Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
28 декабря 1982 г. N 2645-82
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТРЕФЛАНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ТОМАТАХ И КАПУСТЕ
МЕТОДОМ УФ-СПЕКТРОФОТОМЕТРИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ
ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
(Дополнения к "Методическим
указаниям по определению
микроколичеств трефлана и нитрофора",
утв. 18 ноября 1977 г. за N 1790)
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия временных методических
указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при
МСХ.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Марциновского
Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика препарата
2,6-Динитро-4-трифторметил-NN-дипропиланилин
- трефлан (трифлуралин, трифторалин), кристаллическое вещество темно-оранжевого
цвета.
Структурная формула:
NO C H
--- /
2 / 3 7
F C_//
\\____N
3 \
___ / \C H
--- \ 3 7
NO
2
Эмпирическая формула: C H F N
O . М.м. 335,22.
13 16 3 3 4
Температура плавления 48,5 - 49 °С, температура кипения 96 - 97° при 0,18 мм рт. ст. Трудно
растворим в воде и в этиловом спирте, хорошо в ацетоне, ксилоле, ДХЭ, толуоле,
хлороформе и др. Выпускается в виде 25-процентного концентрата эмульсии или
смачивающегося порошка.
2. Методика
определения трефлана в воде, почве,
томатах и капусте методом УФ-спектрофотометрии
с использованием тонкослойной хроматографии
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода. Метод основан на
извлечении трефлана из анализируемой пробы
органическими растворителями, хроматографировании в
тонком слое окиси алюминия в подвижном растворителе н-гексане
с последующим спектрофотометрированием в
ультрафиолетовой области спектра при длине волны 240 нм.
2.1.2. Метрологическая характеристика
приведена в таблице 1.
Табл. 1
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ТРЕФЛАНА (ДИАПАЗОН ОПРЕДЕЛЯЕМЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ 2 -
100 МКГ)
┌─────────────────────────────────────┬──────────────────────────┐
│ Стат. показатели │ Анализируемый объект │
│ ├─────┬─────┬───────┬──────┤
│ │вода
│почва│капуста│томаты│
├─────────────────────────────────────┼─────┼─────┼───────┼──────┤
│Предел
обнаружения, мг/кг │0,02
│0,02 │0,02 │0,02 │
│Количество
параллельных проб │20 │20
│20 │20 │
│Стандартное
количество │91,1 │92,7
│93,0 │86,3 │
│обнаруженного
пестицида, % │ │
│ │ │
│Размах
варьирования, % │9,7 │12,3 │12,5 │8,6
│
│Абсолютное
стандартное отклонение, % │4,0 │2,38
│3,2 │2,96 │
│Относительное
стандартное отклонение,│3,96 │4,06 │4,14 │4,46
│
│% │ │
│ │ │
│Доверительный
интервал среднего при │4,6 │4,8
│3,4 │3,0 │
│Р = 0,95 │ │
│ │ │
└─────────────────────────────────────┴─────┴─────┴───────┴──────┘
2.2. Реактивы и
материалы
Хлороформ, ч.д.а.,
ГОСТ 2603-71.
Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-66.
Кальций сернокислый, ч.д.а.,
ГОСТ 3210-46.
(Просушивают 5 ч в сушильном шкафу при
225 °С; хранят в банке с притертой пробкой.)
Окись алюминия II степени активности,
просеянная через сито 100 меш, ТУ-6-09-09.
н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-73.
Стандартный гексановый
раствор трефлана, содержащий 100 мкг (10 мкг трефлана растворяют в 100 мл гексана).
2.3. Приборы и
посуда
Аппарат для встряхивания жидкости в
лабораторной посуде, ТУ 63-1-1081.
Шкаф сушильный электрический
общелабораторного назначения, ТУ 16-531-299-71.
Ротационный испаритель ИР-IM, ТУ 25-11-917-74.
Баня водяная, ТУ 46-22-608-75.
Воронка делительная на 250 мл, ГОСТ
8613-75.
Камера для хроматографирования,
ГОСТ 10565-75.
Колбы круглодонные для отгонки
растворителя на 100 мл, ГОСТ 10394-72.
Пластинки стеклянные для нанесения
тонкого слоя сорбента размером 9 х 12 см.
Пульверизатор стеклянный.
Микропипетки на 0,1 мл с ценой деления
0,001 мл.
Фарфоровая ступка.
Миксер или мясорубка.
Спектрофотометр СФ-4а или аналогичный
прибор.
Лабораторная центрифуга.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Отбор проб
Отбор и хранение производят в
соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб",
утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР за
N 2051-79 от 21 августа 1979 г.
2.4.2. Приготовление хроматографических
пластинок
Для приготовления сорбционной массы 100 г
окиси алюминия, 10 г сернокислого кальция (гипса) и 110 мл дистиллированной
воды помещают в 500-миллиметровую коническую колбу с притертой пробкой,
энергично взбалтывают до образования однородной массы. Полученную массу (~ 22 г
на 1 пластинку) наносят тонким слоем (0,1 мм) на заранее приготовленные
пластинки. Пластинки с сорбентом сушат при комнатной температуре, затем на 10
минут ставят для активации под УФ-лампу на расстоянии
25 см, хранят активированные пластинки в эксикаторе.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Выделения трефлана
из объектов внешней среды и очистка
Томаты, капуста. Из средней пробы
растительного материала, гомогенизированной миксером или мясорубкой, отбирают
навеску 100 г. Пробу трижды экстрагируют хлороформом по 50 мл. Экстракты
объединяют, фильтруют, пропускают через слой безводного сернокислого натрия (5
г). С помощью ротационного испарителя экстракт выпаривают досуха (температура
водяной бани не выше 35 °С).
Очистку
экстракта проводят с
помощью колоночной хроматографии.
Стеклянную колонку (размером
400 х 10 мм) заполняют 5 г Al O (высота слоя
2 3
5 см). Промывают
ее 25 мл гексана
(отбрасывают). Затем колбочку с сухим
экстрактом дважды
ополаскивают по 3 мл гексана, который вносят в
колонку.
Элюирование производится
120 мл гексана. Полученный
элюат
выпаривают
досуха.
Вода. 100 или 200 мл анализируемой воды
помещают в делительную воронку и трижды экстрагируют хлороформом по 50, 40 и 30
мл в течение 15 минут при энергичном встряхивании. Экстракты объединяют,
фильтруют, пропуская через слой безводного сернокислого
натрия и упаривают досуха с помощью ротационного испарителя.
Почва. 100 г воздушно-сухой почвы
растирают в ступке и просеивают через сито. Пробу заливают 100 мл хлороформа и
ставят на аппарат для встряхивания на 30 мин. Растворитель отфильтровывают
через складчатый фильтр, почву трехкратно промывают хлороформом по 20 мл.
Объединенный экстракт упаривают досуха. Очистку экстракта проводят
как указано выше.
2.5.2. Идентификация и количественное
определение содержания трефлана в некоторых объектах
внешней среды
Колбочку
с очищенным экстрактом
трехкратно ополаскивают 0,1 мл
хлороформа и
содержимое медленно наносят на хроматографическую
пластинку.
Рядом с
пробой наносят стандартный
раствор трефлана (10
- 20 мкг).
Пластинку с
нанесенными пробами хроматографируют в гексане. R для трефлана
f
равна 0,6 -
0,7. После разгонки пластинку вынимают из камеры и держат при
комнатной температуре
до полного высыхания. В случае наличия трефлана в
пробах на пластинке
видны пятна желтого
цвета, интенсивность окраски
которых зависит
от количества его в пробе; сравнивая окраску пятен пробы со
стандартом, можно
определить содержание остаточного
количества трефлана.
Для точного
количественного
определения трефлана проводится
спектрофотометрирование.
Для этого участок
пятна совместно со
слоем
сорбента снимают
и переносят в центрифужную пробирку. В пробирку
наливают 3
мл н-гексана, закрывают
корковой пробкой и оставляют на 1
час. Время от
времени содержимое
пробирки необходимо взбалтывать. После этого элюат,
не
отделяя от окиси
алюминия, центрифугируют и осторожно, не взмучивая осадок,
сливают в другую центрифужную
пробирку с делением и объем доводят гексаном
до 3 мл. Затем
определяют оптическую плотность
раствора при 240 н.м.
Количество трефлана находят по калибровочной кривой.
Калибровочная кривая
строится на
основании анализа по описанной методике образцов воды, почвы,
томатов и
капусты, в которые вносились различные количества
стандартных
растворов трефлана. Зависимость
оптической плотности от
концентрации
трефлана в пробе подчиняется закону Бугера-Ламберта-Бера в пределах от 10
до 100 мкг.
2.6. Обработка
результатов
Расчет анализа проводится по следующей
формуле:
А
Х = -,
Р
где:
Х - содержание трефлана
в анализируемой пробе, мг/кг; мг/л;
А - количество трефлана,
найденное по калибровочному графику, мкг;
Р - навеска пробы в граммах.
3. Требования
безопасности
Соблюдаются требования безопасности,
обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами.
4. Настоящие Методические указания
разработаны Таджикским НИИ эпидемиологии и гигиены, г. Душанбе.