Утверждены

Минздравом СССР

6 августа 1981 г. N 2422-81

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РОВРАЛЯ В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ТОМАТАХ,

КАРТОФЕЛЕ, ВИНОГРАДЕ, ВИНОГРАДНОМ СОКЕ И ВИНЕ МЕТОДОМ

ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

 

--------------------------------

<*> Разработаны Филиалом ВНИИГИНТОКС, Республиканской станцией защиты растений, г. Алма-Ата.

 

    Краткая        характеристика        препарата.        Ровраль        -

1-изопропил-карбамоил-3-(3,5-дихлорфенил)-3-гидантион.    Брутто -  формула

C  H  O N C  . Молекулярная масса 330,17. Общепринятое название - ипродион.

 13 13 3 3 12

ДСД  0,3  мг/кг.  В  винограде МДУ 0,4 мг/кг, содержание остатков ровраля в

землянике,  картофеле,  огурцах,  томатах  не  допускается. В воде ПДК 0,03

мг/л.  Химически  чистый  препарат  -  белое  кристаллическое  вещество без

запаха, т. пл. 136 °С, растворим в этаноле, ацетонитриле, толуоле, бензоле,

ацетоне,  метилене  хлористом  и  практически нерастворим в воде. Упругость

                                                 -5

паров  незначительна:  при  20  °С  -  2,7  х  10   Па. Ровраль - фунгицид,

применяемый в борьбе с серой гнилью на винограде и овощных культурах.

Принцип метода. Метод основан на извлечении препарата из анализируемых проб органическим растворителем ацетонитрилом или ацетоном, очистке экстрактов путем перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями и последующем определении методом ТСХ. При необходимости экстракт дополнительно очищают на колонке с силикагелем.

Метрологическая характеристика метода. Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 131.

 

Таблица 131

 

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

 

┌─────────────────────────┬───────────────────────────────────────────────────────────────┐

│        Параметры        │                     Анализируемый объект                      │

│                         ├────────┬────────┬────────┬────────┬────────┬─────────┬────────┤

│                         │   Вода │ Почва  │ Томаты │Карто-  │Виноград│Виноград-│  Вино  │

│                         │        │        │        │фель    │        │ный сок  │        │

├─────────────────────────┼────────┼────────┼────────┼────────┼────────┼─────────┼────────┤

│Предел обнаружения, мкг  │2,0     │2,5     │5,0     │2,5     │5,0     │5,0      │5,0     │

│Предел определения,      │0,02    │0,05    │0,1     │0,05    │0,2     │0,1      │0,1     │

│мг/л или мг/кг           │        │        │        │        │        │         │        │

│Среднее значение         │93,5    │87,6    │83,0    │90,8    │84,0    │86,0     │76,0    │

│определения, %           │        │        │        │        │        │         │        │

│Стандартное отклонение, %│+/- 4,52│+/- 3,29│+/- 5,70│+/- 3,62│+/- 5,50│+/- 5,90 │+/- 5,50│

│Доверительный интервал   │+/- 5,61│+/- 4,08│+/- 7,07│+/- 4,49│+/- 6,80│+/- 7,30 │+/- 6,80│

│(n = 5, p = 0,95), %     │        │        │        │        │        │         │        │

└─────────────────────────┴────────┴────────┴────────┴────────┴────────┴─────────┴────────┘

 

Избирательность метода. Определению ровраля не мешают препараты дерозал, бенлат, зупарен, применяемые, как и ровраль, при борьбе с серой гнилью.

    Реактивы и материалы. Ацетонитрил, ч. Бензол, х.ч. н-Гексан, ч. Толуол,

ч.д.а.    Сульфат    натрия    безводный,    ч.д.а.    Хлористый   метилен,

свежеперегнанный.  Ацетон, ч.д.а. Гептан, х.ч. Этиловый эфир (медицинский).

Едкий   натр,  х.ч.,  1  М  водный  раствор.  Едкое  кали  особой  чистоты,

15-процентный.   Этиловый   спирт,  х.ч.  Хлороформ,  х.ч.  Хлороводородная

кислота, х.ч., 0,1 М и 5 М. Нитрит натрия, х.ч. Хлорид аммония 5-процентный

раствор  в  0,1  М хлороводородной кислоте или аммоний  сульфаниловокислый,

5-процентный  раствор  в  0,1  М  хлороводородной кислоте. Этилацетат, х.ч.

Силикагель  для  хроматографии  Л  100/160   мю.   N-(1-нафтил)этилендиамин

дигидрохлорид, ч. 1-Нафтол, ч.д.а. Дифениламин, ч.д.а. Хлорид цинка, ч.д.а.

Пластинки хроматографические  "Силуфол" УФ   . Диазореактив: к 10 г нитрита

                                          254

натрия  приливают 20 мл концентрированной хлороводородной кислоты и доводят

объем  жидкости  до  50  мл  дистиллированной  водой  (раствор используется

свежеприготовленным).  Проявляющие  реагенты:  N  1  -  5  г   N-(1-нафтил)

этилендиамина растворяют в  100  мл  1  М  хлороводородной  кислоты;  N 2 -

1-процентный раствор 1-нафтола в этиловом спирте; N 3 - 2,8 г  едкого  кали

растворяют в 50 мл дистиллированной  воды  и  добавляют  0,1  г  1-нафтола.

Раствор  устойчив в течение 7 дней при хранении в холодильнике; N 4 - 0,5 г

дифениламина  растворяют  в  100  мл  ацетона  и добавляют 0,5 г хлористого

цинка.   Раствор   используется  свежеприготовленным.  Стандартный  раствор

ровраля с содержанием 100 мкг д.в. препарата в 1 мл хлороформа, ацетона или

этилового  спирта.  Готовят  из  х.ч.  или  технического препарата с учетом

процентного содержания действующего вещества. Раствор устойчив в течение 10

- 15 дней.

Приборы, аппаратура и посуда. Прибор для отгонки растворителей. Камера для хроматографирования. Камера для опрыскивания хроматографических пластинок. Воронки: делительные на 0,5 и 1 л; химические; Бюхнера. Колбы: конические на 0,25 и 1 л; мерные на 100 и 1000 мл; стеклянные размером 300 х 15 мм для колоночной хроматографии, круглодонные со шлифом 29 на 250 мл; Бунзена. Пипетки на 1; 2 и 5 мл.

Микропипетки. Пульверизаторы стеклянные. Шкаф сушильный. Вентилятор или фен. Водоструйный насос. Стекловата.

Подготовка к определению хроматографической колонки. В стеклянную колонку (300 х 15 мм) помещают небольшой стекловатный тампон, затем селикагель на высоту 10 см. Перед употреблением колонку промывают 50 мл гексана.

Ход анализа. Экстракция и очистка. Пробу воды (100 мл) помещают в делительную воронку и трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 50; 30 и 30 мл. Объединенный экстракт высушивают безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель на ротационном испарителе при температуре 60 - 70 °С. Остаток количественно переносят ацетоном на хроматографическую пластинку.

Пробу измельченного растительного материала (томаты, картофель) или почвы (50 г) экстрагируют трижды 75 мл ацетонитрила, экстракты фильтруют в делительную воронку и очищают гексаном 3 раза по 30 мл, гексановый экстракт промывают 30 мл ацетонитрила и сливают с начальным ацетонитрильным экстрактом, а гексановый экстракт отбрасывают. Объединенный ацетонитрильный экстракт упаривают на ротационном испарителе до 20 - 30 мл. К остатку ацетонитрила добавляют смесь воды с хлористым метиленом (80:50) и встряхивают 5 мин. Отделяют хлористый метилен и пропускают через безводный сернокислый натрий в круглодонную колбу, водный раствор экстрагируют метиленом хлористым еще дважды по 30 мл, пропускают через безводный сернокислый натрий и собирают в круглодонную колбу ротационного испарителя. Растворитель выпаривают досуха. Если экстракты очистились недостаточно, очистку проводят на хроматографической колонке.

Измельченные ягоды винограда (25 г) гомогенизируют с 150 мл ацетона 5 - 10 мин. Массу фильтруют на воронке Бюхнера, осадок промывают двумя порциями ацетона по 50 мл. Из объединенного фильтрата растворитель удаляют на ротационном испарителе при температуре не более 65 °С, а оставшуюся жидкость переносят количественно в делительную воронку и добавляют 50 мл бензола, встряхивают 3 - 5 мин. При образовании эмульсии добавляют 1 мл этилового спирта. Бензольный экстракт фильтруют в колбу через слой безводного сернокислого натрия и отгоняют до 0,5 - 1 мл. Следы растворителя удаляют током воздуха. Сухой остаток растворяют в ацетоне, переносят количественно на хроматографическую пластинку.

Сок или вино (50 мл) помещают в коническую колбу на 1 л и встряхивают с 250 мл ацетона 1 - 2 мин. Затем оставляют в покое на 10 мин. Из смеси растворитель удаляют на ротационном испарителе при температуре 65 °С. Дальше поступают, как описано для винограда.

Очистка на колонке. Пробу вносят в колонку с помощью 25 мл гексана (5 х 5 мл). Коэкстрактивные вещества вымывают из колонки 50 мл гексана, препарат элюируют 25 мл хлористого метилена, затем 5-процентным раствором этилацетата в хлористом метилене (100 мл). Элюат упаривают.

Хроматографирование. Хроматографирование проводят нисходящим способом. Хроматографические пластинки "Силуфол" сгибают от верхнего края на 2 см. Пробы с помощью ацетона и стандартные растворы наносят на пластинку на расстоянии 2 см от линии сгиба. Гнутый конец пластинки помещают в лодочку, в которую налит подвижный растворитель - смесь гептан - этиловый эфир (1:4) или смесь толуол - этанол (93:7). Лодочка помещена в камеру для хроматографирования. После окончания хроматографирования пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут на воздухе (под вытяжкой) для удаления следов растворителей.

Условия проявления хроматограмм (в зависимости от проявляющего реактива): А. Хроматограмму опрыскивают смесью 1 М раствора едкого натра и этилового спирта (50:50). Выдерживают пластинку в сушильном шкафу при 120 °С в течение 10 мин., затем опрыскивают последовательно 5 М хлороводородной кислотой, диазореактивом, 5-процентным раствором хлорида аммония и сульфаминокислого аммония в 0,1 М хлороводородной кислоте. После высушивания пластинок в токе воздуха хроматограмму обрабатывают проявляющим реагентом N 1 или N 2;

Б. Пластинки опрыскивают 15-процентным спиртовым раствором едкого кали и термостатируют при 150 °С в течение 20 мин., затем пластинки последовательно обрабатывают диазореактивом и проявляющим реагентом N 3 или N 4.

    При   наличии   ровраля   в   пробе   на   хроматограммах   проявляются

розово-фиолетовые  пятна  в  случае  применения  проявляющего реагента N 1,

оранжевые  пятна  -  в  случае применения реагента N 2, 3 или малиновые - в

случае применения реагента N 4. Величина R  пятен 0,35 (гептан - диэтиловый

                                          f

эфир, 1:4) и 0,50 - 0,55 (толуол - этанол, 93:7).

Обработка результатов анализа. Количественная оценка хроматограмм проводится путем сравнения площадей пятен и их интенсивности, проб и стандартных растворов. Содержание препарата в исследуемой пробе (Х, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:

 

                                      А

                                  Х = -,

                                      Р

 

где:

А - количество препарата в анализируемой пробе, мкг;

Р - количество или объем анализируемой пробы, г или мл.

Требования безопасности. При проведении исследований необходимо соблюдать правила предосторожности, требуемые при работе с ядовитыми, взрыво- и легковоспламеняющимися веществами.