Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6135-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПРЕПАРАТА "КОМБИ" СМЕСИ КАРБОФУРАНА
С БЕНОМИЛОМ И ТМТД В РАСТЕНИЯХ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ
ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания,
кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Препарат "Комби",
или Фурадан-300, содержащий 27,2% карбофурана, 5,22% беномила, 5,22% тирама (ТМТД) и
62,36% инертного наполнителя, используется для предпосевной обработки семян с
нормой расхода 30 л/т.
Карбофуран /N-метил-O-2,2-диметилбензо/2,3-дигидрофурил-7/карбамат/.
// \ ───┐ CH
│
││ │/ 3
\\ / \ / \
│
O CH
O
H 3 М.м. 221,3.
│
/
O=C-N
\
CH
3
Эмпирическая формула C H O N.
12 15 3
Синонимы: фурадан,
куратер.
Белое кристаллическое вещество. Т. пл.
150 - 152 °C. Растворимость в воде 700 мг/л, в ацетоне - 150 г/кг, в ацетонитриле - 140 г/кг, в бензоле - 40 г/кг, в диметилсульфоксиде - 270 г/кг, в циклогексане - 90 г/кг.
При нагревании со щелочами и кислотами быстро разлагается. Спиртовыми
растворами щелочей разрушается даже при комнатной температуре.
В
странах Западной Европы
МДУ в шампиньонах - 0,8 мг/кг, в
кукурузе -
0,1 мг/кг. Токсичен для
пчел и других
полезных
насекомых. СК
для рыб 0,28
мг/л (при экспозиции
96 ч).
50
Акарицид, нематоцид, системный инсектицид.
Беномил
/N-/1-бутилкарбамоилбензимидазолил-2/-O-
метилкарбамат/.
NCONHC H
// \ ----- 4 9
│
││ \ --NHCOOCH
│
││ // 3 М.м.
290,3.
\\ / -----
Эмпирическая формула C H O N
.
14 18 3 4
Синонимы: бенлат,
бенлейт, узген, фунгицид
1991, фундазол.
Белое кристаллическое вещество со слабым
запахом. Т. пл. 290 °C. Практически нерастворим в воде
и в большинстве органических растворителей. Нелетуч.
ПДК в воздухе рабочей зоны 0,01 мг/куб.
м, в воде 0,5 мг/л. В СССР МДУ в сахарной свекле - 0,1 мг/кг, пшенице - 0,5
мг/кг, фруктах, огурцах, томатах и капусте - 0,5 мг/кг.
Для теплокровных животных и человека малотоксичен. Слаботоксичен для
пчел, птиц и рыб.
Основной продукт разложения беномила - N-метил-/бензимидазолил-2/-карбамат (БМК).
БМК также обладает фунгицидным
действием.
// \ ────┐N
│
││ │
│
││ │──
NHCOOCH М.м. 191,2.
\\ / \
/ 3
NH
Эмпирическая формула C H O N .
9 9 2 3
Кристаллическое вещество от серого или голубого до темно-коричневого цвета. Т. пл.
307 - 312 °C. Плохо растворим в воде и многих органических растворителях,
растворим в кислотах.
ПДК в воде 0,1 мг/л.
Беномил и БМК - системные фунгициды.
Тирам (ТМТД) /тетраметилтиурамдисульфид/.
[(CH ) NCS] М.м. 240,4.
3 2\\
2
S
Эмпирическая формула C H N S .
6 12 2 4
Кристаллическое вещество белого или
кремового цвета. Хорошо растворим в хлороформе, ацетоне, хуже в этаноле, диэтиловом эфире, практически нерастворим
в воде.
Протравитель семян, используемый для
защиты растений от заболеваний, инфекционное начало которых распространяется
семенами или находится в почве.
ПДК в воздухе рабочей зоны 0,01 мг/куб.
м. В СССР остаточные количества в продуктах питания не допускаются.
2. Методика
определения смеси
2.1. Основные
положения
Метод основан на извлечении смеси
пестицидов из исследуемой пробы подкисленной водой с pH 3, очистке перераспределением пестицидов в хлороформ с
последующим определением в тонком слое сорбента.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Таблица 1
ДИАПАЗОН ОПРЕДЕЛЯЕМЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ
┌────────────────┬────────────┬───────────────────────┬───────────────────┐
│ Пестицид
│ Проявитель │ Диапазон определяемых │ Цвет пятен │
│ │ │ концентраций, мкг │ │
├────────────────┼────────────┼───────────────────────┼───────────────────┤
│Карбофуран │N
1 │ │ │
│ │А, Б │0,1 - 3 │бордовые │
│ │А, В │0,1 - 3 │желтые │
│ │А, Г │0,1 - 3 │синие │
│ТМТД │N 1 │ │ │
│ │А, Б │0,5 - 3 │бурые │
│ │Г │0,5 - 3 │оранжевые │
│ │N 2 │0,05 - 10 │голубые │
│Беномил, БМК │N
2 │0,5 - 10 │голубые │
│ТМТД │N 3 │0,05 - 5 │светло-зеленые │
│Карбофуран │N
4 │0,1 - 5 │сине-фиолетовые │
│ТМТД │N 4 │0,5 - 10 │белые │
│Беномил, БМК │N
4 │1,0 - 10 │сине-фиолетовые │
│Карбофуран │УФ-свет │0,05
- 10 │сиреневые │
│ТМТД │УФ-свет │0,05 - 10 │сиреневые │
│Беномил, БМК │УФ-свет │0,5
- 10 │сиреневые │
└────────────────┴────────────┴───────────────────────┴───────────────────┘
Таблица 2
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА, N = 5, P = 0,95
┌────────┬──────────┬────────────┬────────────┬─────────────┬───────────────┐
│Анализи-│
Пестицид │ Предел │
Среднее │ Стандартное │
Доверительный │
│руемая │ │обнаружения,│ значение
│отклонение, %│интервал, +/- %│
│проба │ │ мг/кг
│определения,│
│ │
│ │ │ │ %
│ │ │
├────────┼──────────┼────────────┼────────────┼─────────────┼───────────────┤
│Семена │Карбофуран│0,50 │95,0 │1,8 │2,4 │
│ │Беномил │1,00 │83,5 │4,7 │7,1 │
│ │БМК │1,00 │82,4 │4,9 │7,5 │
│ │ТМТД │0,25 │92,0 │3,7 │3,2 │
│Зеленая
│Карбофуран│0,01 │81,8 │4,9 │7,6 │
│масса │Беномил │0,10 │79,0 │7,6 │15,9 │
│ │БМК │0,10 │79,9 │6,5 │10,2 │
│ │ТМТД │0,01 │80,8 │5,2 │8,1 │
│Корне- │Карбофуран│0,01 │91,8 │3,7 │5,1 │
│плоды │Беномил │0,10 │79,5 │6,1 │9,7 │
│ │БМК │0,10 │82,5 │5,2 │8,0 │
│ │ТМТД │0,01 │91,5 │6,5 │9,0 │
└────────┴──────────┴────────────┴────────────┴─────────────┴───────────────┘
2.1.3. Избирательность метода
Метод специфичен.
2.2. Реактивы и
растворы
Ацетон, хч,
ГОСТ 2603-79.
Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.
Этиловый спирт ректификат 96-процентный,
ГОСТ 5962-81.
Хлороформ, хч,
ГОСТ 20015-74.
Кислота хлористоводородная, ГОСТ 3118-77.
Кислота уксусная, ГОСТ 22300-76.
Кислота лимонная, осч,
ГОСТ 908-79.
Вода дистиллированная.
Натрий сернокислый, безводный, чда, ГОСТ 4266-76.
Кали едкое, хч,
ГОСТ 24363-80.
Перманганат калия, чда,
ГОСТ 20490-75.
п-Нитроанилин, чда, ТУ 6-09-258-70.
Натрий нитрит, хч,
ГОСТ 4197-74.
Хлорная медь, ч,
ГОСТ 4967 -48.
Азотнокислое серебро, чда,
ГОСТ 1277-81.
Бромфеноловый синий, чда, ТУ 6-09-4530-77.
о-Толидин, хч, ТУ 6-09-2232-75.
Соли диазонил:
прочный синий Б, ГОСТ 11632-65; прочный красный Б,
ГОСТ 11827-79; прочный голубой Б, ГОСТ 11632-80.
Пластинки "Силуфол"
УФ-254.
Бумага фильтровальная.
Карбофуран - 99,5% д.в.
Беномил - 99% д.в.
БМК - 50% д.в.
ТМТД - 80% д.в.
"Комби"
- к.э.
Приготовление стандартных растворов
Для сравнения готовят основные растворы:
0,3-процентный препарат "Комби",
стандартные растворы карбофурана, беномила,
БМК и ТМТД, содержащие 1000 мкг/мл, в ацетоне.
Рабочие стандартные растворы, содержащие
500 мкг/мл и 50 мкг/мл, готовят соответствующим разбавлением ацетоном основных
растворов.
Хранят растворы в холодильнике в склянках
с притертыми пробками: карбофуран - 6 месяцев, БМК -
30 дней, ТМТД - 10 дней, беномил - 10 дней,
0,3-процентный раствор препарата "Комби" -
10 дней.
Проявляющие реактивы
N 1
Реагент А. 15-процентный KOH в спиртово-водном
растворе (15 г KOH растворяют в 60 мл этилового спирта и 40 мл воды).
Реагент Б. Смешивают перед употреблением
0,1-процентный раствор п-нитроанилина в 0,1 н
растворе хлористоводородной кислоты и 4-процентный водный раствор нитрита
натрия в соотношении 10:1.
Реагент В. 0,0,1-процентный раствор солей
диазония в ацетоне.
Реагент Г. 0,5-процентный раствор
2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане
с последующим нагреванием 3 - 5 мин. при 110 - 140 °C.
Пластинку опрыскивают реагентом А, подсушивают на воздухе и опрыскивают реагентом Б, или В,
или Г.
N 2. Бромфеноловый
реагент
Опрыскивают
пластинку смесью (1:1)
0,05-процентного раствора
бромфенолового синего в 50-процентном этиловом
спирте с
1-процентным раствором
AgNO
в ацетоне. Через
1 - 2 минуты
3
опрыскивают 1-процентным раствором
лимонной кислоты или
10-процентным
раствором уксусной кислоты.
N 3. 1-процентный раствор CuCl в этиловом
спирте.
2
N 4. Галогенирование, о-толидин, йодид калия
Пластинку обрабатывают парами хлора,
проветривают и опрыскивают проявляющим реагентом.
Раствор для хлорирования. Смешивают
равные объемы 3-процентного раствора перманганата калия и хлористоводородной
кислоты.
Проявляющий реагент. 0,2 г о-толидина растворяют в 2 мл уксусной кислоты, 0,8 г йодида
калия растворяют в 2 мл дистиллированной воды, смешивают растворы и доводят
водой до 200 мл.
2.3. Приборы и
посуда
Весы технические.
Весы аналитические 2 класса, ГОСТ
19491-74.
Мерные колбы на 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Водяная баня, ТУ 46-22-603-75.
Микропипетки, ГОСТ 20292-74.
Электроплитка, ТУ 92-275-76.
Аппарат для встряхивания, ТУ
6921-1084-78.
Круглодонные колбы, ГОСТ 25336-82,
вместимостью 250 мл.
Пластинки для тонкослойной хроматографии
"Силуфол" (ЧССР).
Пульверизатор стеклянный для обработки
пластинок, ГОСТ 25336-82.
Камера для хроматографирования,
ГОСТ 25336-82.
Эксикатор, ГОСТ 25336-82.
Колбы плоскодонные со шлифом, ГОСТ
25336-82, вместимостью 500 мл.
Воронка делительная, ГОСТ 25336-82, на
500 мл.
Вакуумный насос, ГОСТ 10696-75.
Хроматоскоп.
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Отбор проб
Пробы для анализа отбираются в
соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб
сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды
для определения микроколичеств пестицидов",
утвержденными Минздравом СССР за N 2051-79 21.08.1979.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция
Растения сахарной свеклы и корнеплоды. 20
- 50 г образца измельчают, помещают в коническую колбу и заливают 100 - 150 мг
подкисленной воды с pH 3. Экстракцию проводят на
аппарате для встряхивания в течение часа. Экстракт переносят в делительную
воронку и проводят реэкстракцию трижды хлороформом
(100, 50, 50 мл) по 5 мин. Полученный экстракт фильтруют через воронку с
бумажным фильтром и 15 г безводного сернокислого натрия в круглодонную колбу,
отгоняют хлороформ на водяной бане или ротационном испарителе до 0,5 - 1 мл.
Остаток переносят в мерную пробирку, доводят до объема 1 - 1,5 мл хлороформом,
делят на две равные части и наносят на пластинку с левой и правой стороны на
расстоянии 1,5 см от краев. Рядом наносят стандартные растворы "Комби" или смесей препаратов.
Семена. 0,4 г семян (20 штук) помещают в
коническую колбу на 50 мл, заливают 20 мл хлороформа. Встряхивают в течение
часа. Фильтруют через безводный сернокислый натрий, отгоняют хлороформ на
ротационном испарителе до 0,5 - 1 мл. Переносят в пробирку, доводят объем до 2
мл, делят на две равные части и проводят анализ, как при определении в
растениях.
Семена, обработанные "Комби". Для проверки качества обработки семян берут
0,2 г семян (10 штук), заливают 10 мл хлороформа. Экстрагируют в течение часа.
Сливают хлороформ в мерную пробирку, измеряют объем, доводят до 10 мл.
Аликвотную часть 0,05 - 0,1 мл наносят в две точки в правой и левой части
пластинки. Дальше проводят определение, как в растениях.
2.5.2. Хроматографирование
Пластинку помещают в хроматографическую
камеру с подвижной фазой из смеси гексан - ацетон
(3:2) или хлороформа. Когда растворитель поднимется на 10 см, пластинку
вынимают и сушат на воздухе.
2.5.3. Проявление пластинок
Пластинку просматривают под УФ-светом. Светящиеся пятна карбофурана,
ТМТД, беномила и БМК обводят простым карандашом. Для
дополнительной идентификации соединений можно использовать проявитель N 4 (см.
табл. 1). При использовании других проявителей поступают следующим образом.
Правую часть пластинки закрывают фильтровальной бумагой. Левую
проявляют, используя проявитель N 1. Затем фильтровальной бумагой закрывают левую, а правую обрабатывают проявителем N 2. Для
обнаружения ТМТД можно использовать специфичный проявитель N 3.
Величина
R в подвижной
фазе гексан - ацетон (3:2);
f
карбофурана -
0,45; беномила - 0,65; БМК - 0,25; ТМТД - 0,50; в
хлороформе: карбофурана - 0,25; беномила - 0,45; БМК - 0,15;
ТМТД - 0,55.
2.6. Обработка
результатов анализа
Количество препаратов на пластинке определяют
по площади пятен, сравнивая с пятнами стандартных растворов, по формуле:
P
x S
1 x
P = ------- мкг,
x S
1
где:
P
и P -
содержание препарата в исследуемом и
стандартном
x
1
растворе в мкг;
S и
S - площади соответствующих пятен, кв.
мм.
x
1
Количество препаратов в мг/кг рассчитывают
по формуле:
1000 x P x V
X = ------------,
A x V
a
где:
A - масса анализируемой пробы, г;
V - объем пробы, мл;
V -
объем аликвоты, мкг;
a
P - количество препарата в хроматографируемой пробе, мкг.
2.7. Требования
безопасности
Необходимо выполнять все требования
безопасности работы с токсичными веществами, кислотами и щелочами.