Утверждены
Минздравом СССР
3 января 1985 г. N 3185-85
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ХЛОРОФОСА В КАРТОФЕЛЕ МЕТОДОМ
ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны
К.Ф. Новиковой, Ф.Р. Мельцер, Л.И. Лещинской
(ВНИИХСЗР).
Краткая характеристика препарата
приведена в Унифицированной методике. МДУ хлорофоса в картофеле 0,1 мг/кг.
Принцип метода. Метод основан на
извлечении хлорофоса из картофеля ацетоном, перераспределении из
водно-ацетонового раствора в хлороформ, очистке экстракта микросублимацией
в вакууме с последующим определением тонкослойной хроматографией.
Метрологическая характеристика метода.
Предел обнаружения в хроматографируемой пробе: при проявлении
резорциновым проявителем - 1 мкг, азотно-серебряным проявителем - 2 мкг. Предел
обнаружения в картофеле соответственно 0,05 и 0,1 мг/кг. Среднее значение
определения стандартных количеств хлорофоса (при n =
15) 75,7%. Стандартное отклонение (при n = 15) +/- 4,2%. Доверительный интервал
среднего определения (при p = 0,95 и n = 5) 75,7 +/- 5,2.
Избирательность метода. Метод селективен. ДДТ, гексахлоран, гептахлор
определению не мешают.
Реактивы и растворы. Ацетон
х.ч. Хлороформ ч.д.а.
Бензол ч.д.а. Гексан ч.д.а. Гидроксид натрия х.ч., 1 н
раствор. Хлорид натрия. Сульфат натрия безводный х.ч.
Резорцин х.ч., 2-процентный водный раствор. Аммиак
водный (плотность 0,9 г/куб. см). Нитрат серебра ч. Глицерин ч.
Проявляющие
реагенты: N 1 - растворяют
0,5 г AgNO в 5 мл воды,
3
добавляют 4 мл
NH OH и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном. Раствор
4
хранят в
темной склянке на холоде. Он стабилен в течение 5 - 7 дней.
На
одно определение
расходуют 2 - 3 мл раствора; N 2 - перед употреблением
смешивают равные
объемы 2-процентного раствора
резорцина и 1 н раствора
NaOH. На одно определение расходуют 2 - 3 мл проявителя.
Хлорофос
с содержанием основного
вещества не менее 95%. Стандартные
растворы хлорофоса
в ацетоне с содержанием 100 и 10 мкг/мл. Стандартные
растворы хлорофоса
стабильны при хранении в холодильнике в течение 1 мес.
Пластинки "Силуфол" УФ .
254
Приборы и посуда. Хроматографическая
камера с притертой крышкой. Аппарат для встряхивания. Ротационный вакуумный
испаритель ИР-1 или аналогичный. Лампа УФ-света,
медицинская МРТУ или аналогичная. Прибор для микросублимации
в вакууме. Насос высокого разряжения. Пульверизаторы стеклянные. Делительные
воронки на 750 мл. Колбы: конические на 250 и 50 мл; круглодонные на 500 мл;
грушевидные на 50 мл; плоскодонные на 100 и 500 мл. Мерные цилиндры на 100 мл.
Пробирки с оттянутым концом на 5 мл.
Подготовка к определению. Хроматографические камеры заполняют за 1 ч до начала хроматографирования системами подвижных растворителей: гексан-ацетон (1:1) и бензол-ацетон (2:1). Подвижный
растворитель в камере должен находиться не выше 0,7 - 1 см над уровнем дна
камеры.
Ход анализа. Навеску (20 г) разрезанного
на мелкие кусочки картофеля (с длиной граней не более 0,5 см) помещают в
плоскодонную колбу вместимостью 100 мл и заливают 50 мл ацетона. Экстракцию
хлорофоса проводят при помощи механического встряхивания колбы в течение 30
мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку на 750 мл.
Экстракцию хлорофоса проводят еще дважды тем же количеством ацетона. К
объединенному в делительной воронке экстракту добавляют 10 г хлорида натрия и
50 мл хлороформа, предварительно насыщенного водой. Воронку закрывают пробкой
на шлифе и ее содержимое энергично встряхивают в
течение нескольких секунд. Дают слоям разделиться, нижний хлороформный слой
переносят в коническую колбу на 500 мл. Эту операцию повторяют еще 4 раза.
Объединенный хлороформный экстракт сушат
над безводным сульфатом натрия (20 - 25 г) в течение нескольких минут. Экстракт
фильтруют порциями через бумажный фильтр в круглодонную колбу на 50 мл и
отгоняют растворитель с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 3
- 5 мл. Остаток количественно переносят в патрон сублиматора
и испаряют растворитель на горячей водяной бане досуха. В патрон вставляют
"палец" сублиматора и проводят сублимацию в
течение 30 мин. на глицериновой бане при температуре 130 - 140 °C и давлении 40
- 80 Па (0,3 - 0,6 мм рт. ст.).
После
охлаждения и снятия
разряжения "палец" сублиматора осторожно
вынимают из
патрона и смывают с него хлорофос 10 мл ацетона через воронку в
грушевидную колбу
с оттянутым концом
вместимостью 50 мл.
Удаляют
растворитель на
ротационном вакуумном испарителе
до объема 0,1 - 0,2 мл.
Оставшуюся каплю
с помощью стеклянного капилляра количественно наносят на
хроматографическую
пластинку "Силуфол" УФ , предварительно промытую в
254
хроматографической
камере ацетоном и высушенную при комнатной
температуре.
По краям
от пробы наносят серию стандартов хлорофоса: 0,5; 1,0; 2,0; 3,0;
4,0 и 5,0 мкг.
Серию
стандартов готовят следующим
образом. В пробирку с оттянутым
концом с
помощью пипетки вместимостью 1 мл переносят 0,05; 0,1; 0,2; 0,3;
0,4 и
0,5 мл стандартного
раствора хлорофоса с содержанием
10 мкг/мл.
Содержимое пробирок концентрируют на горячей водяной
бане до объема 0,1 -
0,2 мл
и наносят на пластинку с помощью
стеклянных капилляров. Пластинку
помещают в
камеру, на дно которой налит
бензол. Когда фронт растворителя
достигнет края хроматографической
пластинки, ее вынимают из камеры и сушат
на воздухе.
Высушенную пластинку помещают в хроматографическую камеру, и
развивают хроматограмму в
системе подвижных растворителей
- гексан
с
ацетоном (1:1)
или бензол с
ацетоном (2:1). После
окончания
хроматографирования
пластинку сушат на
воздухе, а затем
обрабатывают
проявляющим реагентом
N 1 или N 2. При проявлении пластин проявляющим
реагентом N 1 обработанную хроматограмму
помещают под лампу УФ-света на 5 -
7 мин.
Хлорофос проявляется на
пластинке в виде темно-серых пятен на
светлом фоне с
R 0,65 +/- 0,04. Пятна стабильны в
течение длительного
f
времени. Линейный
диапазон детектирования 0,5 - 5
мкг хлорофоса в
хроматографируемой пробе.
При проявлении хроматограмм
проявляющим реагентом N 2 хлорофос виден на
пластинке в
виде оранжевых пятен на светлом фоне с R 0,65 +/- 0,04 при
f
развитии хроматограмм в
первой системе подвижных растворителей и 0,36 +/-
0,02 - при
развитии хроматограмм во второй системе подвижных
растворителей.
Пятна стабильны 10 - 15 мин. Линейный диапазон
детектирования 1 - 10 мкг в
пробе.
Обработка результатов анализа. Содержание
хлорофоса в пробе определяют, сравнивая площадь и интенсивность окраски пятен
рабочей пробы и серии стандартов. При большом содержании хлорофоса в рабочую
пробу после упаривания растворителя пипеткой вносят известное количество
ацетона и хроматографируют аликвоту
раствора.
Содержание хлорофоса в анализируемой
пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
AV
X = ---,
V P
a
где:
A - количество хлорофоса, найденное в хроматографируемой пробе, мкг;
V - общий объем раствора, из которого
отбирают аликвоту, мл;
V
- объем аликвоты, нанесенной на хроматографическую пластинку, мл
a
(при внесении
всей пробы V = V );
a
P - навеска анализируемой пробы картофеля, г.
Требования безопасности. Соблюдают
правила безопасности, принятые для работы с пестицидами и
легковоспламеняющимися жидкостями.