Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1989 г. N 5011-89

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ (БАЗУДИН,

ГЕТЕРОФОС, КАРБОФОС, МЕТАФОС, ФОСФАМИД, ЭТАФОС) В ТАБАКЕ

МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

 

Дополнение к N 1911-78 от 27.09.78,

N 4675-88 от 14.07.88

 

Краткая характеристика препаратов приведена в Унифицированной методике. МДУ базудина в табаке 0,5 мг/кг; МДУ карбофоса в табаке и махорке 1 мг/кг; фосфамида - 0,4 мг/кг. Содержание метафоса в табаке не допускается. МДУ гетерофоса и этафоса в табаке не установлены.

Принцип метода. Метод основан на извлечении пестицидов из табачного сырья диэтиловым эфиром и очистке от балластных веществ путем их осаждения при выпаривании эфира в присутствии 50-процентного водного раствора ацетона. После экстракции препаратов гексаном и хлороформом проводят их качественное и количественное определение на хроматографе с ТИД.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 25.

 

Таблица 25

 

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ В ЗЕЛЕНОМ И СУХОМ ТАБАКЕ

 

┌──────────┬──────────────┬────────────┬────────────┬─────────────┬────────────┐

│ Пестицид │   Внесено    │  Среднее   │Стандартное │Доверительный│   Предел   │

│          │анализируемого│  значение  │отклонение, │  интервал   │определения,│

│          │  пестицида,  │определения,│     %      │среднего при │    мг/кг   │

│          │    мг/кг     │     %      │            │  p = 0,95,  │            │

│          │              │            │            │  n = 5, %   │            │

├──────────┴──────────────┴────────────┴────────────┴─────────────┴────────────┤

│                                Зеленый табак                                 │

│                                                                              │

│Базудин   │0,005         │91,3        │+/- 4,36    │+/- 5,00     │0,005       │

│          │0,05          │92,5        │+/- 4,11    │+/- 4,71     │            │

│          │0,10          │94,6        │+/- 3,98    │+/- 4,57     │            │

│Гетерофос │0,005         │88,1        │+/- 5,76    │+/- 6,61     │0,005       │

│          │0,05          │87,7        │+/- 4,85    │+/- 5,56     │            │

│          │0,10          │89,3        │+/- 4,70    │+/- 5,39     │            │

│Карбофос  │0,010         │95,0        │+/- 7,05    │+/- 8,09     │0,010       │

│          │0,10          │97,1        │+/- 6,73    │+/- 7,72     │            │

│          │0,20          │98,8        │+/- 5,58    │+/- 6,40     │            │

│Метафос   │0,010         │87,8        │+/- 6,83    │+/- 7,84     │0,010       │

│          │0,10          │89,1        │+/- 5,95    │+/- 6,83     │            │

│          │0,20          │92,7        │+/- 4,72    │+/- 5,42     │            │

│Фосфамид  │0,010         │91,6        │+/- 6,42    │+/- 7,36     │0,010       │

│          │0,10          │93,4        │+/- 5,33    │+/- 6,11     │            │

│          │0,20          │93,9        │+/- 5,25    │+/- 6,02     │            │

│Этафос    │0,020         │82,5        │+/- 7,35    │+/- 8,43     │0,020       │

│          │0,20          │83,1        │+/- 6,85    │+/- 7,86     │            │

│          │0,40          │87,4        │+/- 5,78    │+/- 6,63     │            │

│                                                                              │

│                                 Сухой табак                                  │

│                                                                              │

│Базудин   │0,0125        │90,1        │+/- 3,50    │+/- 4,01     │0,0125      │

│          │0,125         │91,3        │+/- 2,11    │+/- 2,40     │            │

│          │0,250         │92,6        │+/- 1,92    │+/- 2,20     │            │

│Гетерофос │0,0125        │87,6        │+/- 4,95    │+/- 5,68     │0,0125      │

│          │0,125         │88,8        │+/- 5,12    │+/- 5,37     │            │

│          │0,250         │89,9        │+/- 4,35    │+/- 4,99     │            │

│Карбофос  │0,025         │96,3        │+/- 7,60    │+/- 8,72     │0,025       │

│          │0,25          │97,6        │+/- 6,85    │+/- 7,86     │            │

│          │0,50          │98,7        │+/- 5,84    │+/- 6,70     │            │

│Метафос   │0,025         │87,8        │+/- 5,60    │+/- 6,43     │0,025       │

│          │0,25          │90,5        │+/- 3,88    │+/- 4,45     │            │

│          │0,50          │93,0        │+/- 4,31    │+/- 4,94     │            │

│Фосфамид  │0,025         │90,5        │+/- 5,05    │+/- 5,79     │0,025       │

│          │0,25          │93,6        │+/- 4,85    │+/- 5,56     │            │

│          │0,50          │94,1        │+/- 4,57    │+/- 5,24     │            │

│Этафос    │0,050         │82,8        │+/- 6,80    │+/- 7,80     │0,050       │

│          │0,50          │84,1        │+/- 5,94    │+/- 6,81     │            │

│          │1,00          │89,5        │+/- 5,21    │+/- 5,98     │            │

└──────────┴──────────────┴────────────┴────────────┴─────────────┴────────────┘

 

Избирательность метода. Метод избирателен в отсутствие актеллика и метилнитрофоса, которые также разрешено применять на табаке.

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. н-Гексан х.ч. Диэтиловый эфир. Хлороформ х.ч. Сульфат натрия безводный х.ч. Хлорид натрия х.ч. Хлороводородная кислота х.ч. Гидроксид натрия х.ч. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 3% OV-17. Хроматон N-AW-DMCS (0,25 - 0,315 мм) с 5% SE-30. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 5% ПМС-100. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 5% XE-60. Азот газообразный особой чистоты. Водород электролитический (СГС-2). Воздух из баллона с редуктором или нагнетаемый компрессором. Вода дистиллированная. Стандартные растворы пестицидов с концентрацией (мкг/мл): базудина - 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; гетерофоса - 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; карбофоса, метафоса, фосфамида - 1,0; 2,0; 4,0; 10; этафоса - 2,0; 4,0; 8,0; 20.

Приборы и посуда. Хроматограф "Цвет-106" с ТИД. Колонки хроматографические стеклянные длиной 1 и 2 м с внутренним диаметром 3 мм. Аппарат для встряхивания. Испаритель ротационный. Воронки делительные. Колбы: конические нормального шлифа; круглодонные нормального шлифа; мерные на 25; 50 и 100 мл. Воронки химические. Цилиндры мерные. Колба Бунзена. Воронка Бюхнера. Бумажные фильтры "синяя лента". Электромельница. Насос вакуумный ВНВР-1Д. Компрессор ГСВ-0,6/12 модели 155/285. Микрошприц МШ-10.

Подготовка к определению. Подготовка хроматографических колонок и их кондиционирование. Стеклянные колонки моют хромовой смесью, ополаскивают водой, промывают ацетоном, затем хлороформом и гексаном. Колонки просушивают и заполняют сорбентом, используя вакуум. Заполненные колонки кондиционируют, не подключая к детектору, 24 ч при 250 °C (OV-17), 270 °C (SE-30), 235 °C (XE-60 + ПМС-100).

Приготовление стандартных растворов. В мерных колбах на 50 мл взвешивают отдельно по 25 мг каждого пестицида с точностью 0,0001 г. Приливают в каждую колбу 20 - 30 мл ацетона, осторожно взбалтывают до полного растворения препаратов и доливают ацетон до метки. Хранят в холодильнике при температуре не выше +4 °C. Срок хранения 1,5 - 2 мес.

Основной раствор получают смешиванием: 1 мл ацетонового раствора базудина и 1 мл ацетонового раствора гетерофоса, по 2 мл растворов карбофоса, метафоса, фосфамида, 4 мл раствора этафоса. К полученной смеси доливают ацетон до объема 100 мл. Концентрация пестицидов в основном растворе: базудина и гетерофоса по 5 мкг/мл, карбофоса, метафоса и фосфамида - по 10 мкг/мл, этафоса - 20 мкг/мл. Срок хранения основного раствора 3 - 4 недели.

Для анализа готовят рабочие растворы: N 1 - 10 мл основного раствора вносят в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора ацетоном до метки; N 2 - 10 мл основного раствора вносят в мерную колбу на 50 мл и доводят объем раствора ацетоном до метки; N 3 - 10 мл основного раствора вносят в мерную колбу на 100 мл и доводят объем раствора ацетоном до метки. 1 мкл полученного раствора N 3 содержит (нг): 0,5 базудина, 0,5 гетерофоса, 1 карбофоса, 1 метафоса, 1 фосфамида, 2 этафоса.

Рабочие растворы хранят в холодильнике 2 - 3 недели.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Сухой табак (20 г) тщательно измельчают (50 г зеленого табака растирают в ступке с 30 г безводного сульфата натрия), помещают в коническую колбу с пришлифованной пробкой, заливают 100 мл диэтилового эфира и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. Декантируют экстракт 2 - 3 мин. и фильтруют через бумажный фильтр на воронке Бюхнера под вакуумом. Экстрагируют еще раз тем же количеством эфира, встряхивая 15 мин. Фильтруют пробу, фильтр промывают 50 мл эфира.

К эфирным вытяжкам в круглодонную колбу прибавляют 75 мл 50-процентного водного раствора ацетона (в объемных процентах) и полностью удаляют эфир под вакуумом на ротационном испарителе при 25 - 29 °C. При этом на стенках вращающейся колбы осаждаются практически все балластные вещества (воски, смолы, пигменты), что объясняется их нерастворимостью в 50-процентном растворе ацетона.

Водно-ацетоновый экстракт, содержащий ФОП, отделяют фильтрованием через бумажный фильтр в делительную воронку. В колбу с осадком прибавляют 50 мл диэтилового эфира, взбалтывают до полного растворения балластов, прибавляют 75 мл 50-процентного водного раствора ацетона и еще дважды повторяют очистку.

К объединенному водно-ацетоновому фильтрату добавляют 25 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия и экстрагируют базудин, гетерофос, карбофос, метафос, этафос гексаном три раза порциями по 50 мл, каждый раз энергично встряхивая в течение 1 мин. Фосфамид экстрагируют хлороформом трижды по 25 мл, встряхивая каждый раз по 1 мин.

Гексановые и хлороформные фракции промывают два раза порциями по 10 мл 0,01 н NaOH, два раза по 10 мл 0,01 н HCl, высушивают, фильтруя через слой безводного сульфата натрия (10 - 15 г), и выпаривают под вакуумом при 40 - 45 °C. Следы растворителей удаляют в токе холодного воздуха.

К сухим остаткам прибавляют 1 - 5 мл ацетона и хроматографируют на хроматографе с ТИД.

При использовании неподвижной фазы OV-17 можно экстрагировать сразу все препараты из водно-ацетонового экстракта хлороформом трижды порциями по 25 мл. Промывку экстракта и остальные операции проводят так же, как описано выше.

    Идентификация  и  количественное  определение смеси ФОП. Метод

ГЖХ  с  ТИД.  Для анализа используют хроматограф "Цвет-106" с ТИД.

                                    -12

Рабочая  шкала электрометра 100 x 10    А. Скорость движения ленты

самописца 200 мм/ч. Дополнительные условия определения приведены в

таблице 26.

 

Таблица 26

 

УСЛОВИЯ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО

И КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОП В ТАБАКЕ

 

┌────────────────────┬────────────────────────────────────────────────────┐

│     Параметры      │                   Номер колонки                    │

│                    ├────────────┬────────────┬────────────┬─────────────┤

│                    │     1      │      2     │      3     │      4      │

├────────────────────┼────────────┼────────────┼────────────┼─────────────┤

│Насадка             │3% OV-17,   │5% SE-30,   │5% ПМС-100, │5% XE-60 + 5%│

│                    │хроматон    │хроматон    │хроматон    │ПМС-100 (1:1 │

│                    │N-супер     │N-AW-DMCS   │N-супер     │по массе),   │

│                    │(0,16 - 0,20│(0,25 - 0,31│(0,16 - 0,20│хроматон     │

│                    │мм)         │мм)         │мм)         │N-супер (0,16│

│                    │            │            │            │- 0,20 мм)   │

│Размер колонок      │200 x 3     │300 x 3     │100 x 3     │200 x 3      │

│(длина x диаметр),  │            │            │            │             │

│мм                  │            │            │            │             │

│Температура, °C:    │            │            │            │             │

│  колонки           │180         │185         │195         │190          │

│  испарителя        │210         │210         │210         │210          │

│Скорость потока,    │            │            │            │             │

│мл/мин.:            │            │            │            │             │

│  азота             │60          │50          │50          │50           │

│  водорода          │17 - 18     │17 - 18     │17 - 18     │17 - 18      │

│  воздуха           │200         │200         │200         │200          │

│Относительное время │            │            │            │             │

│удерживания         │            │            │            │             │

│(по метафосу):      │            │            │            │             │

│  базудина          │0,45        │0,55        │0,76        │0,43         │

│  гетерофоса        │0,52        │0,52        │0,57        │0,51         │

│  карбофоса         │1,19        │1,14        │1,25        │0,97         │

│  метафоса          │1,0         │1,0         │1,0         │1,0          │

│  фосфамида         │0,81        │0,76        │0,67        │0,86         │

│  этафоса           │1,50        │1,53        │1,80        │1,22         │

│Абсолютное время    │6 мин. 46 с │5 мин. 15 с │3 мин. 18 с │5 мин. 53 с  │

│удерживания метафоса│            │            │            │             │

└────────────────────┴────────────┴────────────┴────────────┴─────────────┘

 

Колонку с неподвижной фазой OV-17 используют как основную при качественном и количественном определении препаратов. Можно применять и другие колонки (см. табл. 26). На колонке с фазой OV-17 минимально детектируемое количество базудина и гетерофоса - 0,5 нг, карбофоса, метафоса, фосфамида - 1 нг, этафоса - 2 нг. Линейный диапазон детектирования: базудина и гетерофоса 0,5 - 5 нг, карбофоса, метафоса, фосфамида 1 - 15 нг, этафоса 2 - 30 нг. Хроматографируют 2 - 3 мкл конечного экстракта пробы.

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят методом соотношения со стандартами по высоте пиков. Содержание пестицидов в анализируемой пробе вычисляют как среднее значение из трех параллельных определений.

Количество пестицида в анализируемой пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

 

                             CH V  V

                               1 ст 2

                         X = --------,

                              H  V P

                               ст 1

 

    где:

    C - концентрация пестицида в стандартном растворе, мкг/мл;

    H  - высота пика пестицида в анализируемой пробе, мм;

     1

    H   - высота пика пестицида стандартного раствора, мм;

     ст

    V  - объем пробы, введенной в хроматограф, мкл;

     1

    V  - общий объем анализируемой пробы, мл;

     2

    V   - объем введенного в хроматограф стандарта, мкл;

     ст

    P - навеска исследуемого образца табака, г.

Требования безопасности. При анализе необходимо выполнять правила безопасности, рекомендованные для работы с органическими растворителями, пестицидами и сжатыми газами.