Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6078-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ ИВИНА
В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ
(Дополнение к "Методическим
указаниям по хроматографическому
определению ивина в воде и овощах" N 4327-87
от 08.06.87)
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и
лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств
пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах
и внешней среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии
по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая
характеристика препарата
Краткую характеристику препарата ивин см.
во Временных методических указаниях.
2. Методика
определения ивина в биологическом материале
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на извлечении ивина из
проб органическим растворителем, кислотной очистке экстрактов, реэкстракции препарата и хроматографировании
в тонком слое силикагеля. Зоны локализации препарата обнаруживаются: водным
раствором крахмала после УФ-облучения и обработки
пластинок парами иода, альтернативно реактивом Паули
после УФ-облучения.
2.1.2. Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен
в присутствии близких по области применения и структуре следующих соединений: гидрела, дигидрела, хлорхолинхлорида, морфола, морфонола, алара, гибберелина и некоторых производных пиридина-нитрапирина, 6-хлорпиколиновоЙ кислоты, 2-пиколиновой
кислоты, 2,6-дипиколиновой кислоты, 2,6-лутидина.
2.1.3. Метрологическая характеристика
методики (n = 20, P = 0,95)
┌─────────────┬───────────────────────────────────────────────────────────┐
│Анализируемый│ Метрологические
параметры │
│ объект
├────────────┬───────────┬─────────┬───────────┬────────────┤
│ │ предел
│ диапазон │среднее │стандартное│доверитель-
│
│ │обнаружения,│ опреде-х │значение
│отклонение,│ный интервал│
│ │ мкг/г (мл) │ концен-й, │% опреде-│ %
│среднего, % │
│ │ │мкг/г
(мл) │ления │ │ │
├─────────────┼────────────┼───────────┼─────────┼───────────┼────────────┤
│Печень │0,2 │0,2 - 2 │84,5 │+/- 2,4 │+/- 5,2 │
│Почки │0,2 │0,2 - 2 │81,7 │+/- 2,2 │+/- 4,7 │
│Легкие │0,2 │0,2 - 2 │83,8 │+/- 2,4 │+/- 5,0 │
│Мозг │0,2 │0,2 - 2 │82,1 │+/- 1,9 │+/- 4,0 │
│Селезенка │0,2 │0,2 - 2 │85,7 │+/- 2,5 │+/- 5,3 │
│Сердце │0,2 │0,2
- 2 │84,7 │+/- 2,1 │+/- 4,5 │
│Кровь │0,2 │0,2 - 2 │86,4 │+/- 2,2 │+/- 4,7 │
│Моча │0,4 │0,4 - 2 │78,6 │+/- 2,1 │+/- 4,5 │
│Кал │0,4 │0,4 - 2 │77,7 │+/- 1,5 │+/- 3,2 │
└─────────────┴────────────┴───────────┴─────────┴───────────┴────────────┘
2.2. Реактивы и
материалы
Ивин, хч.
Стандартный раствор в хлороформе, содержащий 100 мкг/мл действующего вещества,
хранить в холодильнике не более 3-х месяцев.
Хлороформ, хч,
ГОСТ 20015-74.
Натр едкий, хч,
ГОСТ 4328-77, 15-процентный водный раствор.
Кали едкий, хч,
ГОСТ 4203-65, 10-процентный водный раствор.
Хлористоводородная кислота, ч, ГОСТ 3118-77, 1М водный раствор.
Натрий сернокислый безводный, ч, ГОСТ 4166-76.
Пластинки хроматографические
"Силуфол" UV-254 (ЧССР).
Бензол, хч,
ГОСТ 5955-69.
Уксусная кислота лед., ГОСТ
61-75.
Иод кристаллический, чда, ГОСТ 4139-79.
Крахмал, ГОСТ 10163-76, 1-процентный
водный раствор.
Сульфаниловая кислота, чда, ГОСТ 5821-78.
Натрий азотистокислый,
хч, ГОСТ 4197-74.
Спирт этиловый, хч,
ТУ 6-1710-77.
Диэтиловый эфир, ч, ГОСТ 6265-74.
2.3. Приборы,
аппаратура, посуда
Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4,
ТУ 16-535-280-74.
Прибор для отгонки растворителей, ТУ
25-11-917-76, тип ИР-1М.
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.
Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на 100
мл.
Колбы круглодонные, ГОСТ 25336-82, на 100
мл.
Воронки делительные, ГОСТ 25336-82,
вместимостью 250 мл.
Воронки химические, ГОСТ 25336-82.
Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1 мл.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, емк. 50,
100 мл.
Камера хроматографическая,
ГОСТ 25336-82.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 25336-82.
Фильтры бумажные "синяя лента".
Камера с парами иода
(10 - 20 г кристаллического иода помещают на дно
герметически закрытой камеры).
2.4. Подготовка к
определению
Приготовление проявляющего реактива
Паули: к раствору 25 г сульфаниловой кислоты в 125 мл 10-процентного раствора
кали едкого добавляют (при охлаждении) 100 мл раствора нитрита натрия, 40 мл
концентрированной хлористоводородной кислоты и 20 мл воды. Полученную соль
промывают последовательно ледяной водой, этанолом, диэтиловым
эфиром и высушивают. При хранении в темной склянке в холодильнике соль
устойчива несколько месяцев. Для опрыскивания готовят 0,1 г диазониевой
соли в 20 мл 15-процентного раствора едкого натра. Раствор готовят перед
употреблением.
2.5. Описание
определения
2.5.1. Экстракция и очистка
5 г измельченного биологического материала
(мозг, печень, почки, легкие, кал, сердце, селезенка) или 5 мл крови, мочи
помещают в плоскодонную колбу и экстрагируют хлороформом трижды по 20 мл.
Объединенные экстракты отфильтровывают через бумажный фильтр с безводным
сернокислым натрием в колбу для выпаривания. Растворитель отгоняют на
ротационном испарителе досуха при температуре не выше 60 °C. К сухому остатку
добавляют 10 мл 1М раствора хлористоводородной кислоты, тщательно смывая
остаток со стенок колбы. Раствор фильтруют через фильтр "синяя лента"
в делительную воронку. Колбу еще дважды ополаскивают по 5 мл 1М раствором
хлористоводородной кислоты и сливают в ту же воронку.
Кислотный экстракт нейтрализуют 15%
раствором едкого натра и реэкстрагируют ивин
хлороформом 3 x 30 мл. Хлороформный экстракт высушивают безводным сернокислым
натрием и отгоняют растворитель на ротационном испарителе досуха при
температуре не выше 60 °C.
2.5.2. Хроматографирование
и проявление
После отгонки растворителя остаток с
помощью хлороформа количественно наносят на пластинку "Силуфол"
(ЧССР) на расстоянии 1 см от нижнего края пластины. Сначала хроматографирование
проводят в бензоле. При этом ивин остается на старте, а примеси, содержащиеся в
пробе, продвигаются вверх. Пластинку высушивают на воздухе и проводят вторичное хроматографирование в
том же направлении в смеси бензол - уксусная кислота в соотношении 1:1,5. После
хроматографирования пластинку высушивают и
выдерживают под ртутно-кварцевой лампой в течение 10 - 15 минут.
Затем
пластинку или помещают
в камеру с
парами иода и
обрабатывают раствором крахмала, или сразу обрабатывают
реактивом
Паули. Зоны
локализации ивина обнаруживаются
в виде синих пятен
(пары иода - крахмала) или в
виде розовых пятен (реактив Паули) с
величиной R 0,58 +/- 0,02.
f
2.6. Обработка
результатов анализа
Количественная оценка проводится путем
сравнения площадей и интенсивности окраски проб и стандартных растворов.
Содержание ивина в пробе определяют по
следующей формуле:
A x S
2
X = ------,
P x S
1
где:
X - содержание ивина в пробе, мг/г (мл);
A
- количество ивина, содержащегося в пятне стандартного
раствора, мкг (в
диапазоне линейности);
S -
площадь пятна стандартного раствора, кв. мм;
1
S -
площадь пятна пробы, кв. мм;
2
P - количество анализируемой пробы, г (мл).
3. Требования
техники безопасности
Соблюдать все необходимые требования
безопасности при работе в химических лабораториях, а также правила устройства,
техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима
и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах
санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР (N 2455-81 от
20.10.81).