Утверждены
Минздравом СССР
30 марта 1981 г. N 2351-81
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БАЦИТРАЦИНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
МЕТОДОМ БУМАЖНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Краткая характеристика препарата. Бацитрацин - антибиотик, получаемый микробиологическим
синтезом. Применяется в животноводстве в качестве ростостимулирующего вещества.
Выпускается в виде препарата бацилихина. Бацитрацин - бесцветный гигроскопический порошок горького
вкуса. Растворим в метаноле, этиловом, изопропиловом, бутиловом спирте и воде. Нерастворим в ацетоне, хлороформе, бензоле. ПДК в воздухе
рабочей зоны 0,01 мг/куб. м по бацитрацину.
Принцип метода. Определение основано на
реакции взаимодействия бацитрацина с нингидриновым раствором. Нижний предел обнаружения 5 мкг в
анализируемом объеме. Предел определения 0,1 - 5,0 мг/куб. м. Погрешность
определения +/- 20%. Определению мешают другие аминосоединения.
Реактивы и растворы. Пропиловый
спирт х.ч. Бензол х.ч.
Ледяная уксусная кислота х.ч. Этиленгликоль х.ч. Бутиловый спирт х.ч. Раствор
нингидрина 1-процентный в насыщенном водой бутиловом
спирте (11,2 мл бутилового спирта + 100 мл воды). Стандартный раствор бацитрацина в этиловом спирте - 2,5 мг/мл: 62,5 мг
стандарта бацитрацина помещают в колбу на 25 мл,
доводят объем раствора до метки этиловым спиртом, хранят в холодильнике.
Приборы и посуда. Стаканы на 50 мл. Колбы
мерные на 25 мл. Микропипетки. Камера для хроматографирования.
Цилиндры мерные на 10 мл. Бумага фильтровальная "Ватман-1" или
подобная. Фильтры АФА-ХП-18, АФА-ВП-10. Весы аналитические. Центрифуга. Электрокалорифер ЭК-4 или подобный. Электроаспиратор.
Отбор пробы воздуха. Воздух протягивают
со скоростью 10 л/мин. через фильтр с помощью электроаспиратора.
Для анализа необходимо отобрать 200 л воздуха.
Ход
анализа. Фильтр с
пробой помещают в стакан на 50 мл,
препарат
смывают 2 - 3 раза минимальным
количеством воды, в сумме
не более 10 мл, центрифугируют. Раствор
упаривают досуха в токе
воздуха от электрокалорифера. Сухой остаток растворяют в 0,2 - 0,5
мл этанола
и проводят хроматографирование. На
полоску
хроматографической бумаги размером 16 x 10 см
наносят от 5 до 30
мкл испытуемого раствора
и раствора стандарта концентрацией 2,5
мг/мл. Каждый раз место, куда
нанесена капля раствора, слегка
подсушивают в
токе теплого воздуха.
На дно хроматографической
камеры наливают
систему растворителей, состоящую
из 50 мл смеси
пропилового спирта с водой (3:1), 10 мл
бензола, 2 мл
ледяной
уксусной кислоты
и 3 мл этиленгликоля. Через 40 - 60
мин. камера
насыщается
парами растворителей и готова к работе. В камеру
вносят
хроматографическую
бумагу, которую крепят на
стеклянной палочке.
Полоска должна
погрузиться в жидкость на 1 см и не касаться стенок
камеры. Разгонка
длится 4 ч.
Затем полоску хроматографической
бумаги вынимают
из камеры и подвешивают в вертикальном положении
на воздухе
на 10 - 15 мин.
Затем ее опрыскивают 1-процентным
раствором нингидрина и
ставят в сушильный шкаф при 100 °C на 10
мин. для
проявления. В результате
нагревания в местах,
где
присутствует антибиотик, появляются фиолетовые
пятна с R 0,81
f
+/- 0,02.
Содержание
бацитрацина
определяют, сравнивая площадь
и
интенсивность
окраски пятна пробы и стандарта.
Концентрацию бацитрацина в воздухе (X, мг/куб. м) определяют
по формуле:
CS
x
X = ----,
S V
0 о
где:
C - количество бацитрацина
в стандарте, мкг;
S -
площадь пятна пробы, кв. мм;
x
S -
площадь пятна стандарта, кв. мм;
0
V -
объем пропущенного воздуха,
приведенный к атмосферному
о
давлению 101,3
Па и температуре 20 °C, л.
Можно также использовать формулу:
A
X = -,
V
где:
A - содержание вещества в пробе, мкг;
V - объем воздуха, отобранный для
анализа, л.
Требования безопасности. Соблюдаются меры
безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами.