Утверждены
Минздравом СССР
30 марта 1981 г. N 2367-81
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИКВАТА В СЕМЕНАХ ПОДСОЛНЕЧНИКА
МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Краткая
характеристика препарата. Действующее начало - дикват
(1,1'-этилен-2,2'-дипиридиний дибромид). Брутто-формула
C H Br N .
Молекулярная масса 360,05.
В чистом виде дикват -
12 12 2
2
белое кристаллическое вещество
с т. пл. 335 - 340 °C. Дикват
хорошо
растворяется в воде, хуже - в спирте и
не растворяется в
не смешивающихся
с водой
органических растворителях.
В кислой и
нейтральной
средах стабилен, под действием
щелочей разлагается и
образует окрашенный
продукт. При облучении
УФ-лучами препарат
полностью разлагается
в течение 192 ч.
ДСД 0,008 мг/кг, МДУ в
семенах подсолнечника 0,05 <*> мг/кг.
--------------------------------
<*> Временный норматив.
Принцип метода. Метод основан на
извлечении диквата из проб семян 1 н раствором серной
кислоты, очистке экстракта на колонке с катионитом КУ-2 и хроматографировании
в тонком слое силикагеля. Хроматографирование
проводят дважды в различных подвижных фазах. Первой подвижной фазой служит
этиловый спирт, второй - смесь муравьиной кислоты с водой в соотношении 10:1.
При сильно загрязненных экстрактах хроматографирование
в этиловом спирте проводят дважды.
Для обнаружения диквата
пластинку вначале обрабатывают 3-процентным водным раствором сульфита натрия, а
затем, после высушивания, - 0,1-процентным раствором бромтимолового
синего.
Метрологическая характеристика метода.
Диапазон определяемых концентраций 1 - 20 мкг. Предел определения 0,05 мг/кг.
Среднее значение определения при n = 5 равно 82%. Доверительный интервал
среднего при p = 0,95 равен +/- 8,6%.
Реактивы и растворы. Серная кислота х.ч., 1 н. Хлороводородная
кислота 1 н и 4 н водные растворы. Азотная кислота 2 н раствор. Гидроксид
натрия 10 н водный раствор. Динатриевая соль
этилендиаминтетрауксусной кислоты ч.д.а.,
5-процентный раствор. Катионообменная смола КУ-2 в
H-форме (фракция 0,25 - 0,5 мм). Сульфит натрия, 3-процентный водный раствор.
Универсальная индикаторная бумага. Бромтимоловый
синий, 0,1-процентный раствор в 50-процентном этаноле. Спирт этиловый ректиф., 96-процентный. Муравьиная кислота ч.д.а. 85-процентная. Стандартный 0,1-процентный спиртовой
раствор диквата (0,1 г х.ч.
100-процентного препарата диквата растворяют в 100 г
этилового спирта).
Приборы
и посуда. Хроматографическая колонка (стеклянная
бюретка на
25 мл длиной
50 см, диаметром 9 - 10 мм). Колбы:
круглодонная; Бунзена; мерные.
Электроплитка. pH-Метр. Стеклянный
обратный холодильник
со шлифом. Воронка Бюхнера. Стаканы на 0,1;
0,5 л. Хроматографическая камера (эксикатор). Фарфоровые чашки для
выпаривания. Стеклянные
пипетки с оттянутым
концом. Пластинки
"Силуфол" УФ .
254
Подготовка колонки. В хроматографическую
колонку диаметром 1 см помещают комок стекловаты и заполняют катионитом КУ-2 в
H-форме на высоту до 5 м. Колонку с катионитом промывают водой до нейтральной
реакции. Катионит КУ-2 в H-форме готовят по известным методикам.
Ход анализа. Экстракция и очистка
экстракта. Пробу семян (50 г) помещают в круглодонную колбу, заливают 250 мл 1
н раствора серной кислоты, присоединяют к колбе обратный холодильник и кипятят
на электроплитке 3 ч. Экстракт охлаждают и фильтруют через воронку Бюхнера. Остаток на фильтре промывают 3 порциями воды по 25
мл. Объем экстракта доводят дистиллированной водой до 250 мл. Аликвотную часть
(50 мл) фильтрата переносят в стакан, приливают 12 - 15 мл 10 н гидроксида
натрия и, добавляя гидроксид натрия по каплям, доводят pH
до 8 - 9. Контроль за изменением pH
растворов проводят при помощи pH-метра. Затем, в этот
же стакан приливая 5-процентный раствор динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты, доводят
pH фильтрата до 6 - 7.
Нейтрализованный фильтрат пропускают через хроматографическую
колонку со
скоростью 8 - 10 мл/мин. Колонку промывают 25 - 30 мл 2
н раствором
азотной кислоты со скоростью 4 - 5 мл/мин., а затем
дистиллированной водой
до нейтральной реакции по
универсальной
индикаторной бумаге.
Элюируют
дикват
50 мл 4
н раствором
хлороводородной
кислоты со скоростью 1 - 2
мл/мин. Колонку можно
промывать и 1
н раствором хлороводородной
кислоты, однако элюат
при упаривании
более загрязнен. Элюат
собирают в стакан, переносят
его в
фарфоровую чашку и
выпаривают досуха на электроплитке с
закрытым элементом
при температуре до 200 °C в вытяжном шкафу.
Остаток растворяют
в 2 мл
этилового спирта и
наносят на
хроматографическую
пластинку "Силуфол" УФ . Диаметр
нанесенного
254
пятна не более 0,5 см. Фарфоровую чашку трижды
промывают этиловым
спиртом.
Хроматографирование. Для отделения диквата от примесей
пластинку помещают в хроматографическую камеру с
подвижной фазой - этиловым спиртом. При этом примеси поднимаются на пластинке с
фронтом растворителя, в то время как дикват остается
в точке нанесения. В случае если пластинка перегружена примесями, хроматографирование в камере с этиловым спиртом повторяют.
Затем пластинку сушат и хроматографируют в камере с
подвижной фазой муравьиная кислота - вода (10:1). После того как растворитель
поднимается на 7 - 8 см, пластинку вынимают, сушат до полного удаления запаха
муравьиной кислоты.
Проявляют
пластинку, обрабатывая ее
3-процентным раствором
сульфита натрия.
При наличии диквата
на хроматограммах появляются
пятна желтого
цвета. Далее высушенную
пластинку опрыскивают
0,1-процентным раствором
бромтимолового
синего в
50-процентном
этаноле.
Чувствительность этой реакции
0,1 мкг. Пятна при этом
окрашиваются в
синий цвет. R диквата
0,6.
f
Обработка результатов анализа.
Количественное определение препарата проводят сравнением размеров площади пятен
исследуемого вещества и стандартного раствора и по калибровочному графику
зависимости площади пятен от логарифма концентрации. Количество диквата (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
AV
X = ---,
PV
1
где:
A - количество диквата
в пробе, мкг;
P - масса исследуемой пробы, г;
V - объем экстракта, мл;
V -
объем аликвотной части анализируемого экстракта, мл.
1
Требования безопасности. Соблюдаются
требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими
реактивами.