Утверждены
Минздравом СССР
22 мая 1985 г. N 3888-85
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АКТЕЛЛИКА И БАЗУДИНА В ЧАЕ
МЕТОДАМИ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Краткая
характеристика препаратов. Актеллик - O-(2-
диэтиламино-6-метилпиримидил-4)-O,O-диметилтиофосфат. Брутто-
формула C
H O N PS. Молекулярная
масса 305,0. Общепринятое
11 20 3 3
название - пиримифос-метил. Химически
чистое вещество актеллика -
жидкость светло-желтого цвета. Хорошо растворяется в большинстве
органических растворителей, слабо
растворим в воде - 5 мг/л при
температуре 30
°C. Давление пара
0,013 Па. Разрушается
в
сильнокислых и
щелочных средах. ДСД актеллика 0,01 мг/кг, МДУ
актеллика в час 0,5 мг/кг.
Базудин -
O-(2-изопропил-6-метилпиримидил-4)-O,O
диэтилтиофосфат. Брутто-формула C
H O N PS. Молекулярная масса
12 21 3 2
304,36. Общепринятое название - диазинон. Действующее
вещество
базудина -
бесцветная маслянистая жидкость
с т. кип. 89 °C при
-2
13,3 Па. Давление
паров при 20 °C
составляет 0,12 x 10 Па.
Летучесть 1,39
мг/куб. м при 20 °C. Инсектицид нестабилен в кислой
и щелочной
среде. Растворимость в воде 40 мг/л,
хорошо растворим
в большинстве
органических растворителей.
Принцип метода. Метод основан на
экстракции ФОП из чая водным раствором ацетона, последующем перераспределении
препарата из водно-ацетоновой фракции в гексан и
анализе содержания ФОП при помощи ГЖХ или ТСХ. В последнем случае необходима
предварительная очистка экстракта на колонке с оксидом алюминия.
Метрологическая характеристика метода.
Минимально детектируемое количество методом ГЖХ составляет: для актеллика - 0,5 - 1,0 нг, базудина - 0,1 нг. Нижний предел
определения актеллика и базудина
0,1 мг/кг. Среднее значение определения (n = 10, p = 0,95) актеллика
89,2 +/- 8,02%; базудина 87,6 + 10,98%. Минимально
детектируемое методом ТСХ количество актеллика и базудина 1 - 3 мкг.
Избирательность метода. Карбофос, протиофос и хостаквик определению не мешают.
Реактивы и растворы. Ацетон ч.д.а. Гексан х.ч. Бензол х.ч.
Сульфат натрия
безводный ч.д.а. Хлорид
натрия х.ч. Оксид
алюминия для
хроматографии ч. I
степени активности,
нейтральный. Пластинки
"Силуфол" УФ .
Хроматон
N-AW-DMCS,
254
пропитанный 5%
XE-60 (0,160 - 0,200 мм).
Азот особой чистоты.
Водород
электролитический. Сжатый воздух.
Проявляющие реагенты: N 1 -
0,2-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина ч.
в гексане; N 2 - 2-процентный раствор 4-(п-нитробензил) пиридина ч. в ацетоне, 10-процентный раствор тетраэтиленпентамина ч. в ацетоне, 0,05 н водный раствор
хлорида кальция.
Стандартные растворы актеллика
и базудина в гексане - 1
мкг/мл для ГЖХ, 100 мкг/мл для ТСХ.
Приборы и посуда. Хроматограф
"Цвет-106" или аналогичный прибор с ТИД. Аппарат для встряхивания
колб. Испаритель ротационный вакуумный или аналогичный прибор для отгонки
растворителей под вакуумом. Хроматоскоп. Колбы: конические со шлифами и
пробками на 250 или 300 мл; круглодонные со шлифами на 100 мл; мерные на 100
мл. Воронки делительные на 500 мл. Колонки для адсорбционной хроматографии
длиной 30 см с диаметром 15 мм. Камера хроматографическая.
Опрыскиватель стеклянный. Пульверизаторы стеклянные. Пипетки на 0,1 и 1,0 мл.
Цилиндры мерные на 50 и 100 мл. Микрошприц МШ-10М.
Термостат. Колонки стеклянные для ГЖХ длиной 1 м с внутренним диаметром 3 мм.
Подготовка к анализу. Приготовление хроматографической колонки. Стеклянные хроматографические
колонки заполняют хроматоном N-AW-DMCS (0,16 - 0,20
мм), пропитанным 5% XE-60 по стандартной методике.
Построение градуировочного
графика. Для количественного определения актеллика
и базудина во введенной аликвоте
используют метод абсолютной калибровки, который заключается в построении
графической зависимости высоты (площади) хроматографического
пика от содержания вещества в стандартной пробе. По оси ординат
откладывают значения высот (площадей) хроматографических
пиков в мм (кв. мм), а по оси абсцисс - абсолютное
количество исследуемого вещества, соответствующее данному пику.
Градуировочный график необходимо строить в день газохроматографического анализа проб
в тех же условиях, особенно при работе с ТИД.
Ход анализа. Экстракция и очистка
экстрактов. Выделяют среднюю пробу чая массой 10 г. Из проб чая актеллик и базудин извлекают 75 -
100 мл смеси ацетона с водой (1:1). Экстрагируют при встряхивании 30 - 60 мин.
После этого растительные экстракты помещают в холодильную камеру для
вымораживания восков. Затем пробы фильтруют через бумажные фильтры. Далее
проводят переэкстракцию актеллика
и базудина из объединенного фильтрата в гексан, прибавляя последний порциями по 25 мл, каждый раз
встряхивая в делительной воронке в течение 3 - 5 мин. Экстракцию повторяют три
раза. Гексановые фракции высушивают фильтрованием
через слой безводного сульфата натрия (20 - 25 г), объединяют и концентрируют
до небольшого объема (1 - 0,5 мл) под вакуумом при температуре 40 °C.
Экстракты из проб чая нуждаются в
дополнительной очистке, ее проводят на колонке длиной 30 см с внутренним
диаметром 15 мм, заполненной последовательно сульфатом натрия (3 - 4 г),
оксидом алюминия (4 - 5 г) и снова сульфатом натрия (1,5 - 2 г). Колонку
предварительно промывают бензолом (30 - 40 мл). Актеллик
и базудин элюируют бензолом
(20 мл). Растворитель отгоняют под вакуумом до небольшого объема. Количество
инсектицида в пробе определяют хроматографическими
методами.
При ГЖХ очистку экстрактов чая можно не
проводить.
Хроматографирование в
тонком слое. Пробу с помощью капилляра
или микропипетки
наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол"
УФ . Параллельно
на пластинку наносят
серию стандартных
254
растворов с
содержанием 3; 5 и 10 мкг
действующего вещества
актеллика или базудина. Хроматографируют в системе гексан
- ацетон
(4:1), проветривают. Для
обнаружения определяемых соединений
пластины
просматривают в УФ-свете хроматоскопа и обрабатывают
либо
0,2-процентным раствором
2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане
(затем нагревают в течение 30 с в термостате при температуре 100 -
120 °C), либо
2-процентным раствором 4-(п-нитробензил)-пиридина с
последующим нагреванием
при 100 - 120 °C
и обработкой
10-процентным
раствором тетраэтиленпентамина.
Значение
R актеллика 0,50 +/- 0,01, R базудина в указанной
f f
системе
растворителей - 0,38 +/- 0,01.
Газожидкостное хроматографирование. С
помощью микрошприца
аликвотную часть
исследуемого раствора (1
- 2 мкг) вводят в
испаритель хроматографа
с ТИД. Скорость
потока газа-носителя
(азота) 25
мл/мин., водорода - 15 -
18 мл/мин., воздуха - 170
мл/мин. Температура
(°C): термостата колонок - 190,
детектора и
-10
испарителя -
220. Рабочая шкала
электрометра 2,5 x 10
А.
Скорость движения
ленты самописца 1
см/мин. Время удерживания
актеллика в данных условиях - 2 мин. 51 с, базудина - 54 с.
Обработка
результатов анализа. При использовании метода ТСХ
содержание
пестицида в исследуемом объекте (X, мг/кг) вычисляют по
формуле:
A
X = -,
P
где:
A - количество препаратов, найденное по хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;
P - навеска исследуемой пробы, г.
Количественное определение препарата в
анализируемой пробе при использовании метода ГЖХ проводят с помощью градуировочного графика. Содержание препарата в
анализируемой пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
CV
X = ---,
V P
1
где:
V - общий объем раствора, мл;
V -
объем аликвоты, введенный в хроматограф, мкл;
1
C
- количество препарата
в аликвоте, определенное
по
градуировочному графику, нг;
P - навеска анализируемого вещества, г.
Если при введении в хроматограф
получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание",
готовят более разбавленные растворы, добавляя к конечному раствору известное
количество гексана или разбавляя отобранную
аликвоту до определенного объема.
Требования безопасности. Соблюдают
общепринятые правила безопасности при работе с горючими растворителями и ФОП.