Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
12 апреля 1985 г. N 3252-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СТОМПА МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ
ХРОМАТОГРАФИИ В ТАБАКЕ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия временных методических
указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками
Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Марциновского
Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика препарата
Стомп (пеноксалин, праул,
аккотаб, хербатокс) -
3,4-диметил-2,6-динитро-N(пентил-3)анилин - кристаллическое вещество
оранжево-желтого цвета.
NO
--- / 2
CH -// \\-NH-CH-C H
3 \ ___ / │ 2 5
/ --- \ C H
CH
NO 2 5
3
2
3,4-Диметил-2,6-динитро-N(пентил-3)анилин.
Эмпирическая формула C H N O
.
13 19 3 4
Молекулярная масса 281,3.
Температура плавления - 56 - 57 °С.
Растворимость в воде при 20 °С - 0,3 мг/л.
Хорошо растворяется в хлорированных и
ароматических углеводородах. Стабилен в щелочных и
кислых средах.
По существующим в СССР методам оценки
токсичности химических препаратов
относится к малотоксичным препаратам: ЛД для крыс - 1250 мг/кг, ЛД для
50 50
собак - 5000
мг/кг.
Технический препарат выпускается в форме
33-процентного концентрата эмульсии, 50-процентного смачивающегося порошка и
3-процентного гранулята.
Как селективный почвенный гербицид
эффективен для борьбы с одно- и двудольными сорными растениями на посевах
кукурузы, хлопка, риса, соевых, табака. Рекомендуется вносить перед посадкой.
Применяется также для химического пасынкования
табака.
2. Методика
определения стомпа методом
газожидкостной хроматографии
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на
газохроматографическом определении стомпа с детектором
постоянной скорости рекомбинации на неподвижной фазе ECSS-X после экстракции
смесью вода - соляная кислота - этанол, очистки экстракта жидкость-жидкостным
перераспределением в гексан и на колонке с
силикагелем.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода.
Диапазон определяемых концентраций - 0,03
- 0,5 мг/кг.
Минимально детектируемое количество - 0,2
нг.
Метрологическая характеристика метода
представлена в таблице 1.
Таблица 1
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СТОМПА В ТАБАКЕ МЕТОДОМ ГЖХ
┌─────┬────────┬────────┬───────┬───────┬───────┬───────┬───────┬─────────┐
│Объ- │К-во │К-во │Процент│Число │Стан-
│Относи-│Среднее│Довери- │
│ект │стомпа, │стомпа, │опреде-│парал- │дартное│тельное│откло-
│тельный │
│ана- │внесен.
│обнар. │ления, │лельн. │откло- │стан- │нение, │интервал │
│лиза │в пробу,│в
пробе,│% │опреде-│нение, │дартное│мг/кг │среднего │
│ │мг/кг │мг/кг │
│лен., n│мг/к │откл., │ │р =
0,95;│
│ │ │ │ │ │ │% │ │n = 5 │
├─────┼────────┼────────┼───────┼───────┼───────┼───────┼───────┼─────────┤
│табак│0,05 │0,043 │84,0
│5 │0,0016 │3,7 │0,0012 │0,002 │
│табак│0,25 │0,23 │90,4 │5
│0,009 │3,8 │0,006
│0,01 │
│табак│0,5 │0,42 │86,8 │5
│0,016 │3,8 │0,012 │0,02 │
└─────┴────────┴────────┴───────┴───────┴───────┴───────┴───────┴─────────┘
2.1.3. Избирательность метода
Трефлан и паарлан, применяемые
в настоящее время в табаководстве, определению не мешают.
2.2. Реактивы и
материалы
Этиловый спирт ректификат, ТУ
6-09-1710-77.
Соляная кислота, ч,
ГОСТ 3118-77.
н-Гексан, ч, ТУ
6-09-3375-78.
Бензол, хч,
ГОСТ 5955-75.
Сернокислый натрий безводный, ч, ГОСТ 4166-76.
Солянокислый этанол (к 200 мл
дистиллированной воды приливают 20 мл концентрированной соляной кислоты и
доводят до метки этанолом в 1 л в мерной колбе).
1 н раствор соляной кислоты.
Смесь гексан -
бензол (8:2).
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Силикагель для колоночной хроматографии Л
0,1/0,2 мм (ЧССР).
ECSS-X 5% на Газ-Хром 0 0,1 - 0,12 мм.
Стандартный раствор стомпа
в бензоле конц. 0,0005 мг/мл.
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
Хроматограф "Цвет-106" с
детектором постоянной скорости рекомбинации.
Микрошприц на 10 мкл МШ-10, ТУ 5-2.833.0.24.
Ротационный вакуум-испаритель, ТУ
25-11-917-74.
Аппарат для встряхивания, ТУ
64-1-1081-73.
Гомогенизатор.
Сушильный шкаф, ТУ 64-1-1411-76.
Колбы конические со шлифом на 250, 500
мл, ГОСТ 10394-72.
Колба Бунзена, ГОСТ 6514-75.
Воронка Бюхнера,
ГОСТ 9147-73.
Хроматографические колонки диам. 20 х 500 мм.
Колбы мерные на 1 л, ГОСТ 1770-74.
Воронки делительные на 500, 1000 мл, ГОСТ
8613-75.
Стаканы химические на 100, 150 мл, ГОСТ
10394-72.
Колбы круглодонные на 100 мл, ГОСТ
10394-74.
Воронки химические разные, ГОСТ 8613-75.
Пипетки разные, ГОСТ 20292-74.
Фильтры бумажные, ТУ 6-60-1678-77.
Вата, ГОСТ 5556-75, обезжиренная.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Установление линейного
динамического диапазона
Готовят раствор стомпа
в бензоле концентрацией 0,005 мг/мл. В 10 колб емкостью по 50 мл вносят
пипеткой 1 - 10 мл раствора стомпа в бензоле, доводят
до метки бензолом, перемешивают и полученные растворы
поочередно вводят в хроматограф 4 мкл порциями. До хроматографирования растворы необходимо хранить в
защищенном от света месте, так как препарат разлагается под действием
ультрафиолетовых лучей.
2.4.2. Приготовление силикагеля для
колоночной хроматографии
Силикагель марки Л 0,1/0,2 мм (ЧССР)
перед употреблением высушивают в течение 4-х часов при температуре 140 °С и переносят в склянку с притертой пробкой. К остывшему
силикагелю осторожно при перемешивании приливают небольшими порциями
дистиллированную воду из расчета 20 мл на 80 г силикагеля, тщательно
перемешивают встряхиванием до исчезновения комочков и оставляют на 24 часа для
равномерного распределения воды. Проверяют активность каждой вновь
приготовленной порции силикагеля.
2.4.3. Отбор, хранение и доставка пробы
Отбор и хранение проб табака производят в
соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб...",
утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР
А.И. Заиченко за N 2051-79 от 21 августа 1979 г.
2.5. Проведение определения
2.5.1. Экстракция и очистка экстракта
Навеску 10 - 20 г измельченного табака
помещают в стакан гомогенизатора и заливают солянокислым этанолом (соотношение
экстрагирующей смеси к весу образца 20:1). Гомогенизируют 4 мин. при 5000 об./мин. или встряхивают на
механическом встряхивателе в течение 2-х часов.
Фильтруют экстракт под вакуумом, промывают остаток на фильтре 2 х 15 мл
солянокислым этанолом и переносят в делительную воронку. Добавляют к экстракту
100 мл 1 н раствора соляной кислоты, 50 мл гексана и
экстрагируют в течение 1 мин. Отделяют гексановый
слой и повторяют экстракцию 3 х 20 мл гексана.
Объединенные гексановые экстракты фильтруют через
слой безводного сернокислого натрия в круглодонную колбу и упаривают досуха на ротационном вакуум-испарителе.
В хроматографическую
колонку вносят 14 г активированного силикагеля в гексане,
уплотняют сорбент, вносят слой безводного сернокислого натрия высотой 1 - 1,5
см и промывают колонку 30 мл гексана. Скорость
прохождения растворителя через колонку устанавливают 2 капли в секунду. Сухой
остаток в колбе растворяют в 10 мл смеси гексан -
бензол и вносят в колонку. Колбу промывают 3 х 5 мл смеси гексан
- бензол и каждый новый объем вносят в колонку после того, как мениск
предыдущего достигнет поверхности силикагеля. Промывают колонку 50 мл гексана, установив скорость прохождения растворителя через
колонку 3 - 4 капли в секунду, и собранный элюат
отбрасывают. Стомп элюируют
из колонки 130 мл смеси гексан - бензол. Первые 30 мл
элюата отбрасывают, а последующие 100 мл собирают,
упаривают досуха на ротационном вакуум-испарителе при температуре водяной бани
40 °С, растворяют осадок в 2 - 5 мл бензола и аликвоты, по 4 - 6 мкл вводят в
хроматограф.
2.5.2. Условия хроматографирования
Газовый хроматограф "Цвет-106"
с детектором постоянной скорости рекомбинации.
Колонка стеклянная 1000 х 3 мм.
Твердый носитель Газ-Хром 0 0,1 - 0,12
мм.
Неподвижная фаза ECSS-X, 5%.
Температура детектора - 230 °С, колонки - 190 °С, испарителя - 250 °С.
-12
Чувствительность электрометра 20 х 10 .
Скорость газа-носителя (азота) 32
мл/мин.; продувочного газа (азота) - 94 мл/мин.
Время удерживания стомпа
при этих условиях 3,2 мин.
В испаритель вводят 4 мкл
рабочего раствора в бензоле.
2.6. Обработка
результатов анализа
Количественное определение проводят путем
сравнения пиков стандартного и исследуемого растворов по высоте. Содержание
остаточных количеств стомпа в анализируемой пробе
вычисляют как среднее их трех параллельных определений.
Расчет производится по формуле:
а х Н х V х
V х 100
х ст о
Х =
-----------------------,
Н х V х
G (100 - W)
ст х
где:
Х - количество пестицида в анализируемой
пробе, мг/кг;
а - концентрация стандартного раствора
пестицида, мг/мл;
Н -
высота хроматографического пика исследуемого р-ра, мм;
х
Н -
высота хроматографического пика стандартного р-ра, мм;
ст
V -
объем пробы исследуемого раствора, введенный в хроматограф, мкл;
х
V -
объем пробы стандартного раствора, введенный в хроматограф, мкл;
ст
V -
общий объем исследуемого раствора, мл;
о
G -
навеска образца, кг;
W - влажность анализируемой пробы, %.
3. Требования
безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила
безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими
веществами.
4. Методические указания разработаны:
Пережогина Т.А., Всесоюзный
научно-исследовательский институт табака и махорки им. А.И. Микояна (НПО
"Табак").