Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
28 января 1980 г. N 2147-80
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭФ-2 В ВОДЕ И ПОЧВЕ
ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим
средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского
и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика препарата
ЭФ-2 - протравитель семян. Действующее
начало препарата -
2-дихлор-метилен-3а-7а-дихлор-3а,4,7,7а-тетрагидро-4,7-метаноиндан-1,3-дион.
H
/│\ Cl O
H / │ \ __//
││ │H │ \ = CCl C H Cl O .
││H/ │__/ 2 11 6 4 2
H \ │ /Cl
\\
Мол. масса 344,0.
\│/ O
H
ЭФ-2 в чистом виде - белые кристаллы с Т пл. 129 - 131 °С.
Нерастворим
в воде.
Растворимость при 20 °С
в гептане 4,99,
этаноле 5,96,
четыреххлористом углероде
168,7, ацетоне 185,7 мг/л, хорошо растворим в
-4
бензоле,
толуоле, гексане.
Упругость паров 3,088 х 10 мм рт.
ст. при
-3
20 °С и 1,925 х 10 мм
рт. ст. при 40 °С. ЛД для теплокровных
475 мг/кг.
50
ПДК в воде 0,01
мг/л, в почве еще не установлена.
2. Методика
определения ЭФ-2 в почве и воде
газожидкостной хроматографией
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении фунгицида из
воды гексаном, из почвы смесью ацетон - бензол (1:1)
и газохроматографическом определении с использованием детектора по захвату
электронов. Количественное определение проводится методом абсолютной
калибровки.
Диапазон определяемых концентраций в
воде 0,002 мг/л + 0,04 мг/л
в почве
0,05 мг/кг + 1 мг/кг
Предел обнаружения в мкг - 0,0002
Предел обнаружения в воде - 0,002 мг/л
в почве - 0,05 мг/кг
Средние значения определения стандартных
количеств, стандартные и средние стандартные отклонения для трех уровней
концентраций представлены в таблице:
┌──────────────┬─────────────┬─────────┬────────┬───────────┬─────────────┐
│
Концентрация │Среднее зна- │Число па-│Стан- │Относитель-│Доверительный│
│ ЭФ-2, мг/л
│чение опреде-│раллель-
│дартное │ное │
интервал │
│
(для воды), │ления
стан- │ных опре-│отклоне-│стандартное│среднего
при │
│ мг/кг
│дартных коли-│делений,
│ние, │отклонение,│ р = 0,95
│
│
(для почвы) │честв С, % │n │ср. │отн.,
% │ и n = 5, % │
├──────────────┼─────────────┼─────────┼────────┼───────────┼─────────────┤
│ 1
│ 2 │
3 │ 4 │ 5
│ 6 │
├──────────────┼─────────────┼─────────┼────────┼───────────┼─────────────┤
│Вода │ │ │ │ │ │
│0,004 │97,5 │5 │3,2 │4,0 │97,5 +/- 3,9 │
│0,01 │98,0 │4 │2,1 │3,4 │98,0 +/- 3,4 │
│0,02 │100,0 │4 │2,5 │3,9 │100,0 +/- 3,9│
│Почва │ │ │ │ │ │
│0,1 │95,0 │4 │1,05 │1,8 │95,0 +/- 1,8 │
│0,5 │96,0 │6 │2,3 │2,5 │96,0 +/- 2,5 │
│1,0 │97,0 │4 │2,4 │4,0 │97,0 +/- 3,8 │
└──────────────┴─────────────┴─────────┴────────┴───────────┴─────────────┘
2.1.2. Избирательность метода
Метод селективен;
ДДТ, его метаболиты и линдан определению не мешают.
2.2. Реактивы и
материалы
Бензол, ГОСТ 5955-74, хч,
свежеперегнанный.
Ацетон, ГОСТ 2603-71, чда,
свежеперегнанный.
Толуол, ГОСТ 5789-69, чда.
Гексан, ТУ 6-09-3375-73, перегнанный.
Натрий сернокислый безводный, ГОСТ
4166-76, хч.
Хроматон N-AW-ДMCS (фр. 0,20 - 0,25 мм) с 5% метилсиликона
SE-30.
Азот особой чистоты газообразный, ГОСТ
9293-74.
Стандартный раствор ЭФ-2 в толуоле с
концентрацией 1 мг/мл готовят растворением 0,0100 г ЭФ-2 в 10 мл растворителя.
Стандартные растворы ЭФ-2 в толуоле
стабильны при хранении в холодильнике в течение 1 года.
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
Хроматограф "Газохром-1106" с
детектором по захвату электронов или аналогичный прибор.
Вакуумный ротационный испаритель.
Встряхиватель механический.
Хроматографическая колонка стеклянная длиной 150 см и внутренним диаметром 3 +/- 0,5 мм,
заполненная хроматоном N-AW-ДMCS (0,20 - 0,25 мм) с
5% SE-30.
Воронка делительная ГОСТ 10054-75, на
1000 мл.
Колбы грушевидные с пришлифованной
пробкой, ГОСТ 10394-72, емкость 100 мл.
Колбы от воронки Бюхнера,
емкость 1000 и 250 мл.
Воронка Бюхнера,
d 15 см.
Фарфоровая ступка с пестиком.
Воронка, ГОСТ 8613-73, d 80 мм.
Колбы конические плоскодонные, ГОСТ
10394-72, емкость 250 мл.
Вакуум-насос (водоструйный, масляный).
Электроплитка.
Набор сит "Физприбор".
Микрошприц на 10 мкл.
Секундомер.
2.4. Подготовка
проб к анализу
Вода. Воду фильтруют от механических
примесей и отбирают среднюю пробу (500 мл).
Почва. Из воздушно-сухого смешанного
почвенного образца весом 1 кг методом квартования
отбирается средняя проба. Средняя проба растирается в ступке и просеивается
через сито 0,5 мм. Из просеянной пробы берется для анализа навеска 20 г.
2.5. Проведение
определения
Вода [1]. Пробу воды (500 мл) помещают в
делительную воронку и экстрагируют двумя порциями гексана
по 30 мл. Объединенный экстракт сушат безводным сульфатом натрия и фильтруют в
грушевидную колбу емкостью 100 мл. С помощью ротационного вакуумного испарителя
полностью отгоняют растворитель. К сухому остатку пипеткой добавляют 10 мл
ацетона. Колбу закрывают пробкой на шлифе и тщательно смывают стенки колбы
растворителем. В хроматограф вводят 1 мкл полученного
раствора.
Почва [1]. К 20 г
средней пробы почвы добавляют 10 мл воды, помещают в коническую колбу с
притертой пробкой и экстрагируют дважды смесью растворителей (20 мл бензола и
20 мл ацетона) при встряхивании в течение 30 мин. Почву отфильтровывают под
вакуумом и объединенный экстракт переносят в колбу для отгонки, и растворители
отгоняют досуха сначала на ротационном испарителе, затем в токе воздуха.
К сухому остатку пипеткой добавляют 10 мл ацетона. Колбу закрывают
пришлифованной пробкой и тщательно смывают стенки колбы растворителем. В
хроматограф вводят 2 мкл полученного раствора.
Условия хроматографирования
[2]
Хроматограф с детектором по захвату
электронов;
-11
Рабочая шкала электрометра 10 А;
Скорость протяжки картограммы самописца
600 мм/час;
Колонка стеклянная спиральная длиной 1,5
м и внутренним диаметром 3 +/- 0,5 мм, заполненная хроматоном
N-AW-ДМСS (0,2 - 0,25 мм) с 5% SE-30;
Температура термостата испарителя 250 °С, колонки 200 °С, детектора 230 °С;
Расход газа-носителя (азот особой чистоты)
в мл/мин. через колонку 40 +/- 2; через продувочную камеру детектора 60 +/- 2;
Линейность детектирования от 0,02 - 4 нг;
Объем, вводимый в испаритель, 2 мкл;
Минимально детектируемое количество 0,2 нг;
Абсолютное время удерживания ЭФ-2 1 мин.
55 сек. +/- 5 сек.;
Время удерживания хлорорганических
пестицидов в этих условиях:
линдан 1 мин. 12 с
гептахлор 3 мин. 6 с
пп'ДДЕ 7 мин. 12 с
пп'ДДД 9 мин. 12 с
пп'ДДТ 11 мин. 54 с.
Хроматографирование проводят дважды. На хроматограммах измеряют
высоты пиков, соответствующих ЭФ-2, вычисляют среднее значение из двух
параллельных определений. Количественное определение проводят по методу
абсолютной калибровки. Для построения градуировочного
графика готовят 10 искусственных смесей. Для этого в пробирки помещают 1, 2, 3,
4, 5, 10, 15, 20, 25 и 30 мкл стандартного раствора
ЭФ-2. К указанным количествам стандартного раствора приливают по 10 мл толуола
и по 2 мкл полученных растворов, содержащих
соответственно 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1; 2; 3; 4; 5 и 6 нг
ЭФ-2, хроматографируют при указанных выше условиях.
На хроматограммах измеряют высоты пиков ЭФ-2 и строят
график зависимости этих высот в мм от количества ЭФ-2
в нг.
Альтернативные условия хроматографирования [2]
Колонка длиной 1 м, внутренним диаметром
3 мм заполнена хроматоном N-AW-HMDS (0,125 - 0,160
мм) с 3,5% DOW-200 + 1,5% QF-1.
Т. колонки 190 °С, Т. испарителя 200 °С,
Т. детектора 220 °С. В этих условиях времена удерживания:
альфа-ГХЦГ - 1 мин. 3 с
линдана - 1 мин. 10 с
ЭФ-2 - 2 мин.
гептахлора - 2 мин. 45 с
пп'ДДЕ - 5 мин. 3 с
пп'ДДД - 6 мин. 43 с
пп'ДДТ - 8 мин. 38 с.
2.6. Обработка
результатов анализа
Содержание ЭФ-2 в пробе в мг/кг или мг/л
вычисляют по формуле:
A х V
X = ----------, мг/кг
(мг/л),
V х P х R
a
где:
A
- количество ЭФ-2, найденное в аликвоте по градуировочному
графику,
в нг;
V -
объем вводимой в хроматограф аликвоты
в мкл (2 мкл);
a
V - общий объем пробы в мл (10 мл);
P - навеска анализируемой пробы в г или объем воды в мл;
R - пересчетный коэффициент, учитывающий
сорбцию ЭФ-2 почвы во времени.
Определяют
предварительно для разного типа почв.
3. Требования
безопасности
При работе соблюдать правила
безопасности, принятые для работы с легколетучими жидкостями, а также
требования техники безопасности, регламентируемые инструкцией по эксплуатации
приборов с источниками радиоактивного излучения.
4. Литература
1. К.Ф. Новикова, Л.И. Лещинская.
"Определение остаточных количеств
ЭФ-2 в зерне и воде методом газожидкостной хроматографии с использованием
детектора по захвату электронов".
Химия в с.х. N
4, 61 - 63, 1975 г.
5. Авторы
Настоящие Методические указания включают
разработку авторских коллективов:
1. И.И. Пиленкова,
Р.Г. Юркова.
Уфимский филиал ВНИИ химических средств
защиты растений, г. Уфа.
2. К.Ф. Новикова, Л.И. Лещинская.
ВНИИ химических средств защиты растений,
г. Москва.
6. Дополнения
Настоящие Методические указания
рекомендованы в добавление к "Определению остаточных количеств ЭФ-2 в
зерне методом газожидкостной хроматографии с детектором по захвату
электронов", разработанному Новиковой К.Ф., Лещинской Л.И., утвержденному
МЗ СССР 22 сентября 1975 г., N 1350-75, опубликованному в МУ, часть VII, стр.
24 - 28, 1976 г.