Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6215-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭФАЛЯ В БИОСУБСТРАТАХ
МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
(Дополнение к Методическим указаниям N 6132-91)
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Эфаль - смесевой препарат:
(1) трис-O-(этилортофосфит)алюминия (аналог альетта):
O
││ C H AlO P .
(C H O-PO-) Al. 6 18 9 3
2 5 │ 3
H М.м. 354,0.
(2) фосфит алюминия:
AlPO . М.м. 106,0.
3
(3) фосфористая кислота:
H PO . М.м. 82,02.
3 3
Эфаль - 66,6% к.э. - вязкая прозрачная жидкость,
хорошо растворимая в воде. Компоненты препарата I, III в воде растворимы, II -
труднорастворимы; в органических растворителях практически не растворимы.
МДУ эфаля в
огурцах - 0,5 мг/кг, винограде - 0,8 мг/кг, в воде - 0,3 мг/л.
2. Методика
определения эфаля в биосубстратах
методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении эфаля из исследуемого объекта водой, концентрировании и
последующем определении методом реакционной газожидкостной хроматографии в виде
метилпроизводных.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Минимально детектируемое количество в хроматографируемом объеме:
этилфосфита
алюминия 0,1 нг;
фосфористой кислоты 0,1 нг.
Среднее значение определения в различных
органах и тканях (селезенка, почки, сердце, мозг, сальник, печень <*>)
при n = 10, %, - 79.
--------------------------------
<*> Печень составляет исключение,
полнота извлечения из печени не превышала 15% от заданного количества. Будут
проведены дополнительные исследования.
Размах варьирования (селезенка, почки,
сердце, мозг, сальник), %, - 63 - 90.
Стандартное отклонение +/- 12,7%.
Доверительный интервал среднего при P =
0,95; n = 10 - 9,1%.
2.1.3. Избирательность метода
Условия экстракции и последующего
газохроматографического определения эфаля (этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты) позволяют
избирательно определять препарат в присутствии фосфорорганических и пестицидов
других групп.
2.2. Реактивы и
материалы
Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-87.
Метилгликоль (метилцеллозоль), чда,
МРТУ 6-09-6347-69.
Гидразингидрат, чда.
Кали едкое, ч,
ГОСТ 24363-80.
Хлороформ, хч,
ГОСТ 20015-74.
Кислота уксусная (ледяная), хч, ГОСТ 18270-81.
Кислота серная, хч,
ГОСТ 4204-77, 20-процентный раствор.
Метиловый спирт, хч,
ГОСТ 6995-77.
Диэтиловой эфир, хч, ГОСТ 6262-79.
Азот в баллоне, особой чистоты, ГОСТ
9293-74.
Водород в баллоне, ГОСТ 3022-88.
Неподвижная фаза 15% Карбовакс
20 М на хроматоне N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм).
Этилфосфит алюминия, хч.
Фосфористая кислота, хч.
Основные стандартные растворы (ОСР) этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты с концентрацией
по 100 мкг/мл готовят взятием навески каждого вещества 10 мг (0,0100 г) хч и растворением в дистиллированной воде в мерных колбах
емкостью 100 мл. Хранить в холодильнике не более 10 дней.
Рабочие стандартные растворы с
содержанием 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2 мкг/мл готовят разбавлением ОСР водой.
Хранить не более 2 дней.
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
Газовый хроматограф серии
"Цвет" или аналогичный с пламенно-фотометрическим (фосфорным)
детектором (ПФД).
Колонка стеклянная, длина 2 м, диаметр
3,5 мм.
Микроизмельчитель тканей, тип РТ-2, ТУ 64-1-1305-79.
Ротационный испаритель типа ИР-1М, ТУ
25-11-917-76.
Колбы грушевидные (круглодонные), ГОСТ
25336-82, вместимостью 500 мл, 100 мл, 50 мл ОКШ 500-29/50-14.
Колбы мерные на шлифах, ГОСТ 1770-74,
вместимостью 5 мл.
Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1; 0,2; 1;
5; 10 мл.
Микрошприц на 10 мкл МШ-10, ТУ SE-2.833-024.
Прибор для получения диазометана
(рис. 1 - не приводится):
- колба круглодонная трехгорлая,
емкостью 500 мл на шлифах (реакционный сосуд);
- холодильник Либиха на шлифах;
- делительная воронка на шлифе
(капельница);
- П-образный переходник на шлифах;
- капилляр.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Подготовка колонки для ГЖХ
Колонку заполняют стандартной фазой (15% Карбовакс 20 М на Хроматоне
N-AW-DMCS), подключив ее к вакууму водоструйного насоса. Заполненную колонку
кондиционируют в термостате колонок в течение 6 часов без подключения к
детектору, продувая азотом (20 - 24 мл/мин.) и постепенно поднимая температуру
от 100° до 150°. Затем колонку присоединяют к детектору.
2.5. Описание
определения
2.5.1. Экстракция
2 г
образца гомогенизируют в микроизмельчителе тканей с
30 мл
дистиллированной воды,
дают отстояться и отфильтровывают
водную
фазу через
складчатый фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют
2 x
10 мл воды. Объединенные водные
экстракты переносят в колбу
для отгонки
и конденсируют до ~ 2 мл под
вакуумом водоструйного
насоса при
температуре бани не более 45 °C. Измеряют точно объем
сконцентрированной
пробы (V ), отбирают 0,2 мл, переносят в мерную
1
пробирку и
доводят до 2
мл смесью растворителей
метилгликоль - ацетонитрил (1:1). Полученную смесь
переносят в
центрифужную пробирку и центрифугируют при 3000 об./мин. в течение
15 минут,
после чего отбирают для дальнейшего метилирования
1 мл
центрифугата;
либо фильтруют через
небольшой бумажный фильтр
"красная лента"
и также отбирают
для метилирования точно 1 мл
смеси, что соответствует аликвоте
0,1 мл (V ) сконцентрированного
2
(V ) экстракта.
1
2.5.2.
Получение метилпроизводных эфаля (этилфосфита алюминия
и фосфористой
кислоты)
Подготовленные аликвоты экстрактов (V ) метилируют
2
диазометаном.
Одновременно метилируют стандартные
растворы
этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты. Для этого берут
0,1 мл
рабочих
стандартных растворов (10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2 мкг/мл) и по
0,9 мл смеси растворителей метилгликоль
- ацетонитрил (1:1), т.е.
подготовленные
к метилированию и
дальнейшему
газохроматографическому анализу
стандарты содержат 1 мкг/мл, 0,5
мкг/мл, 0,2
мкг/мл этилфосфита алюминия или фосфористой кислоты.
2.5.2.1. Получение диазометана
Вследствие токсичности и раздражающего
действия диазометана прибор должен быть установлен в
вытяжном шкафу. При работе использовать индивидуальные средства защиты: экран,
перчатки, очки.
В реакционную колбу (см. рис. 1) помещают
6 г кали едкого, 3 мл метанола и 3 мл гидразингидрата. Через смесь продувают
азот с расходом 100 мл/мин. Из капельницы подают хлороформ со скоростью 1 капля
за 1 - 2 с.
2.5.2.2. В подготовленные пробы и
стандарты вводят по 5 - 6 мкл ледяной уксусной и 3 -
5 мкл 20-процентной серной кислоты и продувают
получаемый в описанном выше приборе диазометан до
появления интенсивной желтой окраски раствора пробы или стандарта. Затем
немедленно нейтрализуют избыток диазометана в пробе
(стандарте) прибавлением нескольких микролитров уксусной кислоты до
исчезновения окраски. Пробы и стандарты готовы к газохроматографическому
определению.
После окончания метилирования
прекращают подачу в реакционную колбу хлороформа, отключают азот, остатки в
реакционной колбе заливают водой и тщательно промывают колбу и все части
прибора водой.
2.5.3. Хроматографический
анализ
Газовый хроматограф серии
"Цвет" с пламенно-фотометрическим (фосфорным) детектором (ПФД).
Колонка хроматографическая
стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 3,5 мм.
Неподвижная фаза 15% Карбовакс
20 М на хроматоне N-AW-DMCS.
Температура колонки 145 °C.
Температура испарителя 180 °C.
Газ-носитель - азот с расходом 50 мл/мин.
Расход водорода 65 мл/мин.
Вводимый объем 1 - 3 мкл.
-9
Шкала множителя 2 x 64 x 10 .
Скорость диаграммной ленты 240 мм/час.
Время удерживания:
диметилфосфоната (метилирование фосфористой кислоты): 2,1
мин;
метилэтилфосфоната (метилирование этилфосфита
алюминия): 2,6 мин.
Пределы определения:
диметилфосфоната - 0,1 нг;
метилэтилфосфоната - 0,1 нг.
Количественную оценку проводят методом
соотношения со стандартом этилфосфита алюминия и
фосфористой кислоты.
Расчет результатов анализа проводят по
формуле:
C x H x V x
V
2 3
1
X = ----------------,
H x V x
V x P
1
2 4
где:
X
- содержание этилфосфита
алюминия (фосфористой кислоты) в
анализируемой
пробе, мг/кг;
C
- концентрация стандартного раствора для ГЖХ, вводимого в
хроматограф,
мкг/мл;
H -
высота пика стандартного раствора, мм;
1
H -
высота пика пробы, мм;
2
V -
конечный объем сконцентрированного экстракта пробы, мл;
1
V -
часть экстракта V , взятая для метилирования, мл;
2 1
V
- объем стандартного раствора, введенного в
хроматограф,
3
мкл;
V -
объем пробы, введенной в хроматограф;
4
P - масса анализируемой пробы, г.
3. Техника
безопасности
Соблюдать все необходимые требования
безопасности при работе в химических лабораториях, а также Правила устройства,
техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима
и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах
санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР, N 2455-81 от 20.10.81.
Особое внимание обратить при работе с
гидразингидратом и диазометаном. Соблюдать требования
безопасности, описанные в методике. Гидразингидрат - токсичная, пожароопасная
жидкость (температура воспламенения 59°, самовоспламенения 267°). При попадании
гидразингидрата на окружающие предметы, руки, одежду его немедленно смывают
большим количеством воды.