Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6161-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ 2-АМИНО-4-ДИМЕТИЛАМИНО-6-ХЛОР-1,3,5-ТРИАЗИНА
В ВОДЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов в продуктах питания, кормах и объектах окружающей среды.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика вещества
N
// \ C H N Cl.
Cl--C // \ C--NH 5 8 5
│ ││ 2
│ ││ М.м. 173,61.
N \\
/ N
\\ /C
│
N
/ \
H C
CH
3
3
2-Амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазин
(АДХТ) - метаболит и полупродукт синтеза грамекса.
Белое кристаллическое вещество без запаха с Т пл. 210
- 211 °C. Растворимость в воде - 0,049% (25 °C), ацетоне - 1,94%, хлороформе -
0,34%.
ПДК в воде водоемов - 0,02 мг/куб. дм.
2. Методика
определения
2-амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазина в
воде
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на экстракции АДХТ из воды
хлороформом с последующим определением газожидкостной (ГЖХ) и тонкослойной
(ТСХ) хроматографией. Минимально детектируемое количество с помощью
пламенно-ионизационного детектора 0,01 мкг, минимально обнаруживаемое
количество на тонкослойных хроматограммах 1 мкг.
Предел обнаружения АДХТ в воде 0,008 мг/л (ТСХ) и 0,006 мг/л (ГЖХ).
2.1.2. Избирательность метода
Определению АДХТ не мешают другие триазины - полупродукты производства пестицидов -
производных сульфанилмочевин.
2.1.3. Метрологическая характеристика
метода приведена в таблице.
Таблица
|
Метод
определения
|
Предел
обнаружения,
мг/л
|
Процент
определения,
%
|
Средняя квадратичн.
ошибка определения,
мкг
|
Доверительный
интервал
(p = 0,95,
n = 10)
|
|
ГЖХ
|
0,006
|
65
|
+/- 1,1
|
+/- 0,8
|
|
ТСХ
|
0,008
|
72
|
+/- 0,44
|
+/- 0,3
|
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон чда, ТУ
6-08-3513-75.
Бензол чда,
ГОСТ 5955-75.
Натрий сернокислый б/в, ч, ГОСТ 4106-76.
Этиловый эфир уксусной кислоты чда, ГОСТ 22300-76.
Серебро азотнокислое чда,
ГОСТ 1277-75.
Бромфеноловый синий чда, ТУ
6-09-37-9-83.
Лимонная кислота осч,
ТУ 6-09-584-75.
Хлороформ хч,
ТУ 6-09-4263-76.
Калий иодистый чда, ГОСТ 4232-74.
Крахмал растворимый чда,
ГОСТ 10163-76.
Дистиллированная вода, ТУ 6-09-2502-77.
Калий марганцовокислый чда, ГОСТ 20490-75, 3-процентный водный раствор.
Хлористоводородная кислота хч, ГОСТ 18290-72, 12-процентный водный раствор.
Кальций сернокислый чда,
ГОСТ 3210-66.
Кальций хлористый ч,
ГОСТ 4460-77.
Силикагель КСК N 2, ГОСТ 3956-76, ТУ
6-09-2523-72.
Силикагель ЛС 5/40 для тонкослойной
хроматографии с 13% гипса (Хемапол, ЧССР).
Пластинки для тонкослойной хроматографии
"Силуфол" (Хемапол,
ЧССР).
Гидроксид натрия хч,
ГОСТ 4328-77.
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Хроматон N-AW, 0,20 - 0,25 мм, с 5% XE-60.
Хромосорб W-HP, 80/100 меш, с 3% OV-17.
2.3. Приборы и
посуда
Газовый хроматограф с
пламенно-ионизационным детектором ("Цвет-106" и т.п.).
Мерные колбы на 25 и 100 мл, ГОСТ
1770-74.
Аппарат для встряхивания, ТУ 69-1-081-73.
Водяная баня, ТУ 46-22-60375.
Электроплитка, ТУ 92-275-76.
Стеклянные пластинки, 15 х 15 см.
Сито капроновое, 100/120 меш.
Пульверизатор стеклянный для обработки
пластинок.
Камера для обработки пластинок, ТУ
10565-63.
Эксикатор, ГОСТ 6371-73.
Сушильный шкаф, ТУ 69-1-1411-76.
Делительная воронка на 500 мл, ГОСТ
100054-75.
Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10М.
Фарфоровая ступка.
Ротационный испаритель.
Стеклянный водоструйный вакуумный насос,
МРТУ 42961-64.
Весы лабораторные ВЛА-200М.
Колбы конические НШ, ГОСТ 1170-74.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,
пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Заместителем
Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 за N 2051-79.
2.5. Подготовка к
определению
2.5.1. Приготовление пластинок с тонким
слоем силикагеля для ТСХ
35 г силикагеля КСК, просеянного через
сито 100/120 меш, смешивают с 2 г сернокислого кальция и 90 мл дистиллированной
воды в фарфоровой ступке или на аппарате для встряхивания в течение 15 минут.
Около 10 г сорбционной массы наносят на стеклянную пластинку 15 х 15 см и,
покачивая, равномерно распределяют по поверхности. Пластинки сушат на воздухе в
горизонтальном положении при комнатной температуре 12 часов и затем активируют
в сушильном шкафу при 190 °C в течение 30 минут. Хранят в эксикаторе над слоем
хлористого кальция. При использовании для приготовления пластинок силикагеля ЛС
14 г этого силикагеля смешивают с 38 мл дистиллированной воды. На одну
пластинку наносят 5 - 7 г сорбционной массы и далее поступают так, как это
описано выше.
2.5.2. Приготовление стандартного
раствора
Стандартный раствор АДХТ в ацетоне с
содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 10,0 мг вещества в мерной колбе на
100 мл.
2.5.3. Приготовление проявляющих
реактивов для ТСХ
Проявляющий реактив N 1:
раствор N 1 - в мерную колбу на 100 мл
помещают 0,4 г бромфенолового синего и доводят до
метки дистиллированной водой;
раствор N 2 - в мерную колбу на 100 мл
помещают 2 г. азотнокислого серебра и доводят до метки дистиллированной водой;
пластинку обрабатывают смесью (1:1)
растворов N 1 и N 2 и затем 4-процентным водным раствором лимонной кислоты.
Проявляющие растворы при
хранении в плотно закрытых склянках без доступа света годны для применения в
течение месяца.
Проявляющий реактив N 2:
раствор N 1 - в мерную колбу на 25 мл
помещают 0,25 г иодистого калия и доводят до метки
дистиллированной водой;
раствор N 2 - 0,75 г растворимого
крахмала заваривают в 25 мл дистиллированной воды и затем охлаждают;
пластинку обрабатывают смесью (1:1)
растворов N 1 и N 2.
Проявляющий реактив готовят перед
употреблением.
2.5.4. Построение градуировочного
графика для определения АДХТ методом ГЖХ
Для построения градуировочного
графика в пробы воды (250 мл) вносят 1,5; 2,5; 5,0 и 7,5 мкг АДХТ в виде
раствора в ацетоне и далее осуществляют извлечение АДХТ из проб и хроматографирование так, как описано в п. 2.6.2. Хроматографирование одной пробы проводят дважды, измеряют
на хроматограммах высоты пиков АДХТ и строят график
зависимости высоты пика АДХТ от его содержания в воде. Полученные данные
обрабатывают по методу наименьших квадратов и получают уравнение калибровочного
графика в виде:
H = A + B x X,
где:
H - высота пика АДХТ на хроматограмме, мм;
X - содержание АДХТ в воде, мг/л;
A и B - коэффициенты, которые получают
при обработке калибровочного графика по методу наименьших квадратов.
2.6. Описание
определения
2.6.1. Тонкослойная хроматография
Пробу
воды (250 мл) помещают в
делительную воронку, доводят pH до 8 с
помощью 1М
водного раствора гидроксида
натрия и трижды
экстрагируют
хлороформом (3
x 25 мл).
Объединенный хлороформный
экстракт сушат над
безводным сульфатом
натрия (5 - 10 г)
в течение 0,5
- 1 часа при
периодическом перемешивании и
удаляют растворитель на ротационном
испарителе при температуре
водяной бани 45 °C до объема ~ 1
мл. Остаток
количественно наносят
на хроматографическую пластинку
с тонким слоем
силикагеля (могут быть
использованы пластинки, приготовленные в
лабораторных условиях, и
пластинки "Силуфол"). На эту же пластинку
наносят
стандартные количества
(1 и 2
мкг) АДХТ в виде
раствора в ацетоне и
проводят хроматографирование в системе растворителей этилацетат -
хлороформ
(1:1) в хроматографической
камере, насыщенной в течение 2 часов парами
подвижных растворителей. Для
насыщения стенки камеры
обкладывают
фильтровальной бумагой,
которая пропитывается смесью
подвижных
растворителей. После
окончания процесса хроматографирования пластинку
извлекают из
камеры и сушат на воздухе в
вытяжном шкафу. Для обнаружения
АДХТ пластинку
обрабатывают смесью N 1 и N 2 (1:1) и затем 4-процентным
водным раствором
лимонной кислоты. АДХТ обнаруживается
в виде синих пятен
на желтом фоне с
величиной R = 0,61 +/- 0,05.
f
Для
повышения надежности идентификации
АДХТ хроматографирование может
быть также проведено в
системе растворителей ацетон - бензол (3:2). Для
обнаружения АДХТ пластинку
предварительно помещают в эксикатор (камера для
хлорирования) на
2 минуты, на дно которого
наливают смесь (1:1)
3-процентного
водного раствора марганцовокислого калия
и 12-процентного
водного раствора хлористоводородной кислоты (камера насыщается
парами хлора
через 5 - 10
минут после помещения в нее растворов марганцовокислого калия
и хлористоводородной
кислоты). Затем пластинку
вынимают из эксикатора,
помещают в
вытяжной шкаф на 40 минут
для удаления паров
хлора и
обрабатывают проявляющим
реактивом N 2. АДХТ
обнаруживается в виде синих
пятен на светло-голубом фоне
с величиной R = 0,82 +/- 0,05 (пластинки
f
"Силуфол").
2.6.2. Газожидкостная хроматография
Извлечение АДХТ из пробы воды проводят
так, как это описано в п. 2.6.1. Объединенный хлороформный экстракт сушат над
безводным сульфатом натрия (5 - 10 г) в течение 0,5 - 1 часа при периодическом
перемешивании и удаляют растворитель на ротационном испарителе при температуре
водяной бани 45 °C до объема ~ 0,5 мл. Остаток растворителя удаляют потоком
теплого воздуха досуха и сухой остаток количественно
переносят ацетоном (~ 1 мл) в градуированную центрифужную
пробирку. Потоком теплого воздуха упаривают содержимое пробирки до 0,2 мл и
вводят в хроматограф 2 мкл.
Условия хроматографирования (хроматограф "Цвет-106" с
пламенным
ионизационным детектором):
стеклянная колонка (длина
1 м, внутренний
диаметр 3
мм), заполненная хромосорбом W-HP с 3%
OV-17; температура
термостата колонки
и испарителя 150 и 260 °C соответственно; скорость
газа-носителя (азот
особой чистоты) через
колонку 40 мл/мин.,
шкала
-12
электрометра 10
x 10 А, скорость диаграммной ленты
потенциометра 240
мм/час. Время удерживания
АДХТ в этих
условиях 6 минут. Для повышения
надежности идентификации
АДХТ может быть использовано хроматографическое
определение на
колонке (длина 2 м, внутренний
диаметр 3 мм), заполненной
хроматоном N-AW с
5% XE-60. Температура
термостата колонки 180
°C,
остальные условия хроматографирования
те же. Время удерживания АДХТ в этом
случае 4 минуты 26 сек.
Содержание АДХТ в воде определяют с
помощью предварительно построенного калибровочного графика.
2.7. Обработка
результатов анализа
Содержание АДХТ в пробах при определении
с помощью тонкослойной хроматографии рассчитывают по формуле:
5
10 x A
X = -------,
V x P
где:
X - содержание в пробе АДХТ, мг/л;
A - количество АДХТ в анализируемом
объеме пробы, мг;
V - объем пробы, мл;
P - процент определения, % (см. табл.).
Количественную оценку АДХТ на хроматограммах проводят путем сравнения интенсивности
окраски и площадей пятен пробы и стандартных растворов или по величине площади
пятен по формуле:
A - A
2 1
A = A - ------- x (S - S),
2 S - S 2
2 1
где:
A, S - количество (мкг) и площадь (кв. мм) пятна АДХТ в анализируемой
пробе;
A , A , S
и S - количество (мкг) и площадь
(кв. мм) пятен стандартных
1
2 1 2
растворов АДХТ с
большим и меньшим содержанием по сравнению с анализируемой
пробой.
Величину площади пятен определяют,
накладывая на пластинку прозрачную бумагу или кальку; очерчивают контур пятна,
переносят его на миллиметровку и подсчитывают число кв. мм, входящих в контур.
Содержание АДХТ в пробах (X, мг/л) при
определении с помощью газожидкостной хроматографии рассчитывают по формуле:
H - A
X = -----,
B
где:
H - высота пика АДХТ на хроматограмме анализируемой пробы, мм
(среднее значение из двух параллельных определений).
3. Требования
безопасности
Соблюдаются требования безопасности,
рекомендуемые при работе в химических лабораториях.