Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1989 г. N 5043-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЦИТРАЗОНА В ЦИТРУСОВЫХ
МЕТОДОМ
ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны М.В. Письменной,
А.П. Алейновой (ВНИИГИНТОКС).
Краткая
характеристика препарата. Цитразон -
2,6-диметокси-3-хлоро-
альфа-этоксиминобензилового
спирта бензоат.
Брутто - формула C H ClNO .
18 18 5
Молекулярная
масса 363,5. Общепринятое название - бензоксимат,
синонимы -
артабан, ситразон, бензомат. Белое кристаллическое вещество с т. пл. 73 °C.
Растворимость (г/л): в бензоле -
650, гексане - 8, диметилформамиде
- 146,
ксилоле - 710.
В воде практически
нерастворим.
Легко гидролизуется
щелочами.
Относится к малотоксичным соединениям, ЛД
для крыс 15000 мг/кг.
50
Принцип метода. Методика основана на хроматографировании цитразона в
тонком слое силикагеля в системе гексан-метанол-этилацетат
после экстракции из цитрусовых гексаном
и очистки экстракта смесью активированного угля и оксида алюминия.
Метрологическая характеристика метода.
Минимальное детектируемое количество 1 мкг. Нижний предел определения 0,2
мг/кг. Среднее значение определения 87%.
Избирательность метода.
Определению могут мешать
ХОП, имеющие
в
рекомендуемой
подвижной фазе близкие значения R и
проявляющиеся аммиакатом
f
серебра.
Реактивы и растворы. Аммиак
ч.д.а. Ацетон ч.д.а. н-Гексан ч. Метиловый
спирт х.ч. Бензол ч.д.а.
Этиловый эфир уксусной кислоты х.ч. Сульфат натрия
безводный
ч. Нитрат серебра х.ч. Уголь активированный марки ОУ-А. Оксид
алюминия для хроматографирования
дезактивированный (к 50 г Al O добавляют
2 3
1,5 мл воды и
встряхивают 2 ч в
герметично закрытой колбе). Пластинки
хроматографические "Силуфол"
размером 15 x 15 см. Беззольные фильтры "синяя
лента". Цитразон х.ч. Стандартный раствор
цитразона в гексане
концентрацией
100 мкг/мл (хранить в холодильнике не более 6
мес.). Проявляющий реагент:
0,5 г AgNO растворяют в 5
мл дистиллированной воды, добавляют 7 мл NH OH и
3
4
доводят ацетоном
до 100 мл (используют свежеприготовленным).
Приборы и посуда. Аппарат для встряхивания
проб АВУ-1. Весы аналитические ВЛР-200. Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М.
Вакуумный водоструйный насос. Водяная баня. Колбы: конические плоскодонные на
100 мл с притертыми пробками; мерные на 100 мл. Концентраторы (грушевидные
колбы на 25 и 100 мл) на шлифах (N 14 или N 19). Пипетки мерные на 0,1; 1; 2; 5
мл. Воронки химические диаметром 6 см. Камера для опрыскивания. Камера для хроматографирования. Лампа кварцевая ПРК-4 или ПРК-7.
Пульверизаторы стеклянные.
Ход анализа. Экстракция. Измельченную
среднюю пробу плодов цитрусовых (5 - 10 г) помещают в коническую колбу на 100
мл, трижды экстрагируют порциями гексана по 20 мл,
встряхивая каждый раз на аппарате для встряхивания 30 мин. Экстракт
отфильтровывают через небольшой ватный тампон с помещенным на него слоем
безводного сульфата натрия (10 - 15 г). Колбу и фильтр трижды промывают гексаном порциями по 10 - 15 мл. Объединенный экстракт
отгоняют досуха на ротационном испарителе при температуре не более 50 °C.
Очистка
экстракта. Сухой остаток
растворяют в 2 мл смеси бензола и
ацетона в
объемном соотношении 1:3...4, вносят
200 мг дезактивированного
Al O и 100 мг активированного угля марки ОУ-А. Тщательно перемешивают в
2 3
течение 1
мин. Пробу фильтруют
через смоченный
смесью бензола и ацетона
беззольный фильтр
"синяя лента" в грушевидную колбу вместимостью 15 мл.
Остаток в
колбе трижды промывают
небольшими порциями смеси бензола с
ацетоном (по
2 мл). К
фильтрату прибавляют новую
порцию (200 мг)
дезактивированного
Al O и 100
мг активированного угля,
встряхивают в
2 3
течение 1
мин. и вновь фильтруют через складчатый
фильтр, смоченный смесью
бензол-ацетон.
Остаток в колбе и фильтр промывают небольшими порциями смеси
бензола и
ацетона (2 - 3 мл). Общий
объем фильтрата не должен
превышать
15 мл. Элюат упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной
бани не более 45
°C до объема 0,2 - 0,3 мл, затем при комнатной температуре
остаток
упаривают досуха.
Условия
хроматографирования. Сухой
остаток пробы растворяют
в
0,2 - 0,3 мл гексана. На
пластинку "Силуфол" на расстоянии 15 - 20 мм от
нижнего края
с помощью микропипетки или стеклянного капилляра
наносят
гексановые
растворы проб и рядом стандартные растворы цитразона
(1; 5; 10 и
20 мкг).
Пластинку хроматографируют в
системе подвижных растворителей
гексан-метанол-этилацетат (10:0,74:1), налитых в
камеру для
хроматографирования за 30 мин. до помещения пластинки.
После того как фронт
подвижного растворителя
поднимется на высоту 10 см, пластинку вынимают из
камеры,
подсушивают на воздухе и опрыскивают проявляющим реагентом.
После
проявления
пластинку облучают УФ-светом до четкого появления серых пятен на
бежевом фоне пластинки
(10 - 15
мин.). Величина R
в системе
f
гексан-метанол-этилацетат составляет 0,53 +/- 0,03.
Обработка результатов анализа.
Количественное определение проводят путем сравнения интенсивности окраски и
площади пятна пробы и стандартного раствора. Содержание препарата в
анализируемой пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
A
X = -,
P
где:
A - количество препарата, найденное путем
сравнения размера и интенсивности окраски пятен пробы и стандартного раствора,
мкг;
P - масса пробы, взятой для анализа, г.
Требования безопасности. Следует
соблюдать правила безопасности, рекомендуемые для работы в химических
лабораториях с органическими растворителями и УФ-светом.