Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
19 октября 1979 г. N 2093-79
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ВАЛЕКСОНА
В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ, ПОЧВЕ И ВОДЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ
И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при
МСХ СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского
и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика препарата
1.1. Валексон.
1.2. 0,0-диэтилтиофосфорил-0-(альфа-цианобензальдоксим).
1.3. S CN
|| |
---
(C H O) P-ON=C-// \\ C H
O N PS.
2 5 2
\ ___ /
12 15 3 2
--- Мол. масса 298,3.
1.4. Фоксим, байтион, волатон, Bay-77488,
ENT-27448.
1.5. В чистом виде жидкость
светло-желтого цвета с Т кип. 102 °С при 0,01 мм рт.
ст., Т пл. 3 - 4 °С. Хорошо растворяется в большинстве органических
растворителей; растворимость в воде при 20 °С - 7 мг/л.
Разрушается в сильных кислотах и щелочных
средах.
Препарат
малотоксичен для теплокровных.
При оральном введении для крыс
ЛД 1900 - 2060 мг/кг.
50
Выпускается в форме 50-процентного
концентрата эмульсии, 40-процентного смачивающегося порошка для борьбы с
сосущими и грызущими насекомыми на капусте, картофеле, томатах, яблонях и др.
культурах, а также в виде 5-процентных гранул для борьбы с почвенными
вредителями.
ПДК валексона в
продуктах питания, воде и почве не установлена.
2. Методика
определения валексона
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении валексона из анализируемых проб органическим растворителем
или для почвы смесью ацетона с 0,05 н водным раствором хлористого кальция
(смесь в соотношении 1:1), перераспределением между двумя несмешивающимися
растворителями с последующим определением тонкослойной или газожидкостной
хроматографией с ТИД. При определении методом тонкослойной хроматографии пробу
дополнительно чистят на колонке.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
ГЖХ ТСХ
Минимально
детектируемое количество 1
мг 0,5 - 3 мкг
Нижний предел
определения 0,004
мг/кг 0,1 мг/кг
(чувствительность
метода) 0,001
мг/л 0,05 мг/л
R размах
варьирования, %
в растениях 70,5 -
87,5 83 - 87
в почвах 92 -
97 90 - 95
_
c среднее
значение определения, %
в растениях 76,3 85,2
в почвах 94 92
S стандартное
отклонение, %
в растениях 7,9 3,3
в почвах 3,5 3,5
Доверительный
интервал среднего при
p = 0,95 и n =
5, %
для растений 76,3 +/- 9,1
для почв 94 +/- 4
2.1.3. Избирательность метода
Метафос, фталофос, фозалон,
карбофос, диазинон, фосфамид, гардона,
трихлорметафос-3 определению не мешают.
2.2. Реактивы и растворы
Ацетон, ч., ГОСТ 2603-63, - CH COCH .
3 3
Гексан, х.ч., МРТУ 6-09-2937-66, - CH (CH )
CH .
3 2 4 3
Хлороформ, х.ч.,
ГОСТ 3160-51, - CHCl .
3
Бензол, ч.д.а.,
ГОСТ 5955-68, - C H .
6 6
Ацетонитрил, ч.,
МРТУ 6-09-6448, - CH CN.
3
Диметилформамид,
ч., МРТУ 6-09-2058-65, - HCO(CH ) .
3 2
Хлористый натрий, х.ч.,
ГОСТ 4233-66, - NaCl.
Хлористый кальций, х.ч.,
ГОСТ 4161-67, - CaCl
х 2H O.
2 2
Сульфат натрия, безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-66, - Na SO .
2 4
Уголь активированный
марки КАД-молотый или ОУ-А.
Силикагель
КСК с флюоресцирующей добавкой
или пластинки "Силуфол
UV-254".
Окись алюминия для хроматографии, МРТУ
6-09-5296-68-4, - Al O .
2 3
Проявляющие реактивы:
1. 0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане;
2. 1-процентный раствор 4-(р-нитробензил)пиридина в ацетоне;
10-процентный раствор тетраэтиленпентамина в ацетоне;
3. Смесь бромфенолового
синего и азотнокислого серебра в ацетоне:
А. 0,5-процентный водно-ацетоновый
раствор азотнокислого серебра (1 ч. воды : 3 ч.
ацетона);
Б. 0,03 г бромфенолового
синего растворяют в 10 мл ацетона, а затем разбавляют раствором А до 100 мл;
В. 5-процентный раствор уксусной кислоты.
Азот особой чистоты.
Водород.
Стандартные растворы валексона
в ацетоне с содержанием 5 мкг/мл (для ТСХ) и в гексане
с содержанием 0,5; 1; 2; 5; 7; 10 мкг/мл (для ГЖХ).
5-процентный SE-30 и 3-процентный XE-60
на хроматоне N (80 - 100 меш), силанизированный.
2-процентный полиэтиленгликольсукцинат
на хроматоне N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм).
2.3. Приборы и посуда
Хроматограф Цвет-106 или аналогичный
прибор с ТИД.
Аппарат для встряхивания.
Ротационный вакуумный испаритель или
другой прибор для отгонки растворителей под вакуумом.
Хроматоскоп (хемоскоп)
с излучением 250 - 280 нм.
Колбы конические со шлифами на 500 мл.
Колбы круглодонные на 500 мл.
Делительные воронки на 2 л, 1 л и 0,5 л.
Колбы мерные на 200 мл и 100 мл.
Колонки для адсорбционной хроматографии
длиной 30 см, внутренним диаметром 15 мм.
Хроматографическая камера.
Камера для опрыскивания хроматограмм.
Пульверизаторы.
Пипетки на 0,1 мл, 1 мл, 5 мл, 10 мл.
Почвенное сито.
Микрошприц на 10 мкл.
2.4. Отбор и подготовка проб
Растительную пробу (овощи, фрукты,
зеленую массу растений) измельчают ножом на кусочки 0,5 х 0,5 х 0,5 см и
отбирают среднюю пробу 25 г.
Почву в естественно-влажном состоянии или
воздушно-сухую просеивают через почвенное сито и для анализа отбирают среднюю
пробу 10 г.
Проба воды - 100 мл.
2.5. Проведение определения
Анализируемые навески помещают в
конические колбы емкостью 250 мл, пробы воды - в делительные воронки, куда
добавляют по 10 г хлористого натрия.
Из растений валексон
экстрагируют 100 мл смеси ацетона с водой (1:1), из почв - 50 мл смеси ацетона
с 0,05 н водным раствором хлористого кальция (1:1). Из воды экстракцию валексона проводят хлороформом порциями по 120, 100 и 75
мл, экстракты объединяют.
Экстракцию инсектицида из образцов
производят с помощью механического встряхивания в течение 30 мин. Растительные
экстракты охлаждают в холодильнике или в смеси соли со льдом. Пробы
отфильтровывают от растительных и почвенных остатков в делительные воронки
через бумажный фильтр. Экстракцию повторяют еще два раза тем же количеством
растворителя. Объединенный экстракт подвергается очистке. Для этого в
делительную воронку приливают гексан четыре раза по
20 мл. После встряхивания 3 - 5 мин. и расслоения жидкостей собирают гексановую фракцию в круглодонную колбу, высушивают путем
фильтрования через безводный сернокислый натрий. Объединенный гексановый экстракт концентрируют под вакуумом при
температуре не выше 40° до объема 0,5 - 1,0 мл.
При определении методов ТСХ или в случае,
если методом ГЖХ получаются "грязные" хроматограммы,
проводят дополнительную очистку. Это относится в основном к образцам из
растительных объектов. Для этого в пробы добавляют 5 мл ацетонитрила
(ацетонитрил можно заменить диметилформамидом,
однако с первым растворителем очистка проходит значительно лучше) и доводят
общий объем до 50 мл водой. Пробы встряхивают 1 - 2 мин., далее производят переэкстракцию валексона в гексан. С этой целью пробы переносят в делительную воронку,
приливают 20 мл гексана, встряхивают 1 - 2 мин. и
после разделения слоев гексановый сливают в
круглодонную колбу для отгонки, фильтруя через безводный сернокислый натрий, а
водно-ацетонитрильный еще два раза промывают гексаном.
Объединенные гексановые экстракты концентрируют под
вакуумом при 40° до 5 мл и проводят количественное определение.
В случае, если
проба нуждается еще в очистке, то следует применить колоночную хроматографию, а
именно, пробу вносят в колонку (30 см х 1,5 см), заполненную слоем сернокислого
натрия (2 - 3 см), окиси алюминия для хроматографии (3 см), активированного
угля КАД-молотый или ОУ-А (3 см) и безводного сернокислого натрия (1 см).
Предварительно через колонку пропускают 30 - 40 мл хлороформа для уменьшения
сорбционной емкости. Из колонки валексон элюируют 100 мл хлороформа при отсасывании с помощью
водоструйного насоса. Хлороформ удаляют под вакуумом, остаток растворяют в гексане и определяют количество валексона
хроматографическими методами.
Пробы воды, проэкстрагированные
хлороформом, если необходимо, то чистят подобным способом.
Условия определения
тонкослойной хроматографией [1, 3]
Проба с помощью капилляра или
микропипетки наносится на хроматографическую
пластинку. Параллельно на пластинку наносят серию стандартных растворов с
содержанием 1, 2 и 5 мг валексона. Хроматограмму развивают в системе гексан
- ацетон (4:1), подсушивают на воздухе и обрабатывают одним из трех проявляющих
реагентов.
1. Хроматограмму
опрыскивают 0,5-процентным раствором 2,6-дибром-N-хлорхинонимина
в гексане, а затем нагревают в течение 5 - 7 мин. в
термостате при 110 °С. Валексон проявляется в виде
оранжевых пятен на белом фоне. Нижний предел обнаружения 0,5 мкг.
2. Хроматограмму
опрыскивают 1-процентным раствором 4-(р-нитробензил)-пиридина,
нагревают в сушильном шкафу 3 - 5 мин. при 110 °С,
затем снова опрыскивают 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина
в ацетоне. Валексон проявляется в виде
сине-фиолетовых пятен на светлом фоне. Нижний предел обнаружения 0,5 мкг.
3. Хроматограмму
опрыскивают бромфеноловым реагентом с последующим
снятием фона в результате обработки пластинки 5-процентным раствором уксусной
кислоты. Валексон проявляется в виде сине-фиолетовых
пятен на светло-желтом фоне. Нижний предел обнаружения 3 мкг.
Пластинки со слоем силикагеля, в который
внесен флуоресцирующий краситель, или пластинки "Силуфол
UV-254" можно, не проявляя их, просматривать в хроматоскопе. Инсектицид
определяют по тушению флуоресценции. Нижний предел обнаружения 1 мкг.
R валексона в системе гексан -
ацетон (4:1) на пластинках "Силуфол"
f
составляет 0,5
+/- 0,02.
Содержание валексона
в исследуемой пробе вычисляют по формуле:
С
пр
С = ---, мкг/кг (мг/л),
А
где:
С -
количество препарата, найденное по хроматограмме при
сравнении со
пр
стандартами,
мкг;
А - навеска исследуемой пробы в мг или
объем воды в мл.
Условия определения
газожидкостной хроматографией [1, 2]
Хроматограф Цвет-106 или другой модели с
ТИД.
Скорость протяжки ленты самописца 1
см/мин.
-10
Рабочая шкала электрометра 20 х 10 А.
Стеклянная колонка длиной 100 см и
внутренним диаметром 3 мм, заполненная хроматоном
N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30. Температура колонки и испарителя 130 °С.
Скорость азота 25 мл/мин., водорода 15 мл/мин., воздуха 150 мл/мин. Время
удерживания валексона 3 мин. 22 сек. Прочие ФОП
выходят позже.
В хроматограф вводят 2 мкл рабочего раствора, линейность детектирования
сохраняется в пределах 1 - 20 нг.
2.6. Количественное определение проводят
методом соотношения со стандартом по высоте пиков. Содержание валексона в анализируемой пробе вычисляют по формуле:
Н х С х V
пр ст
С = -------------, мг/кг
(мг/л),
Н х V х А
ст а
где:
Н -
высота пика анализируемой пробы, мм;
пр
Н -
высота пика стандарта, мм;
ст
С -
содержание валексона в стандарте, нг;
ст
V -
объем аликвоты, вводимой в
хроматограф, мкл (2 мкл);
а
V - общий объем рабочего раствора, мл (2
мл);
А - навеска анализируемой пробы (в
пересчете на сухое вещество), г, или
объем воды, мл.
Если при введении в хроматограф
получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание",
готовят более разбавленные растворы, добавляя к конечному раствору пипеткой
известное количество гексана.
Альтернативная колонка [2]
Колонка стеклянная длиной 2 м, внутренним
диаметром 3 мм заполнена хроматоном N-AW-ДМСS (0,16 -
0,20 мм) с 2-процентным полидиэтилен-гликольсукцинатом.
Температура колонки 190 °С, испарителя 200 °С.
Время удерживания валексона
1 мин. 37 сек. Прочие ФОП определению не мешают, т.к. выходят значительно
позже, например, время удерживания метафоса 7 мин.
Авторы
Настоящая методика включает разработки
авторских коллективов:
1. Петрова Т.М., Федорова И.С.,
Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, г. Ленинград.
2. Лещинская Л.И., Новикова К.Ф., Косачева Е.И., Всесоюзный научно-исследовательский институт
химических средств защиты растений, Москва.
3. Швец Д.А., Всероссийский
научно-исследовательский институт защиты растений, пос. Рамонь Воронежской обл.
Требования
безопасности
Общепринятые требования безопасности при
работе с горючими растворителями и фосфорорганическими пестицидами. Осторожно
обращаться с ацетонитрилом, т.к. он ядовит.