Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
27 ноября 1984 г. N 3163-84
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ РОМУЦИДА
В ВОДЕ, ПОЧВЕ И РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ
(ОГУРЦАХ, ПШЕНИЦЕ
И САХАРНОЙ СВЕКЛЕ) МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ
ХРОМАТОГРАФИИ
1. Краткая
характеристика препарата
Синонимы и торговые названия: ромуцид, 20-ный эмульгирующийся концентрат.
Химически чистый препарат ромуцид представляет собой кристаллическое вещество желтого
цвета, имеющее температуру плавления 73 - 74 °C (технический продукт,
содержащий не ниже 93% ромуцида, имеет температуру
плавления не ниже 63 °C).
Ромуцид плохо растворяется в воде, хорошо в этаноле, ацетоне, диоксане, бензоле, ксилоле, толуоле и хлороформе. Устойчив при 20 °C и влажности 80% длительное время в
герметично закрытой посуде.
Под действием щелочей и сильных кислот гидролизуется.
Ромуцид малотоксичен - ЛД
- 4400 (4000 - 4800) мг/кг на белых мышах
50
перорально.
Препарат предложен как высокоэффективный
фунгицид для наземного опрыскивания посевов огурцов, сахарной свеклы и пшеницы
против мучнистой росы. Проявляет заметную активность против ржавчины пшеницы. Привыкания
микроорганизмов к препарату не зарегистрировано.
2. Методика
определения ромуцида в воде,
почве и растительном материале
2.1. Основные
положения
2.1.2. Принцип метода
Метод основан на экстракции ромуцида из проб органическими растворителями, очистке
экстрактов от мешающих веществ оксидом алюминия и определении содержания ромуцида с помощью тонкослойной хроматографии.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода приводится в таблице 1.
Таблица 1
┌────────────────────────────┬────────────────────────────────────────────┐
│
Метрологические параметры │ Анализируемый объект │
│ ├────────┬────────┬────────┬────────┬────────┤
│ │ вода │
почва │ огурцы │пшеница │
свекла │
├────────────────────────────┼────────┼────────┼────────┼────────┼────────┤
│Предел
обнаружения в пробе, │3 │5 │5 │3 │3 │
│мкг │
│ │ │ │ │
│Диапазон
определяемых
│0,012 - │0,20 - │0,125
- │0,15 - │0,1 - │
│концентраций,
мг/кг │800 │800 │1000 │1500 │1000 │
│Среднее
значение определения│99,4 │78,0 │82,8 │84,7 │89,0 │
│стандартных
кол-в, % │ │ │ │ │ │
│Стандартное
отклонение │12,40 │4,8 │11,3 │6,20 │5,04 │
│Относительное
стандартное │12,50 │11,3 │11,8 │7,32 │5,66 │
│отклонение,
% │ │ │ │ │ │
│Доверительный
интервал │+/- 5,06│+/-
2,14│+/- 5,04│+/- 2,53│+/- 1,78│
│среднего,
% │ │ │ │ │ │
│Количество
повторностей, шт.│6 │5 │5 │6 │8 │
└────────────────────────────┴────────┴────────┴────────┴────────┴────────┘
2.1.2. Избирательность метода
Определению не мешают препараты
коллоидной серы, применяемые, как и ромуцид, против
мучнистой росы.
2.2. Реактивы,
растворы и материалы
Ромуцид чда, ТУ 88 УССР 192.030.83 (п. 4.2.3
"Примечание").
Ромуцид технический, ТУ 88 УССР 192.030.83.
Ацетон ч, ГОСТ
2603-79.
н-Гексан ч, ТУ
6-09-3375-78.
Хлороформ хч,
ТУ 6-09-4263-76.
Дистиллированная вода.
Гидроксид натрия чда,
ГОСТ 4328-77.
Петролейный эфир хч, ГОСТ 11992-66.
Бензол чда,
ГОСТ 5955-75.
Оксид алюминия (для хроматографии), ТУ
6-09-3916-75.
Сульфат натрия безводный чда, ГОСТ 4166-76.
Пропанол-2 (изо-пропиловый спирт) ч, ТУ 6-09-402-81.
Хроматографические пластинки типа "Силуфол" UV-254
(ЧССР).
Фильтры бумажные, ТУ 6-09-1706-77.
Этанол, ГОСТ 5962-67.
Проявляющий реагент: 6-процентный раствор
гидроксида натрия в этаноле. 6 г гидроксида натрия растворяют в 5 мл
дистиллированной воды и доводят 96% этанолом до 100 мл. Раствор хранят в
холодильнике.
Стандартные растворы ромуцида:
навески ромуцида 10 и 100 мг растворяют в 100 мл
ацетона. Растворы стабильны в течение 2-х недель при хранении в холодильнике в
герметично закрытой посуде.
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
Весы технические, ГОСТ 19491-74.
Весы аналитические ВЛР-200 г, ТУ
25.06.1131-75.
Делительные воронки на 1000 мл, ГОСТ
8613-75.
Мерные колбы на 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Конические колбы на 100 и 250 мл с
пришлифованными пробками.
Микрошприцы на 10 мкл типа МШ-10.
Микропипетки, ГОСТ 20292-74.
Мерные цилиндры на 25 мл, 50 мл, ГОСТ
1770-74.
Кофемолка механическая.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 19391-65.
Сита почвенные, ТУ 46-47885-73.
Камера хроматографическая.
Эксикатор.
Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ
25-11-917-74.
Водяная баня, ТУ 46-22-603-75.
Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ
10696-75.
Компрессор мембранный.
Воронки Бюхнера,
ГОСТ 9147-73.
2.4. Подготовка к
определению
Хроматографические камеры за два часа до начала хроматографирования
заполняют смесью подвижных растворителей для насыщения камеры парами подвижных
растворителей. В качестве подвижных растворителей для проб воды, почвы, огурцов
и свеклы используют смесь н-гексана и ацетона (4:1);
для проб пшеницы - сначала петролейный эфир, а затем
смесь н-гексана и ацетона (4:1). Объем подвижного
растворителя в камере должен по высоте находиться не выше чем 0,7 - 1 см от
уровня дна камеры.
2.5. Отбор проб
Отбор проб проводится в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,
продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (Москва, 1980 г., N 2051-79
от 21.08.79). Отобранные пробы хранить в стеклянной или полиэтиленовой таре в
прохладном месте.
2.6. Проведение
определения
2.6.1. Экстракция и очистка
2.6.1.1. Вода
Пробу воды - 250 мл - помещают в
делительную воронку на 1000 мл и экстрагируют ромуцид
50 мл хлороформа, энергично встряхивая в течение 3 - 5 минут. Эту операцию
повторяют дважды. Объединенный экстракт фильтруют через бумажный фильтр, в
воронку которого помещают 4 - 6 г сульфата натрия безводного и 2 - 3 г оксида
алюминия. Растворитель упаривают на ротационном испарителе до сухого остатка.
2.6.1.2. Почва
25 г воздушно-сухой почвы, растертой и
просеянной через сито с размером отверстий 1 мм, помещают в коническую колбу с
пришлифованной пробкой на 250 мл, прибавляют 50 мл изо-пропанола
и помещают на аппарат для встряхивания на 1 час. После отстаивания экстракт
сливают в колбу через складчатый бумажный фильтр. Остаток в колбе промывают
дважды порциями изо-пропанола по 25 мл, сливая
растворитель после отстаивания через складчатый фильтр.
Для очистки
фильтрат пропускают через оксид алюминия (8 - 10 г) и натрий сернокислый
безводный (2 - 3 г), которые помещают в фильтрующую воронку со стеклянным
фильтром. Содержимое воронки промывают
растворителем два раза по 30 мл. Объединенный экстракт упаривают на ротационном
испарителе до сухого остатка.
2.6.1.3. Огурцы
40 г мелко нарезанных огурцов помещают в
коническую колбу на 250 мл с пришлифованной пробкой и приливают 100 мл
хлороформа или бензола. Экстрагирование ромуцида
проводят в течение 20 - 30 минут, периодически перемешивая гомогенат.
По истечении времени экстракт очищают, пропуская его через слой молселекта-15
или 25 (12 - 15) и сульфата натрия безводного (20 г), помещенных
в воронку со стеклянным фильтром. Операцию повторяют трижды. Объединенный
экстракт упаривают на ротационном испарителе до сухого остатка.
2.6.1.4. Свекла
Пробу - 30 г измельченных корнеплодов
сахарной свеклы - помещают в коническую колбу на 250 мл с пришлифованной
пробкой и добавляют 100 мл хлороформа. Экстрагирование проводят в течение 30
минут, периодически перемешивая. Экстракт фильтруют через складчатый фильтр, в
воронке которого находятся 3 - 5 г сульфата натрия безводного и 2 - 3 г оксида
алюминия. Остаток свеклы промывают двумя порциями растворителя по 30 мл.
Объединенный экстракт упаривают до сухого остатка на ротационном испарителе.
2.6.1.5. Пшеница
Пробу измельченного на кофемолке зерна
пшеницы в количестве 20 г помещают в коническую колбу на 100 мл с
пришлифованной пробкой, прибавляют 50 мл ацетона и экстрагируют 30 минут,
постоянно перемешивая гомогенат. Экстракт фильтруют
через бумажный фильтр, содержащий 1 - 2 г сульфата натрия безводного и 6 - 8 г
оксида алюминия. Остаток промывают двумя порциями ацетона по 40 мл.
Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе. После удаления растворителя
в колбе находится остаток вязкой консистенции.
2.6.2. Хроматографирование
и проявление ромуцида
После удаления растворителя остаток
растворяют в 0,5 мл ацетона и упаривают до 0,1 - 0,15 мл током воздуха,
количественно наносят на хроматографическую пластинку
при помощи микрошприца или микропипетки. Рядом
наносят 3, 5, 7 и 10 мкг ромуцида в ацетоне. После
испарения растворителя пластинки помещают в хроматографические
камеры с подвижным растворителем. После подъема растворителей на 10 см
пластинку вынимают из хроматографической камеры и
помещают в вытяжной шкаф на 5 - 10 минут для удаления следов подвижной фазы.
Проявление ромуцида
проводят 6-процентным раствором гидроксида натрия в
этаноле, опрыскивая пластинки с помощью стеклянного
пульверизатора. Ромуцид
проявляется в
виде ярко-желтых пятен на белом
фоне. Ввиду того что пятна
после испарения
этанола несколько бледнеют, их
контуры обводят иглой. R
f
для проб
воды, почвы, огурцов и свеклы составляет 0,35 +/- 0,02, для проб
пшеницы - 0,26
+/- 0,02.
Оценку содержания ромуцида
в пробе проводят путем сравнения размера и интенсивности окраски пятен
стандарта с пятнами пробы. При большом содержании препарата в пробе экстракты хроматографируют без упаривания.
2.7. Обработка
результатов анализа
Содержание ромуцида
в анализируемой пробе рассчитывают по формуле:
5
B x 10
A = -------,
a x C
где:
A - содержание ромуцида
в пробе, мг/л или мг/кг;
B - количество ромуцида
в пробе, найденное сравнением со стандартом, мг;
C - процент определения, найденный
предварительно, %;
a - объем или вес пробы, мл или г.
3. Требования
безопасности
При работе с ромуцидом
беречь глаза от попадания порошка, руки мыть с мылом, а также соблюдать
требования безопасности, необходимые при работе с горючими, взрывоопасными,
легковоспламеняющимися веществами, едкими щелочами.