Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1989 г. N 5028-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АТРАЗИНА В ЗЕРНЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ КУКУРУЗЫ
И СОИ МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Дополнение к N 1542-76 от 20.12.76
Краткая характеристика препарата
приведена в табл. 154. Растворимость в воде 70 мг/л. МДУ, мг/кг: в плодах - 1;
кукурузе и сорго - 0,5; фруктах и овощах - 0,1; зерне - 0,1; мясе, яйцах -
0,02. В молоке содержание атразина не допускается.
Применяется в качестве гербицидов для борьбы с сорняками в посевах кукурузы,
сои, сорго, сахарного тростника и др.
Принцип метода. Метод основан на
экстракции пестицида из анализируемых проб органическим растворителем, очистке
экстрактов переэкстракцией из гексана
в ацетонитрил, колоночной хроматографии экстрактов и
определении методами ГЖХ с ДЭЗ или ТСХ (пластинки "Силуфол",
подвижная фаза бензол - гексан - ацетон в соотношении
15:10:2). Проявление - обработка смесью нитрата серебра с бромфеноловым
синим, а затем - 4-процентным раствором лимонной кислоты.
Метрологическая характеристика метода
приведена в таблице 144.
Таблица 144
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА (N = 6)
┌───────────────────────────────────┬──────────────────┬──────────────────┐
│ Параметры │ Метод ГЖХ │
Метод ТСХ │
│ ├────────┬─────────┼────────┬─────────┤
│ │
зерно │ зеленая
│ зерно │ зеленая │
│ │ │
масса │ │
масса │
├───────────────────────────────────┼────────┼─────────┼────────┼─────────┤
│Диапазон
измеряемых концентраций, │0,02 - 2│0,01
- 2 │0,02 - 2│0,01 - 2 │
│мг/кг │ │ │ │ │
│Предел
обнаружения, мкг │0,0005 │0,0005 │0,5 │0,5 │
│Предел
определения в пробах, мг/кг │0,02
│0,01 │0,02 │0,01 │
│Среднее
значение определения │83,0 │82,0 │85,0 │81,0 │
│стандартных
количеств, % │ │ │ │ │
│Стандартное
отклонение S, % │+/- 5,5 │+/-
4,4 │+/- 6,5 │+/- 4,6 │
│Доверительный
интервал среднего │+/- 5,8 │+/-
4,6 │+/- 6,8 │+/- 4,8 │
│при
p = 0,95, % │ │ │ │ │
└───────────────────────────────────┴────────┴─────────┴────────┴─────────┘
Избирательность метода. Метод селективен. Определению не мешают хлорорганические
пестициды и симм-триазины.
Реактивы и растворы. Атразин,
содержание основного вещества не менее 96%. Ацетон ч.д.а.
Гексан ч. Ацетонитрил ч.
Бензол ч. Бромфеноловый синий. Нитрат серебра.
Лимонная кислота особой чистоты. Хлорид натрия х.ч.
Оксид алюминия L 40/250 нейтральный для хроматографии. Силикагель марки КСК,
зернение 0,25 - 0,50 мм. Хроматон N-AW-DMCS (фракция
0,20 - 0,25 мм) с 5% силикона DC-550. Азот особой чистоты газообразный в
баллоне с редуктором. Пластинки "Силуфол"
размером 150 x 150 мм. Фильтры бумажные беззольные "синяя лента".
Стандартные растворы атразина:
N 1 - концентрация 1 мг/мл (готовят в мерной колбе вместимостью 50 мл,
растворяя препарат 0,0500 г в ацетоне); N 2 - концентрация 0,1 мг/мл (в мерной
колбе вместимостью 50 мл разбавляют 5 мл стандартного раствора N 1 ацетоном).
Стандартные растворы хранят в холодильнике в течение месяца; 0,4-процентный
водный раствор бромфенолового синего. Раствор
устойчив в течение месяца; 2-процентный водный раствор нитрата серебра. Раствор
устойчив в течение 10 дней. Проявляющий реагент N 1 (смешивают равные объемы
водных растворов 0,4-процентного бромфенолового
синего и 2-процентного нитрата серебра). Смесь растворов устойчива в течение 6
- 8 ч. Лимонная кислота - 4-процентный водный раствор. Устойчива
в течение 10 дней. Подвижная фаза: смесь бензола, гексана,
ацетона в объемном соотношении 15:10:2.
Растворители смешивают в хроматографической камере за 30 мин. до хроматографирования.
Смесь растворителей N 1: гексан - бензол (1:1) для
элюирования коэкстрактивных веществ. Смесь
растворителей N 2: гексан - ацетон (100:10) для элюирования
атразина с сорбента.
Приборы и посуда. Хроматограф
"Газохром-1106Э" или любой другой аналогичный прибор с ДЭЗ. Колонка хроматографическая стеклянная размером 200 x 0,3 см.
Колонка адсорбционная стеклянная размером 30 x 0,8 см. Ротационный вакуумный испаритель.
Аппарат для встряхивания. Микрошприц на 10 мкл. Вакуум-насос. Колбы: грушевидные для отгонки
растворителя; мерные; Бунзена; конические плоскодонные различной вместимости.
Цилиндры. Мензурки различной вместимости. Пипетки различной вместимости. Воронки:
химические; делительные вместимостью 100, 250, 500 мл; Бюхнера.
Стаканы химические. Весы лабораторные аналитические. Весы технические.
Кофемолка электрическая бытовая. Камера хроматографическая
стеклянная. Пульверизатор стеклянный. Пробирки градуированные
со шлифом вместимостью 10 мл. Микропипетка или стеклянный капилляр.
Подготовка к определению. Приготовление градуировочных растворов для построения градуировочного
графика. В 6 градуированных пробирок вносят 25, 50 мкл
стандартного раствора N 2 и 10, 25, 50 и 100 мкл
стандартного раствора N 1 и доводят объем ацетоном до 10 мл. Хроматографируют по 2 мкл каждого
из полученных растворов, что соответствует 0,0005; 0,001; 0,002; 0,005; 0,010 и
0,020 мкг атразина. Хроматографирование
каждого раствора проводят трижды и строят график зависимости средних высот
пиков (мм) от количества атразина
(мкг).
Подготовка хроматографической
колонки для ГЖХ. Хроматографическую колонку размером
200 x 0,3 см заполняют хроматоном N-AW-DMCS с
нанесенной на него в количестве 5% неподвижной жидкой фазой DC-550,
устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют в токе газа-носителя.
Скорость 30 - 50 мл/мин. при температуре 250 °C в течение 40 ч и 300 °C - 6 ч.
Подготовка адсорбционной колонки с
сорбентами для очистки экстрактов. Колонку размером 30 x 0,8 см заполняют при
легком постукивании нейтральным оксидом алюминия на высоту 2 см, затем
силикагелем марки КСК на высоту 5 см и промывают последовательно 5 мл ацетона и
10 мл гексана.
Приготовление стандартной шкалы для метода
ТСХ. В 6 пробирок вносят 5 и 10 мкл стандартного
раствора N 2; 2, 5, 10, 20 мкл стандартного раствора
N 1 и по 0,5 мл смеси растворителей N 2. На пластинке "Силуфол"
на расстоянии 15 мм от края намечают линию старта, на которую справа и слева от
центра наносят в виде отдельных пятен на расстоянии 15 мм друг от друга
содержимое каждой пробирки. Содержание атразина в
пятнах 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 и 20,0 мкг соответственно.
Хранение проб. Срок хранения проб 1 мес.
Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов.
Пробу измельченной зеленой массы (10 - 50 г) помещают в коническую колбу с
притертой пробкой, заливают 50 мл ацетона, экстрагируют при встряхивании в
течение 30 мин. и отфильтровывают под вакуумом. Пробу экстрагируют повторно
свежей порцией ацетона (50 мл). Экстракты соединяют, приливают 100 мл гексана, добавляют 20 г хлорида натрия, тщательно
встряхивают, выделившийся водный слой отделяют и экстрагируют 50 мл гексана. Органические слои объединяют в делительной воронке
и выделившееся небольшое количество воды сливают. Органический экстракт
пропускают через слой безводного сульфата натрия (40 г), помещенного на
бумажный фильтр в химической воронке, и концентрируют до отсутствия запаха
растворителей (ротационный испаритель, ток воздуха). Маслянистый остаток
растворяют в 20 мл гексана и встряхивают в течение 1
мин. с 5 мл 40-процентной водной суспензии фосфорно-молибденовой кислоты.
Водный слой отделяют, гексановый - экстрагируют 10 мл
дистиллированной воды, пропускают через слой безводного сульфата натрия (20 г),
после чего сульфат натрия промывают 10 мл гексана. Из
гексанового раствора атразин
дважды экстрагируют ацетонитрилом порциями 30 и 20
мл. Ацетонитрильный (нижний) слой пропускают через бумажный фильтр и
концентрируют в ротационном испарителе или током воздуха до 1 - 2 капель в
остатке. Остаток переносят количественно тремя порциями смеси растворителей N 1
по 1 - 2 мл в колонку с сорбентом для очистки экстракта и коэкстрактивные
вещества элюируют 20 мл смеси растворителей N 1. Элюат отбрасывают. Атразин элюируют 100 мл смеси растворителей N 2. Элюат концентрируют досуха, остаток растворяют в 2 мл
ацетона, аликвоту раствора хроматографируют
на газовом хроматографе. Для метода ТСХ элюат
концентрируют досуха и остаток с помощью смеси растворителей N 2 количественно
переносят на пластинку "Силуфол".
Пробу зерна кукурузы и сои (10 - 25 г)
измельчают на кофемолке, помещают в коническую колбу с притертой пробкой и
дважды экстрагируют ацетоном порциями 50 и 25 мл при встряхивании по 30 мин.
Экстракты фильтруют под вакуумом, фильтрат концентрируют до маслянистого
остатка. Остаток растворяют в 30 мл ацетонитрила и
экстрагируют 6 раз гексаном порциями по 10 мл. Гексан отбрасывают, ацетонитрильный экстракт концентрируют
до отсутствия растворителя. Остаток переносят количественно в колонку с сорбентом и экстракт очищают так, как описано для зеленой
массы.
Условия
хроматографирования. Метод
ГЖХ. Аликвоту
очищенных
экстрактов хроматографируют
при следующих условиях. Рабочая шкала
-12
электрометра 20
x 10 А. Скорость протяжки картограммы
200 мм/ч.
Колонка стеклянная
длиной 200 мм,
диаметром 3 мм, заполненная
хроматоном
N-AW-DMCS (0,20 -
0,25 мм) с 5%
силикона DC-550.
Температура, °C:
термостата колонок - 200; испарителя - 250;
детектора - 230.
Расход газа-носителя, мл/мин.: через колонку - 50
+/- 3;
продувочную камеру детектора
- 75 +/- 3.
Линейность
детектирования от
0,0005 до 0,0200
мкг. Объем, вводимый
в
испаритель, 2 мкл. Минимально детектируемое количество 0,5 нг.
Абсолютное время
удерживания атразина 3 мин. 55 с.
Хроматографирование проводят трижды, измеряют высоту пиков, соответствующих атразину, вычисляют среднее значение. По среднему значению
высоты пика и градуировочному графику находят
количество атразина в аликвоте.
Метод ТСХ. Очищенные экстракты пробы
концентрируют досуха, стенки колбы дважды обмывают 0,5 - 1 мл смеси
растворителей N 2 и остаток после концентрирования в токе воздуха до 0,3 - 0,5
мл наносят в центр линии старта пластинки "Силуфол"
со стандартной шкалой.
Пластинку
помещают в наклонном положении в хроматографическую
камеру с
подвижной фазой, развивают на
высоту 10 см, после чего
подсушивают на воздухе, опрыскивают сначала проявляющим
реагентом
N 1, затем N 2. Атразин
проявляется в виде синих пятен на светлом
фоне с R 0,2.
f
Для количественного определения с помощью
прозрачной миллиметровой бумаги измеряют площадь пятен пробы и близкой им по
интенсивности окраски стандартной шкалы.
Обработка результатов анализа. Содержание
атразина в объекте (X, мг/кг) вычисляют по формулам:
100AV
X = ----- (метод ГЖХ);
V PR
1
100BS
пр
X = ------- (метод ТСХ),
S PR
ст
где:
A
- количество атразина в хроматографируемом
объеме пробы,
найденное по градуировочному
графику, нг;
B - количество атразина
в стандартном пятне, мг;
V -
объем аликвоты, мкл;
1
V - общий объем пробы, мл;
P - масса анализируемой пробы, г;
R - степень определения, найденная
предварительно, %;
S ,
S -
площади пятен соответственно
пробы и стандартного
пр ст
раствора, кв.
мм.
Требования безопасности. Соблюдать
правила безопасности при работе с пестицидами и легковоспламеняющимися
жидкостями.