Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
31 июля 1984 г. N 3059
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТЕКТО В ОВОЩАХ И ФРУКТАХ
(ЯБЛОКИ,
ЛИМОНЫ, АПЕЛЬСИНЫ, ТОМАТЫ, МОРКОВЬ, ЛУК,
КАПУСТА)
ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
1. Краткая
характеристика препарата
Текто - системный фунгицид широкого спектра действия. Действующее начало
препарата - 2-(4-тиазолил)бензимидазол - тиабендазол.
// \────┬┐N C H N S.
│
││ ││ 10 7 3
\\ /\ N /├────┐
│ │────│ Мол. масса 201,3.
H
N S
\\ /
В чистом виде - кристаллы белого цвета с Т пл. 296 - 304 °C, хорошо растворим в ацетоне (2,8 мг/мл),
этилацетате (1,7 мг/мл). Растворимость в воде при 25 °C меняется в зависимости
от pH. При pH 5 - 12
составляет 0,05 мг/л, ниже pH 5 она возрастает и при pH 2 составляет 1 мг/мл.
ЛД
текто
для теплокровных животных
3330 - 3850 мг/кг. Препарат
50
малотоксичен. МДУ
в картофеле - 10 мг/кг, для других овощей и фруктов не
установлены.
2. Методика
определения текто в овощах и фруктах
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении тиабендазола из овощей и фруктов этилацетатом,
перераспределении в соляную кислоту, а затем, после подщелачивания раствора, в
этилацетат, насыщенный водой, с последующим определением тонкослойной
хроматографией.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Предел обнаружения в хроматографируемой
пробе:
в УФ-свете - 1
мкг;
реактивом Драгендорфа
- 2 мкг.
Предел обнаружения в объектах на УФ-пластинках - 0,07 мг/кг, реактивом Драгендорфа
- 0,14 мг/кг.
Дальнейшую метрологическую характеристику
по методу см. в табл. 1.
Таблица 1
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
┌─────────┬─────────────────────┬─────────────┬─────────────┬─────────────┐
│
Объекты │ Сред.
значение │
Стандартное │Доверительный│
Размах │
│ │ определения │ отклонение │
интерв.
│варьирования,│
│ │стандартных количеств│S
при n = 15,│ среднего │
%, R │
│ │ _ │
+/- % │при p = 0,95 │ │
│ │ тиабендазола
C при │ │ и n = 5, % │ │
│ │ n = 15, % │ │ │ │
├─────────┼─────────────────────┼─────────────┼─────────────┼─────────────┤
│Яблоки │78,7 │7,4 │78,7 +/- 9,2 │70 -
90 │
│Лимоны │78,0 │9,0 │78,0 +/- 11,2│70 -
100 │
│Апельсины│82,7 │12,2 │82,7 +/- 15,1│70 -
100 │
│Томаты │86,0 │8,1 │86,0 +/- 10,0│75 -
100 │
│Морковь │95,3 │5,2 │95,3 +/- 5,9 │90 -
100 │
│Лук │93,3 │7,2 │93,3 +/- 8,3 │80 -
100 │
│Капуста │96,7 │5,9 │96,7 +/- 5,9 │90 -
100 │
└─────────┴─────────────────────┴─────────────┴─────────────┴─────────────┘
2.1.3. Избирательность метода
Метод селективен.
Беномил, БМК, ФОП и ХОП определению не мешают.
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон хч, ГОСТ
2603-79.
Этилацетат хч,
ГОСТ 22300-76.
Гексан чда, ТУ 6-09-3375-78.
Хлороформ чда,
ГОСТ 20015-74.
Спирт этиловый 96-процентный, ГОСТ
5963-67.
Аммиак водный чда,
ГОСТ 3760-64.
Соляная кислота (фиксанал),
ТУ 6-09-2540-72, 0,1 н.
Кали едкое чда,
ГОСТ 4203-65, 4 н.
Сульфат натрия безводный чда, ГОСТ 42-66-76.
Уксусная кислота чда,
ГОСТ 62-75.
Калий иодистый хч, ГОСТ 4232-74.
Висмут основной азотнокислый чда, ГОСТ 10217-62.
Реактив Драгендорфа.
Растворяют 850 мл основного азотнокислого висмута в 40 мл дистиллированной
воды, добавляют 10 мл уксусной кислоты в раствор, содержащий 8 г КУ в 20 мл
воды (основной раствор). Для проявления хроматограмм
1 мл полученного раствора разбавляют 2 мл уксусной кислоты и 10 мл
дистиллированной воды (рабочий раствор). На обработку хроматограммы
идет 2 - 3 мл раствора. Основной раствор стабилен при хранении в темном месте в
течение длительного времени. Рабочий раствор готовят перед обработкой хроматограмм.
Стандартные растворы тиабендазола
в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл (раствор А) и 10 мкг/мл (раствор Б).
Растворы стабильны при хранении в холодильнике 2 года, а при комнатной
температуре - 6 месяцев.
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
Хроматоскоп или другой источник УФ-света длиной волны 250 - 260 нм.
Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-74.
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1 или
аналогичный с набором колб, ТУ 25-11-917-76.
Аппарат для встряхивания, ТУ
64-1-1081-73.
Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ
10396-75.
Колбы плоскодонные, ГОСТ 9737-70, на 500
мл.
Колбы конические, ГОСТ 9737-70, на 500
мл.
Колбы грушевидные, ГОСТ 9737-70, на 50
мл.
Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл,
10 мл.
Пробирки с оттянутым концом, ГОСТ
10515-75, на 5 мл.
Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 1 мл, 2 мл, 5
мл.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74.
Пластинка "Силуфол"
УФ .
254
Делительные воронки, ГОСТ 8613-75, на 500
мл, 250 мл.
2.4. Подготовка к
определению
Хроматографические камеры за один час до начала хроматографирования
заполняют смесью подвижных растворителей: хлороформ:этиловый спирт:аммиак
(100:10:0,2) и гексан:ацетон:аммиак (80:80:0,1) для
насыщения камеры парами подвижных растворителей. Объем подвижного растворителя
в камере должен по высоте находиться не выше чем на 0,7 - 1 см от уровня дна камеры.
2.5. Отбор проб
Отбор проб проводят в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,
продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом
СССР 21 августе 1979 г., N 2051-79.
2.6. Проведение
определения
Измельченную с помощью ножа пробу (15 г) помещают в
плоскодонную колбу
емкостью 500
мл, заливают 50 мл этилацетата и экстрагируют фунгицид в
течение 30
мин. с помощью
механического встряхивания колбы. Экстракт
фильтруют через
бумажный фильтр в
делительную воронку емкостью 500 мл.
Экстракцию тиабендазола повторяют
еще два раза
тем же количеством
этилацетата.
Из объединенного экстракта извлекают фунгицид
0,1 н раствором
соляной кислоты
три раза, порциями
по 30 мл. Этилацетатный слой
отбрасывают. Солянокислотную
фракцию собирают в другой делительной воронке
емкостью 250
мл. К объединенному раствору
приливают 3,5 мл 4 н KOH до pH
среды 10 и
экстрагируют тиабендазол 5 раз этилацетатом,
насыщенным водой,
порциями по 30
мл. Объединенный в конической колбе на 500 мл экстракт сушат
над безводным сульфатом натрия (25 - 30 г), затем
порциями фильтруют через
бумажный фильтр
в грушевидную колбочку
на 50 мл и каждый раз отгоняют
растворитель с
помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1 - 2
мл. Последнюю
порцию растворителя отгоняют
до объема ~ 0,1 мл. Остаток
экстракта с
помощью стеклянного капилляра
количественно наносят на
пластинку "Силуфол" УФ . Справа
и слева от
пробы капилляром наносят
254
стандартные растворы тиабендазола,
содержащие 1, 2, 3, 4, 5 мкг препарата.
Стандартные
растворы готовят следующим обрезом: в серию конических пробирок
пипеткой помещают
0,1; 0,2; 0,3; 0,4 и 0,5 мл стандартного раствора Б и
концентрируют
растворы, нагревая пробирки на водяной бане, до объема ~ 0,1
мл. Хроматограмму развивают в системе подвижных
растворителей хлороформ:
этиловый спирт:аммиак (100:10:02)
или гексан:ацетон:аммиак
(80:80:0,1).
После развития
хроматограмм
и высушивания пластинок
на воздухе пятна
тиабендазола
проявляют под лампой
УФ-света
типа
"Хроматоскоп". Зоны
локализации
препарата обнаруживаются в виде фиолетовых пятен на
зеленоватом
фосфоресцирующем фоне
с R 0,57
+/- 0,02 в
первой системе подвижных
f
растворителей и 0,49 +/- 0,02 - во второй. Пятна можно
наблюдать в течение
нескольких месяцев.
При необходимости для
обнаружения пятен можно
использовать реактив
Драгендорфа.
При обработке хроматограмм этим
проявителем тиабендазол проявляется на пластинках в виде оранжевых
пятен на
белом фоне.
Пятна стабильны на хроматограммах в течение 7 - 8
мин.
2.7. Обработка
результатов анализа
Количественное определение тиабендазола проводят путем сравнения площадей и
интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов. При большом
содержании тиабендазола на пластинку наносят
аликвотную часть раствора.
Содержание тиабендазола
в анализируемой пробе (X) в мг/кг вычисляют по формуле:
A x V
X = ------ мг/кг,
Va x P
где:
A - содержание тиабендазола
в хроматографируемой пробе, мкг;
V - общий объем раствора, из которого
отбирают аликвоту для хроматографирования,
мл;
Va - объем аликвоты, отобранной для хроматографирования, мл (при нанесении всей пробы V = Va);
P - навеска анализируемой пробы, г.
3. Требования безопасности
Соблюдать требования техники
безопасности, принятые для работы с легковоспламеняющимися жидкостями.