Утверждаю
Заместитель Министра
мясной и молочной
промышленности
Ю.С.СОКОЛОВ
25 декабря 1980 года
ИНСТРУКЦИЯ
ПО ТЕХНОХИМИЧЕСКОМУ КОНТРОЛЮ ДЛЯ ПРЕДПРИЯТИЙ,
ВЫРАБАТЫВАЮЩИХ МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ ДЛЯ ДЕТЕЙ
РАЗЛИЧНЫХ ВОЗРАСТНЫХ ГРУПП
ВВЕДЕНИЕ
Инструкция предназначена для
специализированных цехов и заводов, вырабатывающих жидкие и пастообразные
молочные продукты для детей различных возрастных групп.
К молочным продуктам, предназначенным для
детей раннего возраста, относятся:
- жидкие молочные
продукты для грудных детей (стерилизованные смеси "Малыш" и
"Малютка", молоко "Виталакт ДМ",
"Виталакт обогащенный" и др.);
- жидкие и пастообразные кисломолочные
продукты (кефир детский, биолакт, "Виталакт кисломолочный", смеси ацидофильные
"Малыш" и "Малютка", творог детский и др.).
К молочным продуктам, предназначенным для
дошкольного и школьного питания, относятся кисломолочные продукты (кефир,
простокваша, творог, сметана и др.), а также молоко и сливки пастеризованные.
Производство этих детских молочных
продуктов характеризуется различными технологическими процессами, требованиями
по физико-химическим показателям и методам контроля.
Настоящая Инструкция устанавливает единую
систему технологического и органолептического контроля качества сырья,
используемых в производстве пищевых компонентов, <...> этапов
технологического процесса производства жидких и пастообразных детских молочных
продуктов, готовой продукции, позволяющую обеспечить выпуск продукции в строгом
соответствии с требованиями стандартов, технических условий, рецептур и
технологических инструкций.
Контроль производства детских молочных
продуктов по микробиологическим показателям, а также контроль
санитарно-гигиенического состояния производства осуществляется в соответствии с
"Инструкцией по микробиологическому контролю производства жидких и
пастообразных детских молочных продуктов", утвержденной Минмясомолпромом СССР в 1980 г.
Контроль режима и качества мойки,
дезинфекции посуды, аппаратуры и оборудования осуществляется в соответствии с
"Инструкцией по санитарной обработке оборудования на предприятиях молочной
промышленности", утвержденной Минмясомолпромом
СССР в 1978 г.
Цеховой технохимический контроль
заключается в регистрации основных количественных и качественных показателей
производственных процессов в специальных журналах и выполняется лицами,
непосредственно участвующими в проведении этих процессов (аппаратчиком,
мастером, бригадиром, сменным инженером, сменным химиком).
Лабораторный технохимический контроль
заключается в контроле сырья, пищевых компонентов, полуфабрикатов, готовой
продукции, вспомогательных материалов, качества мойки оборудования и др.
Порядок приемки сырья, тары, материалов,
припасов осуществляется в соответствии с требованиями "Инструкции по
технохимическому контролю на предприятиях молочной промышленности",
утвержденной Минмясомолпромом СССР в 1976 г.
Лабораторный контроль осуществляется
лабораторией завода (цеха).
Для выполнения настоящей Инструкции в
лаборатории необходимо иметь техническую документацию на молоко и сливки сырые,
молочные продукты для детского питания, припасы, материалы, тару, применяемые в
производстве жидких и пастообразных молочных продуктов детского питания, а
также на методы анализа.
1. Контроль сырья
1.1. Отбор проб
Отбор проб производят в соответствии с
ГОСТом 13928-68 "Молоко и сливки заготовляемые. Отбор проб и подготовка их
к испытанию".
При составлении средней пробы следует из
каждой контролируемой упаковки отбирать часть продукта пропорционально
количеству его в данной упаковке.
1.2. Периодичность контроля
1.2.1. Контроль сырья осуществляют
ежедневно (каждую партию от каждого поставщика) в соответствии с Приложением N
1.
1.2.2. Один раз в декаду старший химик
проводит контрольную приемку молока от сдатчиков, при которой определяет
массовую долю жира, редуктазную пробу, наличие
ингибирующих веществ, примесь анормального молока, кислотность, плотность
молока и термоустойчивость.
Массовую долю белка проверяют ежедневно.
При необходимости определяют натуральность, 1 раз в квартал по договоренности с
СЭС - наличие пестицидов.
1.3. Контролируемые показатели качества
сырья и порядок проведения оценки
1.3.1. Пробы сырого молока и сливок
контролируют:
- молоко - по органолептике, температуре, кислотности, массовой доле жира,
белка, плотности, механической загрязненности, редуктазной
пробе, на термоустойчивость с 72-процентным этиловым
спиртом, натуральность, наличие ингибирующих веществ, примеси анормального
молока;
- сливки - по органолептике,
температуре, кислотности, массовой доле жира;
- обезжиренное молоко - по кислотности,
плотности, алкогольной пробе (термоустойчивость с
72-процентным этиловым спиртом).
На производство детских молочных
продуктов следует направлять сырье, удовлетворяющее требованиям, указанным в
технологических инструкциях и санитарных правилах.
Осмотр внешнего вида тары производит
оператор-приемщик.
Органолептическую оценку и сортировку
молока и сливок производит лаборант, мастер.
Отбор проб и подготовку их к анализу,
физико-химические исследования проб производит лаборант.
1.3.2. Осмотр внешнего вида тары
При осмотре тары обращают внимание на
чистоту тары, целостность пломб, степень заполнения; у цистерн производится
осмотр люков, патрубков и наличие на них заглушек.
1.3.3. Органолептическая оценка
После перемешивания молока определяют
органолептические показатели: вкус, запах, цвет, консистенцию.
Органолептическую оценку производят по
каждой партии сырья.
Оценка вкуса молока производится только в
кипяченой пробе.
Определение запаха производят после
подогревания пробы на водяной бане до температуры 72 - 75 °С
с выдержкой 30 сек. и охлаждения до 35 +/- 2 °С.
1.3.4. Измерение температуры
При поступлении сырья в цистернах
температуру его измеряют в каждой секции цистерн. Температуру сырья,
доставленного во флягах, контролируют выборочным порядком: два-три места из
каждой партии, в сомнительных случаях - 100% мест.
Температуру измеряют термометром,
вставленным в оправу.
1.3.5. Определение кислотности
Кислотность сырья определяют по ГОСТ
3624-67.
При поступлении сырья в цистернах
определение производят в пробе из каждой секции цистерны титрованием или
методом измерения pH (с помощью pH-метра
типов pH-222, pH-232), а при поступлении молока во флягах - в каждой фляге
предварительно методом предельной кислотности, в средней пробе из фляг -
титрованием или методом измерения pH; при поступлении
сливок во флягах - в пробе из каждой фляги титрованием или методом измерения pH.
1.3.5.1. Проведение редуктазной
пробы
Бактериальная обсемененность по редуктазной пробе определяется в пробе молока от каждой
партии.
Определение ингибирующих веществ производится одновременно с определением бактериальной
обсемененности по редуктазной пробе.
1.3.6. Определение массовой доли жира
производят по ГОСТу 5867-69 в пробе от каждой секции цистерны, в средней пробе
- от каждой партии сырья, поступившего во фляги, методом Гербера или путем
измерения на "Милко-Тестере".
1.3.7. Определение плотности
Определение плотности цельного и
обезжиренного молока производят в пробе молока от каждой партии по ГОСТу
3625-71.
Плотность парного молока определяют не
ранее чем через 2 часа после выдаивания при
температуре молока 15 - 25 °С.
1.3.8. Определение группы чистоты
Определение группы чистоты молока
производят по ГОСТ 8218-56 в средней пробе молока от каждой партии. В тех
случаях, когда при внешнем осмотре обнаруживается наличие механических
примесей, группа чистоты молока определяется в каждой емкости отдельно.
1.3.9. Определение термоустойчивости
молока и сливок
Молоко проверяют на термоустойчивость
по алкогольной пробе с 72-процентным этиловым спиртом.
1.3.10. Проверка натуральности
При подозрении на фальсификацию
производят проверку молока на натуральность в соответствии с п. 1.2.12
"Инструкции по ТХК на предприятиях молочной промышленности", по ГОСТ
24065-80, ГОСТ 24066-80, ГОСТ 24067-80.
1.3.11. Оценка качества молока, сливок
На основании физико-химических и
органолептических исследований устанавливают соответствие качества молока: сорт
по ГОСТ 13264-70, сливок - действующим РТУ и определяют их дальнейшее
технологическое назначение (согласно технологическим инструкциям).
1.3.12. Взвешивание. Взвешивание молока,
сливок производится после отбора проб и установления качественных показателей
по результатам анализа. Массу сырья определяют по каждому сорту отдельно с
точностью +1 кг для молока и +/- 0,1 кг для сливок.
1.3.13. Оформление документации
Данные анализов принятого молока, сливок
записывают в журнал по контролю качества и в сопроводительной накладной.
2. Контроль
используемых в производстве пищевых компонентов
и вспомогательных материалов
2.1. Отбор проб
От сухих компонентов пробу отбирают
ложечкой в емкость из 10 упаковок одной партии, всего около 50 - 100 г.
От жидких компонентов (масла) пробу
отбирают черпачком (ложечкой) в емкость от каждой контролируемой партии:
расфасованной во
фляги - 50 - 100 г из 4 - 5 фляг;
расфасованной в бочки - 50 г из одной
бочки;
расфасованной в цистерны - 50 - 100 г из
4 - 5 мест одной емкости.
После перемешивания пробы отвешивают
необходимое количество для проведения анализов.
2.2. Периодичность контроля
Каждая поступающая на завод партия
используемых в производстве пищевых компонентов и вспомогательных материалов
должна сопровождаться сопроводительным удостоверением.
Работники лабораторий проверяют
соответствие каждой партии пищевых компонентов и припасов по основным данным,
указанным в удостоверении о качестве, производя органолептическую оценку и
необходимые минимальные физико-химические исследования.
2.3. Контролируемые показатели
Сахар-песок
рафинированный - Внешний вид, вкус,
запах, содержание
влаги (в
растворе и сухом),
металлопримеси
Солодовые
экстракты - Внешний вид,
цвет, консистенция, вкус и
(Декстрин-мальтозная патока)
запах, кислотность, содержание сухих
веществ
Мука для детского и
- Внешний вид, цвет, консистенция, вкус и
диетического
питания запах, содержание
сухих веществ,
кислотность
Масло кукурузное
рафинированное - Вкус и запах; реакция
на мыло
Добавки сухие гуманирующие, -
Вкус и запах, консистенция, кислотность,
белок
растворимый сухой цвет.
При приемке пищевых компонентов проверяют
также отсутствие загрязнений, следов от грызунов, качество упаковки.
3. Контроль по
этапам технологического процесса
3.1. Контроль нормализации молока
Перед нормализацией
проверяют: в сливках - массовую долю жира, кислотность, стойкость сливок по
алкогольной пробе; в обезжиренном молоке - содержание жира, кислотность,
плотность, стойкость по алкогольной пробе; в нормализованной смеси - содержание
жира, кислотность, плотность, стойкость по алкогольной пробе.
3.2. Контроль нормализованного молока в
процессе хранения
Контроль нормализованного молока производится
через каждые 2 часа.
Контролируется - температура и
кислотность.
3.3. Внесение компонентов
Количество внесенных компонентов (мука,
кукурузное рафинированное масло, солодовый экстракт, сахар и др.), витаминов,
железа и микроэлементов проверяют периодически по фактической закладке.
Количество вносимых водо- и
жирорастворимых витаминов, препарата железа и других макроэлементов
рассчитывает инженер-химик в соответствии с требованиями технической
документации на продукт.
3.4. Контроль процесса пастеризации
(стерилизации)
Контроль пастеризации молока (смеси)
заключается в проверке соблюдения температур пастеризации (стерилизации) по
диаграммной ленте и по журналу оператора.
Эффективность пастеризации контролируют по фосфатазной пробе по
наполнению каждого танка и только после получения результатов анализа молоко
может быть направлено на производство.
В пастеризованном молоке определяют
массовую долю жира, кислотность, плотность, термоустойчивость
по алкогольной пробе.
При производстве стерилизованных смесей
после внесения лимоннокислых солей натрия и калия смесь тщательно перемешивают
и определяют термоустойчивость по алкогольной пробе
72-процентным этиловым спиртом.
3.5. Контроль процесса заквашивания и
сквашивания при производстве кисломолочных продуктов
Перед заквашиванием определяют
кислотность закваски. В заквашенной смеси определяют кислотность через 1 час,
температуру - в начале и конце сквашивания.
3.6. Контроль розлива
При розливе контролируют температуру
продукта и точность дозирования, массовую долю жира в начале и конце розлива.
Для контроля веса и маркировки от каждой
партии продукции отбирают 3 - 5 единиц упаковки.
3.7. Контроль качества готовой продукции
В каждой партии детских молочных
продуктов определяют органолептические показатели, массовую долю жира,
кислотность, плотность, температуру продукта, эффективность пастеризации,
качество упаковки и маркировки.
Дополнительно в твороге и пасте -
содержание влаги, в стерилизованном и пастеризованном молоке - группу чистоты.
Микробиологический контроль продукции
осуществляется в соответствии с "Инструкцией по микробиологическому
контролю производства жидких и пастообразных детских молочных продуктов",
утвержденной Минмясомолпромом СССР в 1980 г.
Данные по контролю технологических
процессов и химического состава готовой продукции записывают в журнал.
При хранении продукции в камерах
предприятия-изготовителя периодически определяется температура и кислотность
продукта, а также соблюдение установленных сроков реализации.
3.9. Оформление документации
На основании данных контроля качества
продуктов детского питания выписывается удостоверение о качестве. При выработке
продуктов детского питания на неспециализированных предприятиях результаты
анализов сырья, тех. процесса и каждой партии готовой продукции оформляются в
специальных лабораторных журналах по контролю детских продуктов и оформляются
отдельным удостоверением о качестве.
4. Контроль
растворов, состояния лабораторных приборов
и измерительных средств
4.1. Контроль растворов, применяемых для
анализов, порядок хранения реактивов осуществляется в соответствии с п. 16, а
контроль состояния лабораторных приборов и измерительных средств
в соответствии с п. 16 "Инструкции по технохимическому контролю на
предприятиях молочной промышленности", утвержденной Минмясомолпромом
СССР в 1976 г.
5. Методы
исследования
5.1. Методы контроля сырья и готовой
продукции
Определение качества сырья и готовой
продукции производят по действующим ГОСТам 3622-68, 3624-67, 3625-71, 5867-69,
3626-73 и 8218-56, 3623-73, 24065-80, 24066-80, 24067-80, 23453-79, 23454-79,
23452-79, 9225-68.
Содержание углеводов в жидких молочных
смесях, в т.ч. сахарозы, определяют по фактической
закладке, за исключением арбитражных случаев, когда их содержание определяют
йодометрическим или поляриметрическим методами по ГОСТ 3628-78.
При необходимости, а также в арбитражных
случаях содержание углеводов, белка, железа, витаминов A и C определяют по
методикам, приведенным в Приложении. Содержание белка в молоке определяют
методом формального титрования по методике, описанной в "Инструкции по
технохимическому контролю на предприятиях молочной промышленности",
утвержденной Минмясомолпромом СССР в 1976 г.
Приложение 1
СХЕМА
ОРГАНИЗАЦИИ ТЕХНОХИМИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ
ПРОИЗВОДСТВА
МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ ДЛЯ ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА
┌────────────────┬────────────────────────┬───────────────┬───────────────┐
│Объект
контроля │
Контролируемый │
Периодичность │ Место отбора │
│ │ показатель │
контроля │ проб
│
│ │ │ │ │
├────────────────┼────────────────────────┼───────────────┼───────────────┤
│ 1
│ 2 │ 3
│ 4 │
├────────────────┼────────────────────────┼───────────────┼───────────────┤
│Молоко
сырое │Органолептические │Каждая
партия │В средней пробе│
│(сливки) │показатели │ │ │
│ │Температура, °С │ │ │
│ │Содержание жира, % │ │ │
│ │Кислотность, °Т │ │ │
│ │Плотность, °А │ │ │
│ │Чистота, группа │ │ │
│ │Термостойкость │ │ │
│ │Содержание белка │1 раз в 10 дней│ │
│ │Редуктазная
проба │-"- │ │
│ │Наличие ингибирущих │ │ │
│ │веществ │ │ │
│ │Примесь анормального │-"- │ │
│ │молока │ │ │
│Сливки, │Органолептические │В каждой
партии│В средней пробе│
│получаемые
после│показатели │ │ │
│сепарирования │Температура ,°С │ │ │
│ │Содержание жира, % │ │ │
│ │Кислотность, °Т │ │ │
│Молоко │Кислотность, °Т │ │ │
│обезжиренное │Плотность,
°А │ │ │
│ │Термостойкость │ │ │
│ │(алкогольная проба) │ │ │
│Пищевые │Соответствие требованиям│Каждая
партия │ │
│компоненты │действующей документации│ │ │
│Нормализованная
│Содержание жира, % │Каждая
партия │В
пробе из │
│смесь │Кислотность, °Т или pH │ │танка │
│ │Плотность, °А │ │ │
│ │Алкогольная проба │ │ │
│Нормализованная
│Температура, °С │Ежедневно │Проверка │
│смесь
в процессе│ │несколько
раз │термограмм │
│пастеризации │ │при пастериза- │ │
│ │ │ции │ │
│Пастеризованная
│Содержание жира, % │Каждая
партия │В
пробе из │
│смесь │Кислотность, °Т или pH │ │пастеризатора │
│ │Плотность, °А │ │ │
│ │Алкогольная проба │ │ │
│ │Фосфатазная
проба │ │ │
│При
производстве│Температура, °С │В каждом танке │В пробе после
│
│стерилизованного│Алкогольная проба с │Каждая
партия │внесения солей │
│молока │72-процентным спиртом │ │стабилизаторов │
│Готовый
продукт │Органолептические │Каждая партия │Один образец из│
│ │показатели │ │каждой партии │
│ │Содержание жира, % │ │ │
│ │Кислотность, °Т │ │ │
│ │Плотность, °А │ │ │
│ │Температура, °С │ │ │
│ │Содержание
влаги (в │ │ │
│ │пастах) │ │ │
│ │Чистота, группа - в │ │ │
│ │стерилизованном
молоке │ │ │
│ │Проба на фосфатазу │ │ │
│Готовый
продукт │Температура, °С │1
раз в смену │Склад готовой │
│из
камеры │Кислотность, °Т │ │продукции │
│хранения │ │ │ │
└────────────────┴────────────────────────┴───────────────┴───────────────┘
Примечание: 1. Два экземпляра
удостоверения о качестве вручаются начальнику цеха или технологу (мастеру) и
один экземпляр остается в делах лаборатории.
2. Начальник цеха или технолог (мастер)
один экземпляр удостоверения о качестве передает при сдаче продукции вместе с
накладной цеха в экспедицию.
Утверждаю
Заместитель Министра
мясной и молочной
промышленности СССР
Ю.С.СОКОЛОВ
1 ноября 1979 года
МЕТОД
ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ БЕЛКА
В ДЕТСКИХ ЖИДКИХ МОЛОЧНЫХ СМЕСЯХ
Метод предназначен для определения
содержания белка в детских жидких стерилизованных и ацидофильных молочных
смесях типа "Малыш" и "Малютка".
1. Сущность метода
Метод основан на способности белков при pH ниже изоэлектрической точки связывать
кислые красители, в результате чего оптическая плотность раствора красителя
уменьшается пропорционально количеству белка. По величине оптической плотности
с помощью калибровочного графика определяют содержание белка в продукте.
2. Отбор проб
Отбор проб детских жидких молочных смесей
и подготовку их к испытанию производят по ГОСТ 3622-68 применительно к молоку.
3. Аппаратура, материалы и реактивы
3.1. Весы лабораторные 2-го класса
точности, наибольший предел взвешивания 200 г, цена деления 0,0001 г, по ГОСТ
19491-74.
3.2. Центрифуга для определения
содержания жира в молоке и молочных продуктах по ГОСТ 3585-70.
3.3. Колориметр фотоэлектрический с
кюветой толщиной 1 мм, спектральная область 500 - 700 нм,
по ГОСТ 12083-78.
3.4. pH-метр с
изменением pH в области 2 - 3 по ГОСТ 22729-77Е.
3.5. Электроплитка бытовая по ГОСТ
306-76.
3.6. Термометр ртутный +100 °С, цена деления 0,5 по ГОСТ 215-73.
3.7. Пробирки центрифужные
емкостью 25 - 30 мл с резиновыми пробками, по ГОСТ 10515-75.
3.8. Штатив для пробирок.
3.9. Колба коническая термостойкая
емкостью 1000 мл по ГОСТ 10394-72.
3.10. Колба мерная емкостью 1000 мл по
ГОСТ 1770-74.
3.11. Пипетки емкостью 1 и 20 мл по ГОСТ
20292-74.
3.12. Краситель кислотный сине-черный Дербеневского химического завода с содержанием влаги не
более 5-процентов (краситель гигроскопичен и должен предохраняться от попадания
влаги), ТУ 6-14-695-76.
3.13. Кислота лимонная, по ГОСТ 3652-69.
3.14. Натрий фосфорнокислый двухзамещенный 12-водный по ГОСТ 4172-76 или безводный по
ГОСТ 11773-76.
3.15. Тимол, МРТУ 6-09-5666-68.
3.16. Кислота серная по ГОСТ 4204-77.
3.17. Натрий гидроокись по ГОСТ 4328-77.
3.18. Вода
дистиллированная по ГОСТ 6709-72.
3.19. Все реактивы должны быть чистыми
для анализа (ч.д.а.) или химически чистый
(х.ч.).
4. Подготовка к анализу
4.1. Приготовление раствора красителя
В 700 мл воды растворяют 0,8 г кислотного
сине-черного красителя, лимонной кислоты 15,8 г, двухзамещенного
фосфорнокислого натрия: безводного - 1,66, 12-водного - 4,18 г. Для более
полного и быстрого растворения смесь можно нагреть (не выше 70 °С). Смесь
охлаждают до 20 °С, количественно переносят в мерную
колбу на 1000 мл. Объем доводят до метки дистиллированной водой и тщательно
перемешивают. Проверяют pH раствора. Если pH не находится в пределах 2,35 +/- 0,05, его исправляют
добавлением серной кислоты или гидроокиси натрия. Перед использованием раствор
красителя оставляют на ночь. Раствор хранят в холодильнике в бутыли из темного
стекла. Если предполагают раствор красителя использовать более 7 суток, его
консервируют путем добавления 0,3 г тимола на 1 л раствора.
4.2. Правильность приготовления рабочего
раствора красителя проверяют путем измерения его оптической плотности при длине
волны 600 - 610 нм в 1 мл кювете против дистиллированной
воды. Оптическая плотность рабочего раствора красителя должна быть равна 1,7.
В том случае, если величина оптической
плотности раствора красителя больше 1,7, то концентрацию исходного раствора
следует довести до необходимой путем добавления дистиллированной воды.
Количество дистиллированной воды, которое нужно добавить к исходному раствору
красителя, рассчитывают по формуле:
Д
1
V = А (-- - 1),
Д
где:
V - количество дистиллированной воды,
необходимое для разведения, мл;
А - количество исходного раствора
красителя, мл;
Д -
измеренная оптическая плотность;
1
Д - оптическая плотность раствора, равная
1,7.
5. Проведение анализа
5.1. В центрифужную
пробирку помещают 1 мл продукта, приливают 20 мл раствора красителя и, закрыв
пробирку резиновой пробкой, перемешивают содержание переворачиванием в течение
0,5 мин. Следует избегать встряхивания пробирки, так как при этом образуется трудноразрушаемая пена. Для отделения образовавшегося
комплекса незакрытую пробкой пробирку центрифугируют: при 1500 об./мин. в течение 10 минут, при 1000
об./мин. - в течение 20 минут после достижения максимальной скорости вращения.
На фотоэлектроколориметре измеряют оптическую
плотность надосадочной жидкости при длине волны 600 -
610 нм в 1 мм кювете против дистиллированной воды.
Определение проводят в 2-х параллельных пробах, для каждой пробы снимают 3 - 5
показаний колориметра. За результат берется среднее арифметическое.
Примечание: после каждых 24 определений
кювета промывается 5-процентным раствором натрия фосфорнокислого трехзамещенного.
6. Построение калибровочного графика
В 10 образцах продукта определяют содержание
белка методом Къельдаля. Для этих же образцов
определяют оптическую плотность раствора остаточного красителя вышеописанным
способом. Показания колориметра сравнивают с содержанием белка, устанавливают,
имеются ли отклонения от линейной зависимости, и вычисляют уравнение регрессии
для шкалы отсчета. На основании уравнения регрессии строят калибровочный
график: по оси абсцисс наносят данные процентного содержания белка, по оси
ординат - оптическую плотность, вычисленную из уравнения регрессии. Для каждого
вида детского продукта должен быть отдельный калибровочный график. При переходе
на другую партию красителя и при смене сезона года необходимо строить новый
калибровочный график.
Примечание: при определении белка в
молочных смесях с разными видами муки по методу Къельдаля
коэффициент перевода массовой доли общего азота на массовую долю общего белка
составляет для смеси "Малыш" с гречневой мукой - 6,31, с овсяной
мукой - 5,32, с рисовой мукой - 6,35.
Обработка результатов
Содержание белка в % в
детской молочной смеси на основании измеренной величины оптической плотности
устанавливают по калибровочному графику с точностью до второго десятичного
знака. За окончательный результат принимают среднее арифметическое результатов
двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми не должно
превышать 0,03%.
Сходимость метода составила: для смеси
"Малыш" +/- 0,14% белка, для смеси "Малютка" - +/- 0,15%.
Погрешность метода - для смеси
"Малыш" +/- 0,09% белка, для смеси "Малютка" +/- 0,07%.
Утверждаю
Заместитель Министра
мясной и молочной
промышленности СССР
Ю.С.СОКОЛОВ
10 октября 1980 года
МЕТОД
ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ ЖЕЛЕЗА В ЖИДКИХ
И СУХИХ СМЕСЯХ ДЛЯ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ
1.1.
Принцип метода. Метод
основан на выделении
железа из
железобелковых комплексов
обработкой кипящей пробы
продукта смесью
трихлоруксусной и
соляной кислот. Макроэлемент
железа определяют по
II
реакции комплексообразования Fe с о-фенантролином в
фильтрате. Смесь
III
II II
Fe , Fe восстанавливают до Fe гидроксидамин
гидрохлоридом. Реакции
комплексообразования
протекают при pH 4,6
- 4,8, этого достигают
предварительным добавлением к
фильтрату уксуснокислого аммония.
Интенсивность окраски
раствора при комплексообразовании измеряют
колориметрически.
1.2. Реактивы и аппаратура
1. Соляная кислота, х.ч.,
ГОСТ 3118-67.
2. Трихлоруксусная кислота, х.ч., ТУ 6-09-1926-77.
3. Ферроин,
индикатор (о-фенантролин железа (II) сернокислого
комплекса), ч.д.а., ТУ РУ
2110-54.
4. Уксуснокислый аммоний, х.ч., ГОСТ 3117-68.
5. Гидроксиламин
гидрохлорид, ч.д.а., ГОСТ 5456-65.
6. Аммоний-железо (II) сернокислый (соль
Мора), х.ч., ГОСТ 4208-66.
7. Спирт этиловый ректификованный, ГОСТ
18300-72.
8. Баня водяная.
9. Фотоэлектроколориметр,
ГОСТ 12083-78.
10. Воронки, цилиндры, колбы мерные по
ГОСТ 1770-74 и колбы плоскодонные, ГОСТ 19394-72.
11. Пипетки
градуированные и Мора на 1, 2, 5 и 25 мл, ГОСТ 1770-74.
1.3. Приготовление реактивов
1.3.1. 24-процентный раствор соляной
кислоты. 630 мл 36-процентной соляной кислоты растворяют в 370 мл бидистиллированной воды. Плотность 24-процентного раствора
соляной кислоты 1,1185 г/куб. см.
1.3.2. 20-процентный раствор
трихлоруксусной кислоты (ТХУ). 200 г ТХУ кислоты растворяют в 800 мл бидистиллированной воды.
1.3.3. 0,2-процентный раствор о-фенантролина. 200 мг - о-фенантролина
растворяют в 100 мл 25-процентного этилового спирта. Раствор хранят в
холодильнике.
1.3.4. 65-процентный раствор
уксуснокислого аммония. 650 г уксуснокислого аммония растворяют при нагревании
в 350 мл бидистиллированной воды.
1.3.5. 10-процентный раствор гидроксиламина хлорида. 10 г солянокислого гидроксиламина растворяют в 90 мл бидистиллированной
воды. Раствор хранят в холодильнике не более 7 дней.
1.3.6. 25-процентный раствор этилового
спирта, 26 мл 96-процентного этилового спирта растворяют в 74 мл бидистиллированной воды.
Примечание. Все реактивы хранят в
полиэтиленовой посуде.
1.4. Отбор проб и подготовку их к
испытаниям производят по ГОСТ 3622-68.
1.5. Проведение анализа
1.5.1. Выделение железа
В коническую колбу емкостью 100 мл
наливают 50 мл исследуемого образца. Колбу помещают в кипящую водяную баню на 1
- 2 мин. и после нагревания добавляют 25 мл 25-процентного раствора ТХУ кислоты
и 15 мл 24-процентного раствора соляной кислоты. Содержимое колбы непрерывно
перемешивают и оставляют в кипящей водяной бане на 20 мин.
Затем колбу охлаждают холодной водой до
комнатной температуры. Содержимое колбы фильтруют через бумажный складчатый
фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата.
1.5.2. Комплексообразование
с о-фенантролином
25 мл фильтрата переносят пипеткой в
мерную колбу емкостью 50 мл, добавляют 1 мл 10-процентного раствора гидроксиламина хлорида, 5 мл 65-процентного раствора
уксуснокислого аммония и 2 мл 0,2-процентного раствора о-фенантролина.
После добавления каждого реактива содержимое колбы тщательно перемешивают.
Доводят объем колбы бидистиллированной водой до
метки. Оставляют колбы в темном месте на 2 часа для образования устойчивого
окрашивания комплекса железа с о-фенантролином, после
чего определяют оптическую плотность раствора. Окраска остается постоянной в
течение нескольких дней, если раствор сохраняют в темноте.
1.5.3. Холостой анализ
Холостой анализ проводят с применением
всех реактивов, в качестве фильтрата используют бидистиллированную
воду. Массовая концентрация железа в холостой пробе не должна превышать 0,4 мкг
по калибровочной кривой.
1.5.4. Колориметрия
Измеряют оптическую плотность раствора на
ФЭК-56 при длине волны 490 нм в кювете с толщиной
слоя 5 мм против холостой пробы.
1.5.5. Обработка результатов
По калибровочной кривой находят
количество железа, соответствующее полученной оптической плотности. Массовую
долю железа в % в образце определяют по формуле:
А х 90 х 50 х 100 А х 90 -4
Х = ----------------- или Х =
------ х 10 ,
50 х 25 х 1000000 25
где:
Х - массовая доля железа в образце, %;
А - концентрация железа, установленная по
калибровочному графику, в мкг/мл;
50 - объем пробы продукта, взятого на
анализ, в мл;
90 - объем раствора для выделения железа
в мл;
25 - объем фильтрата, взятого в реакцию комплексообразования, в мл;
50 - объем раствора, в котором происходит
реакция комплексообразования, в мл;
1000000 - коэффициент пересчета мкг в мг;
100 - коэффициент пересчета на 100 г (мл)
продукта.
1.6. Приготовление стандартного раствора
железа
1.6.1. 7,022 г аммоний-железа (II)
сернокислого (соли Мора) растворяют приблизительно 500 мл бидистиллированной
воды, добавляют 8 мл концентрированной серной кислоты и доводят количество
раствора до 1000 мл (1 мл раствора содержит 1 мг железа).
1.6.2. 1 мл стандартного раствора
растворяют в 100 мл бидистиллированной воды (1 мл
раствора содержит 10 мкг железа).
1.7. Построение калибровочной кривой
Калибровочные растворы готовят в мерных
колбах вместимостью 50 мл, в которые вносят 0,5, 10, 15, 20, 25 мл стандартного
раствора железа. Добавляют растворы реактивов согласно методике, доводят объем
растворов до метки бидистиллированной водой и
выдерживают в темном месте 2 ч.
Измеряют оптическую плотность растворов
на ФЭК-56 при длине волны 490 нм в кювете с толщиной
слоя 5 мм, против холостой пробы, не содержащей железа. Готовят калибровочные
растворы и измеряют их оптическую плотность трижды. Затем, по средним данным
3-х повторностей, строят калибровочный график,
откладывая по оси ординат величину плотности растворов, а по оси абсцисс
соответствующее ей количество железа в мкг/мл.
Пример расчета. Оптическая плотность
полученного раствора 0,25, что соответствует 2,70 мкг/мл железа по
калибровочной кривой.
Массовая доля железа в 100 г продукта
составит:
2,27 х 90 х 50 х 100 -4
Х = -------------------- = 9,72 х 10 %.
50 х 25 х 1000000
Утверждаю
Заместитель Министра
мясной и молочной
промышленности СССР
Ю.С.СОКОЛОВ
1 октября 1979 года
МЕТОД
ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ УГЛЕВОДОВ В
ЖИДКИХ АЦИДОФИЛЬНЫХ
И СТЕРИЛИЗОВАННЫХ СМЕСЯХ ДЛЯ ДЕТСКОГО
ПИТАНИЯ
1. Сущность метода
Метод основан на взаимодействии
редуцирующих сахаров со щелочным раствором железосинеродистого (феррицианида) калия. Количество редуцирующих сахаров
определяют по количеству фильтрата продукта, пошедшего на титрование
определенного количества железосинеродистого калия.
2. Отбор проб
Отбор проб жидких ацидофильных и
стерилизованных смесей для детского питания и подготовку их к испытанию
производят по ГОСТ 3623-68 применительно к жидким молочным продуктам.
3. Аппаратура и реактивы
Весы лабораторные рычажные II и IV класса
точности, наибольший предел взвешивания 200 г, по ГОСТ 19491-74.
Электроплитка с закрытой спиралью
мощностью 220 В, ЭПШ-1-0,8/220.
Водяная баня, отрегулированная на 68 °С.
Стаканы химические вместимостью 50 мл;
колбы конические вместимостью 100 и 250 мл, по ГОСТ 10394-72.
Колбы мерные вместимостью 100 и 1000 мл
по ГОСТ 1770-73.
Пипетки Мора вместимостью 2, 5, 10, 20 и
25 мл; бюретка градуированная вместимостью 25 мл по ГОСТ 20292-74.
Воронки для фильтрования диаметром 7 - 8
см по ГОСТ 8613-75.
Холодильники стеклянные лабораторные по
ГОСТ 9499-70.
Фильтровальная бумага.
Калий железосинеродистый (феррицианид), х.ч., по ГОСТ
4206-75, 1-процентный раствор.
Калий железистосинеродистый
(ферроцианид), х.ч., по
ГОСТ 4207-75, 15-процентный раствор.
Цинк уксуснокислый, ч.д.а.,
по ГОСТ 5823-69, 30-процентный раствор.
Натрия гидроокись, ч.д.а.,
по ГОСТ 4328-66, 0,5 и 2,5 н раствора.
Соляная кислота, х.ч.,
по ГОСТ 3118-67, 7,3 н раствор.
Цинк сернокислый, х.ч.
или ч.д.а., по ГОСТ 4114-69, 100-процентный раствор.
Калий йодистый, ч.д.а.,
по ГОСТ 4232-74, 20-процентный раствор.
Натрий серноватистокислый
(гипосульфит), х.ч., по ГОСТ 4215-66, 0,1 н раствор.
Метиловый оранжевый (индикатор) по ГОСТ
10816-64, 0,1-процентный раствор.
Метиленовый голубой 1-процентный раствор.
Крахмал растворимый по ГОСТ 10163-76,
1-процентный раствор.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72 г.
4. Подготовка к испытанию
Определение поправки для 1-процентного
раствора железосинеродистого калия. В коническую колбу с
притертой пробкой отмеривают пипеткой 10 мл 1-процентного раствора
железосинеродистого калия, прибавляют 20 мл 10-процентного раствора сульфата
цинка, не содержащего железа (бесцветный раствор), и 20 мл 20-процентного
раствора йодистого калия свежеприготовленного бесцветного раствора (не
содержащего свободного йода), взбалтывают содержимое в закрытой колбе и тотчас
же титруют выделившийся йод 0,1 н раствором гипосульфита натрия в присутствии
крахмала в качестве индикатора.
Поправку К
вычисляют с точностью до четвертого знака после запятой по следующей формуле:
х 0,03291
К = -----------,
0,5
где:
- число миллилитров точно 0,1 н раствора
гипосульфита, пошедшее на титрование выделившегося йода;
0,03291 - количество граммов
железосинеродистого калия, содержащееся в 1 мл раствора.
Раствор железосинеродистого калия хранят
в склянке из темного стекла.
4.2. Приготовление фильтрата жидких
стерилизованных и ацидофильных смесей для детского питания. В стакан
вместимостью 50 мл отвешивают 10 г продукта. Навеску переносят количественно с
помощью 40 - 50 мл воды в мерную колбу вместимостью 100 мл. Для осаждения
белков и других несахарных веществ в колбу приливают по 2 мл растворов
уксуснокислого цинка и железистосинеродистого калия.
После прибавления каждого раствора смесь осторожно перемешивают. Затем доливают
воды до метки, перемешивают и через 5 - 10 мин. фильтруют через сухой
складчатый фильтр в сухую колбу.
5. Методика определения
5.1. Определение содержания прямо
редуцирующих сахаров (по инверсии). Сначала проводят ориентировочное
определение. Для этого в коническую колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мл
1-процентного раствора железосинеродистого калия, 5 мл 2,5 н раствора
гидроокиси натрия и 1 каплю метиленового голубого. Содержимое колбы нагревают
на электроплитке до кипения. К кипящему раствору осторожно приливают из бюретки
малыми порциями испытуемый раствор, каждый раз
интенсивно перемешивая реакционную смесь в течение нескольких секунд. Окраска
раствора становится из зеленой сначала фиолетовой,
затем обесцвечивается. Концом окраски считается полное обесцвечивание раствора.
Появление фиолетовой окраски после остывания раствора во внимание не
принимается.
После ориентировочного определения
проводят окончательное определение. Для этого в коническую колбу помещают такое
же количество железосинеродистого калия и гидроокиси натрия. Затем приливают из
бюретки испытуемый раствор на 0,2 - 0,3 мл меньше, чем получено в
ориентировочном опыте. Содержимое колбы нагревают до кипения и кипятят одну
минуту. Затем прибавляют каплю метиленового голубого и приливают из бюретки
испытуемый раствор по каплям, каждый раз интенсивно
перемешивая в течение нескольких секунд, до полного обесцвечивания раствора.
5.2. Определение содержания редуцирующих
сахаров после инверсии (сахарозы). Предварительно проводят инверсию фильтрата.
Для этого 25 мл фильтрата, полученного по п. 4.2, помещают в мерную колбу
вместимостью 100 мл, нагревают на водяной бане при температуре 68 °С в течение 5 мин., приливают 2,5 мл 7,3 н соляной кислоты
и продолжают нагревание ровно в течение 10 мин., изредка перемешивая раствор.
Затем раствор быстро охлаждают под проточной водой, прибавляют метиловый
оранжевый и нейтрализуют 0,5 н раствором гидроокиси натрия. Нейтрализованный
раствор доливают до метки колбы.
Определение содержания редуцирующих
сахаров в фильтрате после инверсии проводят так же, как описано в п. 5.1.
5.3. Определение содержания редуцирующих
сахаров после гидролиза углеводов. Предварительно проводят гидролиз углеводов:
декстринов - для продуктов, содержащих декстрин-мальтозу, и крахмала - для
продуктов, содержащих муку. (В этих условиях гидролизуется
также и сахароза.) Для этого отвешивают в стакан вместимостью 50 мл 10 г
продукта, переносят его количественно в мерную колбу вместимостью 100 мл с
помощью 35 мл воды. Приливают туда же 4,5 мл 7,3 н раствора соляной кислоты,
присоединяют к колбе обратный холодильник и нагревают на кипящей водяной бане в
течение трех часов. В процессе нагревания жидкость потемнеет.
После гидролиза жидкость охлаждают под
проточной водой и нейтрализуют 2,5 н раствором гидроокиси натрия по
универсальной индикаторной бумаге. К нейтрализованной смеси добавляют по 2 мл
растворов уксуснокислого цинка и железистосинеродистого
калия, осторожно перемешивая раствор после прибавления каждого осадителя, затем доливают воды до метки, перемешивают и
через 10 - 15 мин. фильтруют через сухой складчатый фильтр в сухую колбу.
Определение содержания редуцирующих
сахаров в фильтрате после гидролиза проводят так же, как описано в п. 5.1, но
фильтрат предварительно разбавляют в 2 раза водой.
6. Обработка результатов
6.1. Содержание редуцирующих сахаров до
инверсии, А, в процентах, находят по формуле:
К х (20,12 + 0,035 х ) х 100 х - 100
А =
---------------------------------------, (1)
х 1000
где:
К - поправка для 1-процентного раствора железосинеродистого калия;
- навеска продукта, взятая для анализа, г;
- объем фильтрата, пошедший на титрование
20 мл железосинеродистого калия, мл;
100 - объем раствора, приготовленный из
взятой навески, мл;
100 - коэффициент для выражения
результатов в процентах;
1000 - коэффициент для пересчета в
граммы.
Содержание лактозы, Л, в процентах, в
продуктах с декстрин-мальтозой составляет:
Л = 0,75 х П;
в продуктах с мукой:
Л = 1,2 А х .
Содержание декстрин-мальтозы,
в процентах, составляет не менее 0,5А.
6.2. Содержание суммы редуцирующих
сахаров и сахарозы (после инверсии), Б, в процентах, находят по формуле:
К х (20,12 + 0,035 х ) х 4 х 100 х 100
Б = ---------------------------------------, (2)
х х
1000
где все обоснования аналогичны указанным
для формулы (1), коэффициент "4" в числителе учитывает разбавление
фильтрата при проведении инверсии.
Содержание сахарозы, А, в процентах,
находят по формуле:
Б
= (Б - А) х 0,95.
(3)
6.3. Содержание суммы редуцирующих
сахаров, сахарозы и углеводов (после гидролиза), выраженное в глюкозе, Г, в
процентах, находят по формуле (1), умножая при этом результат на коэффициент
разбавления фильтрата "п":
Г = А х п.
Вычисленная сумма редуцирующих сахаров
после гидролиза, Г, может быть принята за сумму углеводов, выраженную в
глюкозе. Из этой величины можно оценить содержание в продукте декстринов или
крахмала, Д, по следующей формуле:
Д = (Г - Б) х 0,9.
Расхождение между параллельными
определениями составляет не более 0,1% для редуцирующих сахаров и 0,2% - для
сахарозы и других углеводов.
Утверждаю
Заместитель Министра
мясной и молочной
промышленности СССР
Ю.С.СОКОЛОВ
6 декабря 1979 года
Согласовано
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
3 декабря 1979 года
МЕТОДЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ВИТАМИНОВ A И C В
ПРОДУКТАХ ДЕТСКОГО
ПИТАНИЯ - СТЕРИЛИЗОВАННОЙ И АЦИДОФИЛЬНОЙ
СМЕСЯХ "МАЛЮТКА",
ВЫСОКОБЕЛКОВОМ КИСЛОМОЛОЧНОМ ПРОДУКТЕ И
ВИТАМИНИЗИРОВАННОМ
СТЕРИЛИЗОВАННОМ МОЛОКЕ (ДЛЯ МОЛОЧНОЙ
ПРОМЫШЛЕННОСТИ) <*>
--------------------------------
<*> Методы распространяются на
сухие молочные смеси "Малютка" и "Малыш", жидкие
стерилизованные и ацидофильные смеси "Малыш". Метод определения
витамина C распространяется на жидкие и пастообразные молочные продукты с морковным
наполнителем. Акт от 10 октября 1980 г.
ВИТАМИН A
1.1. Принцип. Метод основан на щелочном
гидролизе, экстракции витамина органическим растворителем и последующим
определением количества витамина колориметрическим методом по реакции Карра-Прайса.
1.2. Оборудование
1.2.1. Весы лабораторные технические,
ГОСТ 19491-74.
1.2.2. Фотоэлектроколориметр,
ГОСТ 12083-78.
1.2.3. Ротационный испаритель типа ИР-1М,
ТУ 25-11-917-74.
1.2.4. Водяная баня.
1.2.5. Обратный холодильник со шлифами и
водяным охлаждением, ГОСТ 9499-70.
1.3. Посуда
1.3.1. Воронки делительные емк. 250 - 500
мл, ГОСТ 8613-75.
1.3.2. Колбы круглодонные со шлифом емк.
100 и 250 мл, ГОСТ 10294-72.
1.3.3. Пипетки
градуированные на 1, 2, 5 и 10 мл по ГОСТ 1770-74.
1.3.4. Воронки, цилиндры, химические
стаканы, колбы мерные, ГОСТ 1770-74 и колбы плоскодонные, ГОСТ 10394-72.
1.4. Реактивы
1.4.1. Петролейный
эфир фракции 40 - 60 °С, перегнанный при 50 °С, не
содержащий перекисей, ГОСТ 11992-66.
1.4.2. Гидроокись калия, х.ч., ГОСТ 4203-65.
1.4.3. Спирт этиловый ректификованный,
ГОСТ 18300-72
1.4.4. Спирт
абсолютизированный для спектрофотометрии.
1.4.5. Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-66.
1.4.6. Хлороформ для наркоза, Гос. фарм.,
СССР, Х изд.
1.4.7. Ангидрид уксуснокислый, ч.д.а., ГОСТ 5815-77.
1.4.8. Фенолфталеин, ч.д.а.,
ГОСТ 5850-72.
1.4.9. Раствор витамина A-ацетата в
масле, Гос. фарм., СССР, Х изд.
1.4.10. Сурьма треххлористая (SbCl ), х.ч.,
ТУ 6-09-636-76.
3
1.4.11. Аскорбиновая кислота, ч., Гос. фарм.,
СССР, Х изд., ст. 6.
1.5. Растворы
1.5.1.
Раствор Карра-Прейса 60 г, SbCl быстро переносят в колбу с 300
3
мл хлороформа и растворяют
при подогревании на водяной бане
(не выше 40
°С),
периодически встряхивая. Раствор охлаждают, добавляют 9 мл
уксусного
ангидрида. После
отстаивания раствор сливают в темную склянку с плотной
пробкой. Раствор
пригоден в течение 1 - 1,5 мес.
1.5.2. 50-процентный водный раствор
гидроокиси калия. Срок хранения 6 мес.
1.5.3. 1-процентный спиртовой раствор
фенолфталеина. Срок хранения 6 мес.
1.6. Отбор проб продуктов и подготовку их
к анализу производят по ГОСТ 3622-68.
1.7. Ход анализа
1.7.1. Щелочной гидролиз (омыление)
Образец жидкого исследуемого продукта
объемом 20 мл или сухого весом 6 г помещают в круглодонную колбу объемом на 100
мл, добавляют 40 мл этилового спирта, 0,1 г аскорбиновой кислоты и,
перемешивая, добавляют 3 мл 50-процентного раствора KOH. Колбу соединяют с
обратным холодильником и выдерживают в кипящей водяной бане в течение 30 мин.
Желательно анализ проводить в токе инертного газа.
1.7.2. Экстракция
По окончании омыления смесь охлаждают,
переливают в делительную воронку емк. 500 мл. Ополаскивая колбу, добавляют 50
мл петролейного эфира. Экстрагируют неомыляемый остаток эфиром, встряхивая раствор в воронке в
течение 1 мин. После разделения слоев сливают нижний слой в другую делительную
воронку емк. 250 мл, оставив эфирный слой в той же воронке. К основному
раствору снова добавляют 50 мл петролейного эфира,
встряхивают в течение 1 минуты и, после разделения слоев, сливают нижний слой в
ту же колбу, а верхний эфирный - в делительную воронку к первой порции эфирного
экстракта.
Раствор из колбы вновь переносят в
освободившуюся делительную воронку и вновь, ополаскивая колбу, доливают 50 мл
эфира и аналогично предыдущей процедуре экстрагируют в 3-й раз.
Повторяют в 4-й раз то же самое, после
чего нижний темный слой жидкости отбрасывают.
Объединенный эфирный экстракт отмывают от
щелочи, расходуя примерно 1 л дистиллированной воды. Наливая в эфирный экстракт
4 раза по 250 мл дистиллированной воды, отстаивая и сливая нижний слой. Отмывая
экстракт, контролируют реакцию воды по фенолфталеину (капнуть 2 - 3 капли
раствора фенолфталеина в воду после отмывки). Отмывают экстракт до нейтральной
реакции.
После отмывки экстракт фильтруют через
слой (30 г) сернокислого натрия безводного в круглодонную колбу емк. 250 мл со
шлифом.
1.7.3. Концентрация раствора
Отгоняют эфир на ротационном испарителе
досуха при температуре водяной бани 45 - 50 °С. Колбу после отгонки охлаждают в
холодильнике. Неомыляемый остаток на стенке колбы
растворяют в хлороформе, тщательно закрыв колбу пробкой и смыв осадок со стенок
колбы.
Количество хлороформа для растворения
остатка строго учитывают и берут в зависимости от содержания в продукте
витамина. При анализе ацидофильной смеси "Малютка", содержащей
примерно 0,06 мг% витамина A, смывают 4-мя мл хлороформа, при анализе
стерилизованной смеси "Малютка", содержащей около 0,08 мг% витамина,
- 5-ю мл хлороформа, при анализе высокобелкового концентрата кисломолочного - 6
мл, а молока витаминизированного - 10 мл хлороформа.
В случае очень большого содержания
витамина следует использовать большее количество хлороформа, работая с
параллельной пробой.
1.7.4. Колориметрическое определение
витамина A по реакции Карра-Прайса.
Измерение проводят при длине волны 620 нм (красный светофильтр N 8) против хлороформа.
0,4 мл хлороформенного
раствора испытуемой пробы вносят в кювете толщиной слоя 1 см, помещают кювету в
кюветодержатель фотоэлектроколориметра,
добавляют 4 мл раствора треххлористой сурьмы и быстро (в течение 3 - 5 сек.)
измеряют оптическую плотность. При наличии витамина проба окрашивается в
голубой цвет. Окраска быстро исчезает, и раствор становится прозрачным.
Помутнение раствора свидетельствует о
попадании воды, в этом случае анализ следует повторить.
Содержание витамина A в мг на 100 г (мл)
продукта рассчитывают по формуле:
В х V х 100
2
------------ =
3300 х а
где:
В
- содержание витамина A в 1 мл испытуемого раствора,
установленное
по стандартной
кривой в Международных единицах (МЕ);
V -
общий объем хлороформенного раствора в мл;
2
а - навеска образца продукта в г (мл);
100 - пересчет на 100 г (мл) продукта;
3300 - коэффициент пересчета из МЕ в мг.
1.8. Построение стандартной кривой
Для построения калибровочного графика
используют раствор витамина A-ацетата в масле с активностью не менее 100000 МЕ
в 1 г. Предварительно определяют точное содержание витамина A в этом препарате.
Для этого около 0,1 г препарата (точная
навеска) растворяют в абсолютном спирте для спектрофотометрии
в мерной колбе емк. 100 мл. Доводят объем до метки тем же спиртом и
перемешивают.
5 мл этого раствора переносят в мерную
колбу на 50 мл и доводят объем абсолютным спиртом. Измеряют оптическую
плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 325 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. В качестве контрольного
раствора применяют абсолютный спирт.
Содержание витамина A-ацетата в 1 г
препарата в граммах вычисляют по формуле:
Д х 100 х
50
С =
------------------,
(1)
1550 х 5 х а х 100
где:
Д - оптическая плотность испытуемого
раствора;
5, 50, 100 - объемы растворов в мл;
а - навеска препарата в г;
1%
1550
- удельный показатель поглощения
E см при длине волны 325 нм
1
для раствора
100% витамина A-ацетата в абсолютном спирте.
Для построения стандартной кривой около
0,1 г препарата (точная навеска) растворяют в хлороформе в мерной колбе емк.
100 мл, доводят хлороформом до метки и тщательно перемешивают.
Содержание витамина A-ацетата в МЕ 1 мл
раствора вычисляют по формуле:
С х а х 2907000
---------------,
100
где:
С - см. формулу 1;
а - навеска препарата в г;
2907000 - активность 1 г витамина
A-ацетата в МЕ.
Зная содержание витамина A в МЕ в 1 мл
этого раствора, из него последовательно готовят разведения с содержанием
примерно от 5 до 30 МЕ/мл с интервалом в 5 МЕ.
Из каждого разведения отбирают по 0,4 мл
раствора и проводят колориметрическую реакцию с треххлористой сурьмой (как при
анализе испытуемых растворов).
Для построения калибровочного графика по
оси ординат откладывают полученные значения оптической плотности, а по оси
абсцисс соответствующие им количества витаминов A в 1 мл раствора в МЕ.
При смене раствора треххлористой сурьмы
калибровочный график повторяют, используя для этого свежеприготовленный хлороформенный раствор витамина A-ацетата.
1.9. Пример расчета
Анализируемый продукт - стерилизованная
смесь "Малютка".
Навеска 20 мл.
Оптическая плотность хлороформенного
раствора - 0,105, что по калибровочной кривой соответствует 10 МЕ.
Объем хлороформенного
раствора равен 3 мл.
10 х 3 х 100
Содержание витамина A в стерилизованной
смеси "Малютка" = ------------
3300 х 20
= 0,045 мг%.
Расхождения между параллельными
исследованиями не должны превышать 0,000009%.
ВИТАМИН C
1.1. Принцип
Метод основан на
экстракции аскорбиновой кислоты метафосфорной (хлорной), окислении ее в
дегидроаскорбиновую, которая в реакции с 2,4-динитрофенилгидразином (ДНФГ)
образует нитрофенил гидразон,
дающий красный цвет при растворении в серной кислоте, интенсивность которого
измеряют колориметрически.
1.2. Оборудование
1.2.1. Термостат.
1.2.2. Фотоэлектроколориметр,
ГОСТ 12083-78.
1.3. Посуда
1.3.1. Колбы мерные емк. 100 и 50 мл,
ГОСТ 1776-74.
1.3.2. Воронки делительные емк. 100 и 150
мл, ГОСТ 8613-64.
1.3.3. Пипетки
градуированные на 1, 2, 10 и 20 мл, ГОСТ 1770-74.
1.3.4. Пробирки
градуированные на 10 мл, ГОСТ 10515-63.
1.4. Реактивы
1.4.1. Аскорбиновая кислота (ГФ СССР, Х
изд., ст. 6).
1.4.2. Кислота метафосфорная, ч.д.а., ГОСТ 841-76.
1.4.3. Кислота хлорная, ч.д.а., МРТУ 6-09-6604-70.
1.4.4. 2,6-дихлорфенилиндофенолят натрия,
ТУ 6-09-2808-77.
1.4.5. 2,4-динитрофенилгидразин, ТУ
6-09-2394-72.
1.4.6. Кислота серная, ГОСТ 4204-77.
1.4.7. Тиомочевина,
х.ч., ГОСТ 6344-73.
1.4.8. Эфир диэтиловый
для наркоза, ГСС ФАРМ, Х.
1.4.9. Спирт этиловый ректификат, ГОСТ
18300-72.
1.5. Растворы
1.5.1. Раствор метафосфорной кислоты, 3%
Растворяют 3 г метафосфорной кислоты в
100 мл дистиллированной воды.
1.5.2. Раствор хлорной кислоты, 3%
Готовят
42% HClO
. Для
чего в 1 части 42-процентной хлорной кислоты
4
приливают 13
частей дистиллированной воды.
1.5.3. Раствор тиомочевины
Растворяют 2 г тиомочевины
в 10 мл спирта ректификата и 10 мл дистиллированной воды. Срок хранения 6
месяцев.
1.5.4. Раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола
(ДИФ)
Растворяют 0,25 г 2,6-ДИФ в 100 мл
горячей свежепрокипяченной дистиллированной воды.
Раствор фильтруют через бумажный фильтр и хранят в холодильнике не более 7
суток.
1.5.5. Раствор 2,4-динитрофенилгидразина
(ДНФГ)
Растворяют 2 г 2,4-ДНФГ в 24 мл серной
кислоты плотностью 1,83, затем постепенно доливают 75 мл дистиллированной воды.
Раствор перемешивают стеклянной палочкой. При появлении осадка - фильтруют.
Срок хранения 2 мес.
1.5.6. Раствор серной кислоты, 85%
Растворяют 485 мл серной кислоты
плотностью 1,83 в 150 мл дистиллированной воды.
1.6. Отбор проб продуктов и их подготовку
к анализу проводят по ГОСТ 3622-68.
1.7. Проведение анализа
1.7.1. Экстракция. Приготовление раствора
А. В мерную колбу емк. 100 мл наливают 30 мл жидкого исследуемого продукта или
6 г сухого, или 1 - 3 г пастообразного продукта с морковным наполнителем и до
метки доливают 3-процентный раствор метафосфорной (3-процентный раствор
хлорной) кислоты. Раствор перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр.
Дальше работают с фильтратом.
1.7.2. Приготовление раствора В.
В делительную воронку отбирают 20 мл
раствора А (фильтрата), добавляют 1 мл раствора
2,6-ДИФ и взбалтывают 2 мин. Затем экстрагируют избыток ДИФ 40 мл эфира. Водная
фаза должна быть совершенно бесцветной. Если после взбалтывания водная фаза
остается окрашенной, доливают еще 20 мл эфира и продолжают экстракцию до
полного обесцвечивания водной фазы. Затем осторожно сливают фазу в мерную колбу
на 50 мл, оставляя эфирную часть в делительной воронке.
Дважды промывают эфирную часть 5 - 10 мл
метафосфорной (хлорной) кислоты, сливая раствор кислоты в ту же мерную колбу.
Доводят объем до метки раствором метафосфорной кислоты (хлорной).
1.7.3. Реакция с ДНФГ
В градуированную пробирку на 10 мл
наливают 1 - 4 мл раствора В (доливают 3-процентный
раствор метафосфорной (хлорной) кислоты до 4 мл), добавляют 2 капли раствора тиомочевины и 1 мл раствора 2,4-ДНФГ. После внесения
каждого реактива содержимое пробирки встряхивают. Затем пробу термостатируют при 37 °С в течение
3 часов. После чего пробирки с раствором охлаждают во льду, доливают до 10 мл
85-процентным раствором серной кислоты и снова быстро охлаждают во льду.
1.7.4. Холостой анализ
Холостой анализ производят для каждой
пробы продукта, только без термостатирования. После
добавления 2 капель тиомочевины пробы ставят в темное
место до конца термостатирования испытуемых проб.
Затем добавляют 1 мл ДНФГ, вместе с испытуемыми пробами охлаждают во льду,
добавляют раствор серной кислоты и снова быстро охлаждают.
1.7.5. Колориметрия
Измеряют оптическую плотность раствора на
фотоэлектроколориметре при длине волны 490 нм в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы.
1.7.6. Обработка результатов
Содержание витамина C в мг на 100 г (мл)
продукта определяют по формуле:
А х 50 х 100 х 100
------------------,
V х 20 х а х 1000
где:
А - количество витамина
С, установленное на калибровочной кривой, в мкг;
V - объем раствора В,
взятого в реакцию с ДНФГ, в мл;
50 - объем раствора В
в мл;
20 - объем раствора А,
взятого в реакцию с ДИФ, в мл;
100 - объем раствора А
в мл;
а - навеска продукта, взятого для
анализа, в г (мл);
100 - пересчет на 100 (мл) продукта;
1000 - пересчет из мкг в мг.
Пример расчета
Анализируемый продукт - ацидофильная
смесь "Малютка". Навеска продукта - 38 мл. В реакцию с ДНФГ взято 4
мл раствора В. Оптическая плотность реакционной смеси - 0,20, что по
калибровочной кривой соответствует 20 мкг витамина C.
20 х 50 х 100 х 100
Содержание витамина С
в мг% = ------------------- = 4,17 мг%.
4 х 20 х 30 х
1000
1.7.7. Приготовление эталонного раствора
и окисление аскорбиновой кислоты
100 мг кристаллической аскорбиновой кислоты
(точная навеска) растворяют в 100 мл 3-процентного раствора метафосфорной
(3-процентного раствора хлорной) кислоты. Переносят 5 мл этого раствора в
мерную колбу на 100 мл и до метки доводят тем же раствором метафосфорной
(хлорной) кислоты. Полученный раствор А содержит 50
мкг аскорбиновой кислоты в 1 мл.
Готовят раствор В.
Для чего 20 мл раствора А вносят в
делительную воронку, добавляют 1 мл раствора 2,6-ДИФ и тщательно перемешивают в
течение 2 минут. Затем добавляют 40 мл диэтилового
эфира, взбалтывают. Экстрагируют избыток 2,6-ДИФ эфиром до полного
обесцвечивания водной фазы. После разделения фаз сливают водную фазу в мерную
колбу емк. 50 мл. Эфирную фазу дважды промывают 5 - 10 мл 3-процентного
раствора метафосфорной (3-процентного раствора хлорной) кислоты, собирая водную
фазу в ту же мерную колбу. Доводят объем колбы до метки 3-процентного раствора
метафосфорной (3-процентным раствором хлорной) кислоты.
Полученный раствор В
имеет концентрацию 20 мкг аскорбиновой кислоты в 1 мл.
1.7.8. Построение стандартной кривой
Согласно указаниям в таблице из раствора В готовят стандартные растворы.
┌──┬───────┬──────────────┬───────────┬────────┬─────────────┬────────────┐
│N
│Раствор│ 3-процентный │
Раствор │Раствор
│85-процентный│Концентрация│
│ │ В, мл │ раствор
│тиомочевины│2,4-ДФНГ│ раствор
│витамина С в│
│ │
│метафосфорной │ в каплях
│ в мл │
серной │ мкг/10 мл │
│ │
│(хлорной) к-ты│
│ │ кислоты
│ │
│ │
│ в мл │ │ │ │ │
├──┼───────┼──────────────┼───────────┼────────┼─────────────┼────────────┤
│1
│0 │4 │2 │1 │долить до │0 │
│ │
│ │ │ │10 мл │ │
│2
│0,5 │3,5 │-"- │-"- │-"- │10 │
│3
│1 │3 │-"- │-"- │-"- │20 │
│4
│2 │2 │-"- │-"- │-"- │40 │
│5
│3 │1 │-"- │-"- │-"- │60 │
│6
│4 │0 │-"- │-"- │-"- │80 │
└──┴───────┴──────────────┴───────────┴────────┴─────────────┴────────────┘
После внесения каждого реактива
содержимое пробирок встряхивают. Добавив 2,4-ДНФГ, пробирки ставят на гидролиз
в термостат с температурой 37 °С на 3 часа. По
окончании гидролиза пробы охлаждают во льду в течение 10 минут. Во все пробирки
доливают до 10 мл 85-процентный раствор серной кислоты и быстро охлаждают до
комнатной температуры. Измеряют оптическую плотность растворов при длине волны
490 нм в кювете с толщиной слоя 1 см при светофильтре
N 5 против холостой пробы, не содержащей аскорбиновой кислоты (пробирка N 1).
Затем по средним данным трех повторностей строят
калибровочный график, откладывая по оси ординат величину оптической плотности
растворов, а по оси абсцисс соответствующее ей количество аскорбиновой кислоты
в мкг в 1 мл. Расхождения между параллельными исследованиями
не должны превышать для жидких продуктов 0,00005%, для пастообразных - 0,0005%.
Утверждаю
Заместитель Министра
мясной и молочной
промышленности СССР
Ю.С.СОКОЛОВ
10 октября 1980 года
МЕТОД
ФЛУОРОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ ВИТАМИНА A
В ЖИДКИХ ПРОДУКТАХ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ "МАЛЫШ"
Принцип. Метод основан на омылении
продукта, экстракции витамина A органическим растворителем и флуоресцентном
определении витамина.
Оборудование
1. Весы аналитические.
2. Весы лабораторные технические, ГОСТ
19491-74.
3. Флуорометр
ЭФ-3 МА.
4. Водяная баня с электроподогревом
Посуда
1. Колбы круглодонные емк. 50 мл с
притертыми пробками со шлифом N 14,5, ГОСТ 10394-72.
2. Трубки стеклянные диам.
0,8 мм, длиной 25 - 30 см с наружным шлифом N 14,5.
3. Пробирки к флуорометру.
4. Пипетки емк. 1, 2, 5 мл, ГОСТ 1770-74.
5. Воронки делительные емк. 100 мл, ГОСТ
8613-75.
Реактивы
1. Пирогаллол, ч.
2. Гидроокись калия, х.ч.,
ГОСТ 4203-65.
3. Гексан, ТУ
6-09-3375-78.
4. Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72.
5. Спирт этиловый ректификованный, ГОСТ
18300-72.
6. Флуоресцеин
натрия, ч.
Растворы
1. 1-процентный спиртовой раствор
пирогаллола.
2. 37-процентный водный раствор KOH.
3. Раствор флуоресцеина
натрия.
Отбор проб
Отбор проб продуктов и подготовку их к
анализу проводят по ГОСТ 3622-68.
Ход определения
Щелочной гидролиз (омыление)
В круглодонную колбу со шлифом вмест. 50 мл вносят 1 мл исследуемого продукта, добавляют 2
мл 1-процентного спиртового раствора пирогаллола и 2 мл 37-процентного раствора
KOH. Содержимое колбы перемешивают, вставляют трубку со шлифом в горло колбы.
Одновременно ставят холостой опыт, где вместо продукта вносят 1 мл
дистиллированной воды. В колбу также вставляют трубку-холодильник.
Подготовленные пробы (опытная и холостая) помещают в кипящую водяную баню на 30
мин. для гидролиза, закрепив колбы держателями.
Содержимое осторожно (без потерь)
переносят в делительные воронки, добавляют в каждую по 10 мл гексана, закрывают пробкой и в течение 10 мин. встряхивают
для экстракции витамина. Затем колбочки смыть дистиллированной водой (2 мл) и
смыв слить в соответствующие делительные воронки к имеющемуся в них
содержимому. Слегка встряхнуть и дать отстояться, после чего отбросить нижний
слой, а верхний гексановый отмыть дистиллированной
водой. Отмывку производить несколько раз небольшими порциями воды (общий объем
300 мл) до нейтральной реакции воды по фенолфталеину.
Отмытый гексановый
раствор слить в градуированную на 10 мл пробирку через воронку с безводным
сернокислым натрием (~ 5 г). До объема 10 мл добавить гексан,
смывая им же сернокислый натрий в воронке. Закрыть пробирки притертыми
пробками.
Через 10 мин. после включения прибора
производят измерение флуоресценции растворов в специальной пробирке по
инструкции к флуорометру ЭФ-3 МА.
Замеряют флуоресценцию стандартного
раствора, растворителя, на котором приготовлен стандартный раствор (дистил. воды) холостой и испытуемой проб.
Расчет содержания витамина A производится
по формуле:
(А - а) х с х V х
100
К =
---------------------,
(В - в) х е х
1000000
где:
К - массовая доля витамина А в %;
А - показания прибора для испытуемого
раствора;
а - показания прибора для контроля к
испытуемому раствору (холостая проба), в дел.;
с - масса концентрации витамина в стандартном
растворе в мкг/мл;
V - объем конечного раствора в мл.
100 - коэффициент перевода в проценты;
В - показания прибора для стандартного
раствора в дел.;
в - показания прибора для контроля к
стандартному раствору в дел. (дистил. вода);
е - масса навески исследуемого материала
в г (мл);
1000000 - коэффициент перевода в граммы.
Приготовление стандартного раствора флуоресцеина
Для приготовления основного раствора флуоресцеина взвешивают 10 мг флуоресцеина
натрия. Навеску растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе на 100 мл.
Для приготовления рабочего раствора 0,35 мл основного раствора флуоресцеина переносят в мерную колбу на 200 мл и доводят
до метки дистиллированной водой. Полученный раствор используют в качестве
стандартного, сохраняя его в холодильнике защищенным
от света.
Флуоресценция его равна флуоресценции
стандартного раствора витамина A с массовой концентрацией 0,86 мкг на 1 мл.
Пример расчета
Установлена флуоресценция раствора:
- стандартного раствора флуоресцеина - 74 дел.;
- дистиллированной воды - 23 дел.;
- холостой пробы - 20 дел.;
- исследуемой пробы - 46 дел.
Массовая доля витамина A в 100 г (мл)
исследуемого продукта:
(А - а) х с х V х 100 (46 - 20) х 0,86 х 100 х 100
--------------------- =
---------------------------- = 0,0004%.
(В - в) х е х 1000000 (74 - 23) х 1 х 1000 х 1000
Расхождения между параллельными
исследованиями не должны превышать 0,000009%.
Примечание: В ходе анализа пробы
необходимо оберегать от света.
Утверждаю
Заместитель Министра
мясной и молочной
промышленности
Ю.С.СОКОЛОВ
10 октября 1980 года
МЕТОД
ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ БЕТА-КАРОТИНА В ЖИДКИХ
И ПАСТООБРАЗНЫХ МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ
С ОВОЩНЫМИ НАПОЛНИТЕЛЯМИ (ТИПА СМЕСИ
МОЛОЧНО-ОВОЩНЫЕ
СТЕРИЛИЗОВАННЫЕ И ТВОРОГ ДЕТСКИЙ ОВОЩНОЙ)
Принцип. Метод основан на щелочном
гидролизе образца, экстракции бета-каротина
органическим растворителем, хроматографическом
отделении бета-каротина и последующем его измерении по поглощению его растворов
в гексане при длине волны 450 - 451 нм.
Оборудование
1. Весы лабораторные технические, ГОСТ
19491-74.
2. Спектрофотометр СФ-16.
3. Ротационный испаритель типа ИР-1М, ТУ
25-11-917-74.
4. Водяная баня с электроподогревателем.
5. Обратный холодильник со шлифами и
водяным охлаждением, ГОСТ 9499-70.
Посуда
1. Воронки делительные емк. 250 и 500 мл,
ГОСТ 8613-75.
2. Колбы круглодонные со шлифом 29 емк.
100 и 250 мл, ГОСТ 10394-72.
3. Колбы круглодонные со шлифом N 14,5
емк. 50 мл.
4. Пипетки
градуированные емк. 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 1770-74.
5. Воронки, цилиндры, мензурки, хим.
стаканы, колбы мерные, ГОСТ 1770-74.
6. Хроматографическая
колонка размером 170 х 12 мм с отводом к насосу со шлифом N 14,5 (см. чертеж -
не приводится).
Растворы
1. 50-процентный водный раствор
гидроокиси калия.
Срок хранения 6 месяцев
2. 1-процентный спиртовой раствор
фенолфталеина. Срок хранения 6 месяцев.
Реактивы
1. Петролейный
эфир, фракция 40° - 60 °С, перегнанный при 50 °С, не
содержащий перекисей, ГОСТ 11992-66.
2. Гидроокись калия, х.ч.,
ГОСТ 4203-65.
3. Спирт этиловый ректификованный, ГОСТ
18300-72.
4. Аскорбиновая кислота, ГФ СССР, Х изд.,
ст. 6.
Ход анализа
Щелочной гидролиз (омыление)
Образец исследуемого продукта (смеси
молочно-овощные стерилизованные объемом 20 мл, творог детский овощной массой 5
мг) помещают в круглодонную колбу объемом 100 мл, добавляют 40 мл этилового
спирта и 0,1 г аскорбиновой кислоты, перемешивая, добавляют 3 мл 50-процентного
раствора KOH.
Колбу соединяют с обратным холодильником
и выдерживают в кипящей водяной бане в течение 30 минут.
Экстракция
По окончании омыления смесь охлаждают,
переливают в делительную воронку емк. 500 мл. Туда же добавляют 50 мл петролейного эфира, споласкивая им же колбу. Экстрагируют неомыленный осадок эфиром, встряхивают раствор в воронке в
течение 1 мин. После разделения слоев сливают нижний в другую делительную
воронку емк. 250 мл, оставив эфирный слой в той же воронке. К основному
раствору снова добавляют 50 мл петролейного эфира,
встряхивают в течение 1 мин. и после разделения слоев сливают нижний слой в ту
же колбу, а верхний эфирный - в делительную воронку к первой порции эфирного
экстракта.
Раствор из колбы вновь переносят в
освободившуюся делительную воронку и вновь, ополаскивая колбу, доливают 50 мл
эфира. Аналогично предыдущей процедуре экстрагируют в 3-й раз. В 4-й раз
повторяют то же самое, после чего нижний темный слой жидкости отбрасывают.
Объединенный эфирный экстракт отмывают от щелочи, расходуя не менее 1,5 л
дистиллированной воды. Наливают в эфирный экстракт порциями по 250 - 300 мл
дистиллированной воды, отстаивают и сливают нижний слой. Отмывают экстракт до
нейтральной реакции воды по фенолфталеину.
После отмывки экстракт фильтруют через
слой (30 г) сернокислого натрия безводного в круглодонную колбу 250 мл со
шлифом.
Концентрация раствора
Отгоняют эфир на ротационном испарителе
досуха при температуре водяной бани 45 - 50 °С. Неомыленный
остаток растворяют в колбе в 5 мл гексана, немедленно
заливая его в колбу.
Хроматографическое отделение бета-каротина
Приготовление хроматографической
колонки. В суженный конец колонки вкладывают комочек стекловаты или капрона.
Непрерывной струей насыпают в колонку
окись алюминия II-й степени активности, уплотняя сорбент постукиванием по
колонке.
В
случае отсутствия сорбента нужной активности, окись алюминия готовят
следующим образом. Отвешивают в
бюкс 6 - 7 г сорбента, сушат при 160 - 180
°С в течение
60 - 90
минут. Затем, остудив сорбент в закрытом бюксе,
добавляют 3%
воды и встряхивают
или растирают в
ступке до полной
однородности массы. Поверх окиси алюминия насыпают 0,5 -
1,0 см безводного
сульфата натрия.
Затем колонку подсоединяют
к водоструйному насосу,
вставляют в
круглодонную колбу со
шлифом и при
небольшом разряжении
производят
промывку сорбента 20 мл гексана. Скорость протекания
жидкости не
должна превышать
50 - 60
капель в минуту. Фильтрат
отбрасывают. Затем
пропускают 5
мл испытуемого гексанового раствора.
Смывают колбу 5 мл
гексана и смыв
также пропускают через колонку. Смывают колбу еще 10 мл
гексана и опять смыв
пропускают через колонку. Фильтрат отбрасывают. Затем
элюируют каротин 4-процентным раствором ацетона и гексана, пропуская через
колонку 25
мл растворителя. Элюируют до
тех пор, пока начнет стекать
бесцветный элюат. Полученную фракцию выпаривают на ротационном
испарителе
под вакуумом
досуха и остаток немедленно растворяют в 50 мл гексана
(V ).
1
При исследовании
творога детского овощного
необходимо большее разведение
исследуемого раствора.
Для этого 5 мл гексанового
раствора (V = 50 мл)
1
вносят в
пробирку и добавляют
5 мл гексана, перемешивают и измеряют
оптическую
плотность (объем элюата будет = 100 мл).
При хроматографическом
отделении бета-каротина не допускать попадание воздуха
в колонку. В течение анализа экстракты бета-каротина
оберегать от света.
Спектрофотометрическое определение бета-каротина
Измеряют оптическую плотность гексанового раствора бета-каротина
на спектрофотометре при длине волны 450 нм против гексана в кюветах с рабочей длиной 1 см.
Массовую долю бета-каротина
определяют по формуле:
10 х Д х V х 100
1
М =
-----------------,
2580 х а х 1000
где:
М - массовая доля каротина в %;
Д - оптическая плотность испытуемого
раствора;
V - объем элюата
в мл;
1
а - масса (объем) навески продукта в г (мл);
100 - коэффициент пересчета на 100 г
продукта;
2580
- коэффициент удельного
поглощения 1-процентного раствора
бета-каротина (Е 1%/1 см);
1000 - коэффициент пересчета в граммы;
10 - массовая доля каротина в 1 мл 1%
раствора в мг.
Пример пересчета
Творог детский овощной. Масса навески 5 г.
Объем экстракта (V )
50 х 2 = 100 мл.
1
Оптическая плотность 0,15.
10 х 0,15 х 100 х 100
--------------------- = 0,0012%.
2580 х 5 х 1000
"Малыш" молочно-овощная смесь
стерилизованная
Объем пробы 20 мл.
Объем экстракта (V )
50 мл.
1
Оптическая плоскость 0,65.
10 х 0,66 х 50 х 100
-------------------- = 0,0006%.
2580 х 20 х 1000
Расхождения между параллельными
исследованиями не должны превышать 0,0002%.