Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1989 г. N 5013-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДРОППА В СЕМЕНАХ ХЛОПЧАТНИКА
И ВИНОГРАДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ
ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны
Н.А. Грузинской, К.Ф. Новиковой, Л.М. Шехтман
(ВНИИХСЗР).
Краткая характеристика препарата дана в
Методических указаниях N 2807-83.
Принцип метода. Метод основан на
извлечении дроппа из анализируемого объекта
этилацетатом, очистке экстракта перераспределением в соляную кислоту, а затем,
после подщелачивания раствора, - в этилацетат и определении дроппа
методом ТСХ.
Метрологическая характеристика метода.
Предел обнаружения в хроматографической пробе 0,03
мкг. Предел определения в семенах хлопчатника 0,025, винограде 0,001 мг/кг.
Среднее значение определения стандартных количеств дроппа
при n = 13 для семян хлопчатника 85 +/- 12%; при n = 30 в винограде 77 +/-
5,6%. Доверительный интервал (при p = 0,95, n = 5), %: для семян хлопчатника
+/- 15, винограда +/- 7%.
Избирательность метода. Метод селективен. Хлор- и фосфорорганические пестициды,
применяющиеся в хлопководстве и виноградарстве, определению не мешают.
Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Гексан х.ч.
Этилацетат свежеперегнанный х.ч. Гидроксид натрия 4
н. Сульфат натрия безводный х.ч. Хлороводородная
кислота 0,1 н. Ледяная уксусная кислота 5-процентная. Пластинки "Силуфол". Стандартный раствор дроппа
в ацетоне концентрацией 10 и 100 мкг/мл. Бромфеноловый реагент (растворяют 0,05 г бромфенолового
синего в 10 мл ацетона и доводят до 100 мл 0,5-процентным раствором
азотнокислого серебра в смеси ацетон-вода (3:1). Раствор хранят в
темноте в прохладном месте. Раствор стабилен в течение 2 недель.
Приборы, аппаратура и посуда. Хроматографическая камера. Аппарат для встряхивания.
Ротационный вакуумный испаритель. Кофейная мельница. Делительные воронки на 500
мл. Колбы конические на 250 и 500 мл; круглодонные на 250 мл; мерные на 50 и
100 мл. Пипетки на 0,1; 1; 5 и 10 мл. Пульверизатор.
Подготовка к определению. Хроматографические камеры заполняют системами подвижных
растворителей гексан-ацетон (4:3) за 1 ч до начала хроматографирования для насыщения парами растворителей.
Уровень подвижных растворителей в камере не должен превышать 0,7 - 1 см от
уровня дна камеры.
Хранение проб. Срок хранения проб 3 мес.
Ход
анализа. Пробу семян измельчают с помощью кофейной
мельницы до
размера частиц,
равного размеру частиц манной
крупы. Виноград измельчают
ножницами. Навеску
семян (20 г) или винограда
(30 г) помещают
в
плоскодонную
колбу на 250 мл, заливают этилацетатом (100 мл) и оставляют на
ночь. Утром
экстракт фильтруют через
бумажный фильтр "синяя
лента" в
круглодонную
колбу на 250 мл. Экстракцию повторяют
еще дважды этилацетатом
порциями по
75 мл, встряхивая
по 15 мин. Из
объединенного экстракта
этилацетат полностью отгоняют на ротационном
испарителе. В колбе остается
масло в
случае анализа семян
или сахара при анализе
винограда. Колбу
промывают 0,1
н HCl (150
мл), собирая солянокислый раствор
в
делительную воронку
на 500 мл, и
дважды промывают гексаном порциями по
30 мл, встряхивая по 5 мин. В
случае анализа винограда к
солянокислому
экстракту добавляют
150 мл дистиллированной
воды. После второй промывки
гексаном
солянокислый раствор фильтруют
через бумажный фильтр
"синяя
лента". Гексановый слой
отбрасывают. К солянокислому
раствору добавляют
4 мл 4 н
раствора едкого натра до pH 10 и дропп трижды экстрагируют
этилацетатом
порциями по 50 мл. Этилацетатный
экстракт сушат над безводным
сульфатом натрия,
фильтруют в круглодонную колбу на
250 мл и
с помощью
ротационного
вакуумного испарителя полностью отгоняют
растворитель. Сухой
остаток после
удаления растворителя смывают со стенок колбы количественно
2 - 3 мл
ацетона в пробирку с оттянутым кончиком. В
пробирку помещают
заплавленный
сверху стеклянный капилляр и упаривают ацетон
нагреванием
пробирки на горячей
водяной бане до объема около 0,1 мл.
Остаток с помощью
того же
капилляра, но с
отломленным заплавленным концом
наносят на
хроматографическую пластинку, предварительно промытую
ацетоном. Параллельно
на пластинку микрошприцем наносят серию стандартных растворов с
содержанием
дроппа 2; 1; 0,5 и 0,2 мкг. Хроматограмму
развивают в системе гексан-ацетон
(4:3). После
поднятия фронта подвижного
растворителя на 10 - 12
см
пластинку
вынимают из камеры
и оставляют при комнатной
температуре на
5 - 10 мин. для испарения растворителя, а затем хроматограмму обрабатывают
из
пульверизатора раствором бромфенолового реагента.
Пластинку помещают в
сушильный шкаф и
выдерживают в течение 10 мин. при температуре
60 - 80 °C.
После охлаждения
пластинку обрабатывают 5-процентным раствором уксусной
кислоты. Дропп на
пластинках проявляется в виде синих
пятен на
лимонно-желтом фоне с R 0,41 +/-
0,02.
f
Обработка результатов анализа. Содержание
дроппа (тидиазурона) в
пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
A
X = -,
P
где:
A - количество дроппа,
найденное в хроматографируемой пробе методом
соотношения со стандартами, мкг;
P - навеска анализируемой пробы, г.