпидемиологическим показаниям, о чем должна быть сделана запись в направлении.

 

Дальнейший ход исследования и идентификацию на все виды возбудителей проводят по общепринятой методике.

 

ПРИМЕРНАЯ СХЕМА ПОСЕВА РВОТНЫХ МАСС И ИСПРАЖНЕНИЙ

 

     0,1 мл                        ┌────┐          0,3 - 1,0 мл

    ┌──────────────────────────────┤  -1├────────────────────────┐

    │       0,1 мл                 │10  │                        │

    │        ┌─────────────────────┤    ├─────────┐              │

    │        │      0,1 мл         │    │         │              │

    │        │       ┌─────────────┴─┬──┘         │              │

    \/       \/      \/   1 г/мл материала 10 мл  │              \/

  ┌────┐  ┌─────┐  ┌───┐      0,1-процентного     │          ┌────────────┐

  │Эндо│  │Плос.│  │ВСА│      ПВ или физ. р-ра    │          │2,5 - 5,0 мл│

  └────┘  └─────┘  └───┘             │            │          │хлористо-   │

                                     │            │          │магниевой   │

                                     │            │          │среды обыч. │

                                     │            │          │конц.       │

                                     │            │          └────────────┘

                                     \/           │ 0,3 - 1,0 мл

                   по 0,1 мл       ┌────┐         └──────────────┐     или

               ┌───────────────────┤  -3│                        \/

               \/                  │10  │                    ┌────────────┐

  ──┬─────┬───┬────┬────┬────      ├────┤ 9,9 мл             │2,5 - 5,0 мл│

    \/    \/  \/   \/   \/         │    │ 0,1-процентного    │селенитовой │

  ┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐      └─┬──┘ ПВ или физ. р-ра   │   среды    │

  │Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│        │                       └────────────┘

  └────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘        │ 0,1 мл

                                     \/

                   по 0,1 мл       ┌────┐

               ┌───────────────────┤  -5│

               \/                  │10  │

  ──┬─────┬───┬────┬────┬────      ├────┤

    \/    \/  \/   \/   \/         │    │ 9,9 мл 0,1-процентного

  ┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐      └────┘ ПВ или физ. р-ра

  │Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│

  └────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘