Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6181-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЦИПРОКОНАЗОЛА (АЛЬТО) В ВОДЕ, ПОЧВЕ,
РАСТЕНИЯХ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Ципроконазол (альто) -
2-(4-хлорфенил)-3-циклопропил-1(1H-1,2,4,-триазол-1-ил)бутан.
OH
--- │
C H N O.
Cl-//
\\ ---C----CH -N--N 15 18 3
\ ___ / │
2 / \\
--- CH
\\N / М.м. 291,78.
/ \
CH CH
3 / \
CH -CH
2 2
Растворим в хлороформе, ацетоне,
метаноле, хлористом метилене.
МДУ в зерновых (пшеница, ячмень) - 0,05
мг/кг.
ПДК в почве - 0,2 мг/кг, ПДК в воде
водоемов - 0,03 мг/л.
2. Методика
определения ципроконазола (альто)
хроматографическими методами в воде, почве, растениях
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на определении ципроконазола (альто) методами
газожидкостной и тонкослойной хроматографии после извлечения из анализируемой пробы
органическими растворителями (хлороформ, смеси ацетон - вода, метанол - вода).
2.1.2. Метрологическая характеристика
Диапазон
определяемых концентраций 0,005 - 0,5
мг/кг (мг/л)
Предел
обнаружения ТСХ - 2
мкг
┌─────────────┬──────────────┬───────────┬──────────────┬────────────────────┐
│Анализируемый│ Среднее
│Стандартное│Относительное │ Доверительный │
│
объект │ значение
│отклонение │ стандартное
│интервал среднего, %│
│
│определения, %│ S,
% │отклонение Sr,│ P = 0,95,
n = 5 │
│
│ │ │ %
│ │
├─────────────┴──────────────┴───────────┴──────────────┴────────────────────┤
│ ГЖХ │
│
│
│Вода
│90,1 │3,5 │3,9 │+/- 4,2 │
│Почва
│83,7 │3,6 │5,2 │+/- 6,0 │
│Растения
│78,2 │3,3 │4,3 │+/- 5,0 │
│
│
│ ТСХ │
│ │
│Вода
│85,0 │4,73 │5,0 │+/- 5,8 │
│Почва
│80,0 │6,36 │7,5 │+/- 9,2 │
│Растения
│75,0 │7,5 │9,3 │+/- 12,4 │
└─────────────┴──────────────┴───────────┴──────────────┴────────────────────┘
2.1.3. Избирательность метода
Метод избирателен в присутствии
фосфорорганических, хлорорганических пестицидов. Определению могут мешать
препараты из группы замещенных триазолов.
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон, хч,
ГОСТ 2603-79.
Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.
Метиловый спирт, чда,
ГОСТ 6995-77.
Натрий сульфат безводный, чда, ГОСТ 4166-76.
Хлороформ, чда,
ГОСТ 20015-74.
Фильтры "синяя лента".
Стандартный раствор в ацетоне
концентрации 100 мкг/мл. Готовят растворением 10 мг препарата в 100 мл ацетона.
Срок хранения до 3-х месяцев. Для ГЖХ готовят стандартные растворы
последовательным разведением исходного раствора. Срок хранения до 5 дней.
К методу ГЖХ
Носитель для колонки - Хроматон N-AW с 5% SE-30.
К методу ТСХ
Серебро азотнокислое, чда,
ГОСТ 1277-81.
Пластинки "Силуфол"
(ЧССР).
Бромфеноловый синий, чда, ТУ
6-09-1058-76.
Проявляющий реактив - раствор бромфенолового синего. 0,05 г бромфенолового
синего растворяют в 10 мл ацетона, доводят до 100 мл 0,5% водно-ацетоновым (1
часть воды + 3 части ацетона) раствором азотнокислого серебра.
2.3. Приборы и
посуда
Ротационный испаритель с набором колб
(типа ИР-1), ТУ 26-11-917-77.
Водяная баня, ТУ 64-1-2850-76.
Посуда стеклянная лабораторная по ГОСТ
1770-74, ГОСТ 25336-82.
К методу ГЖХ
Хроматограф с термоионным детектором
(типа "Цвет", "Кристалл-2000" или другой).
Колонка стеклянная, длина 1 м, диаметр 3
мм.
Микрошприц на 10 мкл МШ-10.
К методу ТСХ
Камера хроматографическая,
ГОСТ 25336-82.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.
2.4. Отбор,
хранение и доставка проб
Отбор проб производится в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукций,
пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения остаточных
количеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР 21.08.1979, N 2051-79.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов
Вода. Пробу (500 мл) воды помещают в
делительную воронку на 1 л, добавляют 10 г хлорида натрия, перемешивают и
экстрагируют ципроконазол трижды по 50 мл хлороформа,
предварительно насыщенного водой. Объединенные хлороформные экстракты сушат
безводным сульфатом натрия, упаривают до объема ~ 0,2 - 0,3 мл. Досуха удаляют
растворитель на воздухе. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, 3 - 5 мкл вводят в хроматограф.
Растительный материал. 50 г измельченной
пробы помещают в коническую колбу, заливают 200 мл смеси метанол - вода 7:3
(ацетон - вода 7:3). Встряхивают 1 часть. Экстракцию повторяют дважды.
Объединяют фильтрат, переносят в делительную воронку, прибавляют 10 г хлорида
натрия, перемешивают. Препарат из водного раствора реэкстрагируют
трижды по 50 мл хлороформа. Объединяют хлороформный экстракт, сушат безводным
сульфатом натрия и упаривают растворитель. Сухой остаток растворяют в 1 мл
ацетона и 3 - 5 мкл вводят в хроматограф.
Если экстракт содержит большое количество
коэкстрактивных веществ, сухой остаток в колбе
растворяют в 10 мл ацетона и помещают колбу в морозильную камеру. Через 2 - 3
часа после выпадания осадка раствор фильтруют через
бумажный фильтр "красная лента", смывая стенки колбы и фильтр
холодным ацетоном. Фильтрат упаривают и далее проводят определение хроматографическими методами.
Почва. 50 г почвы помещают в коническую
колбу, смачивают 10 - 15 мл дистиллированной воды, затем приливают 100 - 150 мл
смеси метанол - вода (7:3) (ацетон - вода 7:3) и далее проводят анализ так, как
описано выше для растительного материала.
Определение методом ГЖХ
Хроматограф с термоионным детектором.
Колонка длиной 1 м, диаметр 3 мм.
Носитель - Хроматон
N-AW с 5% SE-30.
Температура колонки - 210 °C.
Температура испарителя - 230 °C.
Расходы газов: азот - 30 - 32, водород 11
- 13, воздух - 100 - 150 мл/мин.
-10
Рабочая шкала электрометра - 32 x 10 .
Объем вводимой пробы - 3 мкл.
Время удерживания - 1 пик - 2,8 мин.; 2
пик - 5 - 6 мин.
Количественный расчет ведут методом
соотношения со стандартом.
Концентрацию ципроконазола
в пробе определяют по формуле (по сумме двух пиков):
C x h x V
x V
пр ст общ
X = --------------------,
h x V
x P
ст пр
где:
X - содержание ципроконазола
в пробе, мг/кг (мг/л);
C - концентрация ципроконазола
в стандартном растворе, мкг/мл;
h -
высота пика пробы, мм;
пр
h -
высота пика стандартного раствора, мм;
ст
V -
объем пробы, введенный в хроматограф, мкл;
пр
V -
объем стандартного раствора,
введенный в хроматограф,
ст
мкл;
V
- общий объем пробы, мл;
общ
P - навеска пробы, (г,
мл).
Определение методом ТСХ
Пробу после упаривания количественно
наносят при помощи капиллярной пипетки на хроматографическую
пластину так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Центр пятна должен быть на
расстоянии 2 см от нижнего края пластинки. Колбу с экстрактом 2 - 3 раза
смывают небольшими порциями ацетона, который также наносят в центр пятна.
Справа и слева от пробы наносят серию стандартов, содержащих 2, 5, 7 и 10 мкг
препарата. Пластинку с нанесенными растворами помещают в хроматографическую
камеру, в которую за 30 минут до хроматографирования
залита смесь хлороформ - ацетон 9:1. После поднятия фронта подвижной фазы на 10
см пластинку вынимают и оставляют на несколько минут для испарения
растворителя. После этого пластинку обрабатывают из пульверизатора раствором бромфенолового синего.
После
высушивания пластинку обрабатывают
для удаления фона
растворителя 2-процентным
раствором лимонной (уксусной) кислоты.
Альто проявляется в виде пятен (2 изомера)
ярко-голубого цвета на
1 2
светло-желтом фоне. Величина R -
0,45, R - 0,60.
f f
Количественное определение пестицида
проводят путем сравнения интенсивности (по сумме) окраски и площадей пятен
пробы и стандартного раствора. Прямолинейная зависимость между площадью пятна и
содержанием препарата соблюдается в интервале 1 - 10 мкг. Если содержание
препарата в пробе превышает верхнюю границу диапазона 10 мкг, то для нанесения
на пластинку необходимо брать аликвотную часть экстракта (0,1 - 0,2 мл)
параллельной пробы.
Концентрацию препарата в пробе вычисляют
по формуле:
A
X = -,
P
где:
X - содержание препарата в пробе, мг/кг
(мг/л);
A - количество препарата, найденное в
анализируемой пробе, мкг;
P - навеска пробы (г,
мл).
3. Требования
безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила
безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами.