Утверждены
Минздравом СССР
27 апреля 1984 г. N 3020-84
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭТАФОСА В МОЛОКЕ И МЯСОПРОДУКТАХ
МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны В.Р. Хаитовым, Т.Б. Баймуратовым (УзНИВИ).
Краткая характеристика препарата
приведена в Унифицированной методике.
Принцип метода. Метод основан на
извлечении этафоса из молока в присутствии безводного
сульфата натрия смесью органических растворителей - этанола и ацетона (1:3), а
из молока и тканей - хлороформом, с последующей очисткой путем
перераспределения пестицида из спиртово-ацетонового раствора в гексан. Количественное определение проводят методом ГЖХ.
Метрологическая характеристика метода.
Минимально детектируемое количество 0,2 нг. Нижний
предел обнаружения этафоса в молоке 0,02 мг/кг.
Среднее значение определения препарата в молоке и мясопродуктах 80 - 75%.
Доверительный интервал среднего (при p = 0,95 и n = 15) составляет для молока
+/- 2,23%, для мясопродуктов +/- 2,24%.
Избирательность метода. Метод специфичен,
другие фосфорорганические соединения в данных условиях хроматографирования
определению не мешают.
Реактивы и растворы. Основной стандартный
раствор этафоса в этиловом спирте, содержание д.в. 100 мкг/мл. Из этого раствора путем соответствующего
разбавления готовят рабочие стандартные растворы, содержащие 10,0; 5,0 и 1,0
мкг/мл.
Для экстракции. Ацетон х.ч. Спирт этиловый 96-процентный. Хлороформ х.ч. н-Гексан х.ч.
Сульфат натрия безводный. Вода дистиллированная, не содержащая хлоридов.
Фильтры бумажные.
Для ГЖХ. Стационарная фаза 3% OV-101 на инертоне-супер (0,16 - 0,20 мм). Стационарная фаза 5% QF-1
на инертоне-супер (0,16 - 0,20 мм). Азот в баллонах с
редуктором. Водород в баллонах с редуктором. Стекловата.
Приборы и посуда. Для экстракции.
Ротационный вакуумный испаритель. Гомогенизатор или измельчитель
тканей. Аппарат для встряхивания. Баня водяная. Весы лабораторные рычажные.
Колбы конические плоскодонные на шлифах вместимостью 250 и 100 мл. Делительные
воронки. Цилиндры мерные на 100; 50; 25 и 10 мл. Пробирки мерные на шлифах
вместимостью 5 - 10 мл. Пипетки на 1; 5 и 10 мл. Воронки химические. Ступка
фарфоровая, пестик.
Для ГЖХ. Хроматограф марки
"Цвет-106" с ТИД или аналогичный прибор. Компрессор для нагнетания
воздуха. Колонки стеклянные длиной 1 м, диаметром 2 мм. Микрошприцы
на 10 мкл.
Подготовка к определению. Подготовка хроматографической колонки для ГЖХ. Колонку заполняют
общепринятым в хроматографии способом, предварительно в течение 24 - 72 ч ее
продувают азотом при температуре 240 °C.
Ход анализа. Экстракция и очистка
экстрактов. 10 мл среднего образца молока переносят в колбу с притертой
пробкой, добавляют 30 г безводного сульфата натрия, залипают 40 мл смеси этанола
и ацетона (1:3) и помещают на 1 ч в холодильник. Затем экстракт фильтруют через
бумажный фильтр в делительную воронку. Добавляют 40 мл 2-процентного раствора
сульфата натрия и трижды экстрагируют гексаном
порциями по 30 мл в течение 2 - 3 мин., каждый раз сливая гексановый
слой через фильтр с безводным сульфатом натрия в колбу прибора для отгонки
растворителей. Упаривают растворитель досуха под вакуумом на ротационном
испарителе при температуре бани не более 45 °C.
20 г гомогенизированного образца
мясопродуктов (органов и тканей) переносят в колбу с притертой пробкой,
добавляют 30 г безводного сульфата натрия, 50 мл хлороформа и встряхивают на
аппарате в течение 1 ч. Затем экстракт фильтруют в колбу прибора для отгонки
растворителей. Колбу с образцом промывают 20 мл хлороформа и сливают в отгонную
колбу. Затем растворитель упаривают досуха под вакуумом на ротационном
испарителе при температуре бани не более 45 °C. Сухой остаток растворяют в 40
мл смеси этанола с ацетоном и фильтруют в делительную воронку. Дальнейшую
очистку проводят так же, как пробу молока.
Условия определения методом ГЖХ. Сухой
остаток растворяют в 5 - 10 мл этилового спирта, добавляют 2 г безводного
сульфата натрия и хроматографируют аликвоту 2 - 5 мкл.
Условия
хроматографирования. Хроматограф
"Цвет-106" или
аналогичный
прибор с ТИД.
Температурный режим термостата колонки 180 °C, испарителя -
220 - 225 °C.
Скорость потока газа-носителя
(азота) 22 - 24 мл/мин.,
воздуха - 200
мл/мин., водорода -
14 - 18 мл/мин.
Рабочая шкала
-10
электрометра 2 x
10 А. Скорость диаграммной ленты 10
мм/мин. Стеклянная
хроматографическая
колонка длиной 1 м, диаметром 3 мм с OV-101, нанесенной
в количестве
3% на инертон-супер. Линейность
детектирования на OV-101
соблюдается в
пределах 0,2 - 1 нг. Время удерживания этафоса на
OV-101 -
1,75 - 1,8 мин.
В качестве альтернативной колонки для
идентификации этафоса в органах и тканях, а также в
молоке служит колонка с инертоном-супер с 5% QF-1.
При соблюдении названных условий хроматографирования
время удерживания этафоса на QF-1 - 1,7 мин.
Обработка результатов анализа. Содержание
препарата в пробе (X, мг/л или мг/кг) определяют методом соотношения со
стандартом по площади (высоте) пика по формуле:
CS V K
2 2
X = ------
S V P
1 1
или
CH
V K
2 2
X = ------,
H V P
1 1
где:
C - концентрация стандартного раствора,
введенного в хроматограф, нг;
S ,
H - площадь
и высота пика стандартного
раствора, введенного в
1
1
хроматограф, кв.
мм, мм;
S ,
H - соответственно площадь
и высота пика препарата в пробе,
2
2
кв. мм, мм;
V -
объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл;
1
V -
общий объем экстракта после упаривания, мл;
2
P - масса или объем анализируемой пробы, г или мл;
K - поправочный коэффициент (для молока
1,25, для мясопродуктов 1,33).
Требования безопасности. Следует
соблюдать правила предосторожности, необходимые при работе с токсичными,
взрывоопасными и легковоспламеняющимися веществами.