Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1987 г. N 4388-87
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ НАБУ В МОРКОВИ МЕТОДОМ
ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны
Т.В. Ушаковой, С.В. Тулуповой (ВНИИССОК).
Краткая характеристика препарата
приведена в Методических указаниях N 3880-85.
Принцип метода. Метод заключается в
проведении реакций превращения ряда
промежуточных
продуктов разложения набу в соединение типа M SO ,
экстракции
2 2
препарата хлороформом, очистке
экстракта перераспределением в
несмешивающихся растворителях, дополнительной очистке
хроматографией в
тонком слое и количественном определении методом ГЖХ с применением
ПИД.
Метрологическая характеристика метода.
Минимально детектируемое
количество M SO
с ПИД 50 нг.
Линейный диапазон определения 50 - 400 нг.
2
2
Нижний предел определения 0,01 мг/кг. Среднее
значение определения в пробе
82,0%. Относительная
ошибка определения (при p = 0,95,
n = 5) составляет
+/- 5,3%.
Реактивы
и растворы. Спирт
этиловый 96-процентный. Универсальная
индикаторная бумага.
Пероксид водорода, 30-процентный раствор.
М-Хлорнадбензойная
кислота х.ч. Гидроксид
натрия х.ч. Сульфат
натрия
безводный х.ч. Хлороформ ч. Пластинки "Силуфол". Гипосульфит натрия ч.д.а.
Хлорид натрия
ч.д.а.
Едкий натр, 0,05 н раствор. Этилацетат
х.ч. Гексан
х.ч. Стандартный
раствор M SO (100 мкг/мл)
хранится в холодильнике в
2 2
течение недели.
Приборы и посуда. Газожидкостный
хроматограф "Хром-4" или другой с ПИД. Аппарат для встряхивания проб.
Воронки химические и делительные (ВД-3-250). Испаритель ротационный ИР-1М.
Камера для хроматографирования (любой сосуд с
притертой крышкой). Автоматические пипетки с дискретными объемами 5; 10; 20;
50; 100; 200; 500; 1000 мкл. Конические колбы на 100
и 250 мл. Микрошприц на 10 и 100 мкл.
Стаканчики. Пробирки вместимостью 5 мл с конусообразным дном.
Хранение проб. Пробы хранятся в течение 1
- 2 дней.
Ход анализа. Экстракция и очистка
экстракта. Измельченную пробу моркови (50 г) помещают в коническую колбу на 250
мл, заливают 150 мл смеси этилового спирта с водой (1:1) и экстрагируют на
аппарате для встряхивания в течение 1 ч. Полученный экстракт фильтруют через
бумажный фильтр в колбу на 200 мл. Пробу и фильтр дважды промывают смесью
спирта с водой. Далее подкисляют раствор до pH 3,0,
промывают 0,5 мл 30-процентного раствора пероксида водорода и помещают в
термостат при температуре 50 °C на 15 - 17 ч, после чего к инкубационной смеси
добавляют 15 г хлорида натрия и 100 мл гексана. После
встряхивания и разделения в делительной воронке гексановый
слой отбрасывают. Препарат экстрагируют трижды хлороформом порциями по 10 мл.
Объединенный хлороформный слой промывают 100 мл 0,05 н водного раствора едкого
натра, содержащего 10 г хлорида натрия. Органическую фракцию фильтруют над
безводным сульфатом натрия и затем выпаривают досуха на ротационном испарителе.
Остаток растворяют в 20 - 30 мг
хлороформа и добавляют 20 мг М-хлорнадбензойной
кислоты. Далее раствор помещают на 30 мин. в термостат при 30 °C. После этого
его промывают 30 мл 3-процентного водного раствора гипосульфита натрия,
содержащего 3 г хлорида натрия. Водный слой раствора отбрасывают. Органический
слой фильтруют над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют его до
объема 0,1 - 0,2 мл.
Экстракт
количественно переносят на
пластинку "Силуфол"
размером
2 х 15 см (в пять точек по горизонтали на высоте 15 мм
от края пластинки).
Пробу хроматографируют дважды:
в начале в системе этилацетат-гексан (3:1),
а затем, после
подсушивания, в системе
гексан-ацетон
(2:1). Величина R
f
препарата при
этих условиях хроматографирования
составляет 0,20 - 0,25.
Основываясь на
этом, с пластинки счищают полосу силикагеля с R
0,18 - 0,40
f
на воронку
с бумажным фильтром,
затем смывают ацетоном
препарат в
конусообразную пробирку
вместимостью 5 мл.
Растворитель в пробирке
выпаривают досуха,
и далее автоматической пипеткой
приливают необходимое
количество
ацетона в зависимости от предполагаемого содержания гербицида.
Условия хроматографирования.
Хроматограф "Хром-4" с ПИД. Стеклянная колонка длиной 1,2 м с
внутренним диаметром 3 мм, заполненная 5% OV-210 на хромосорбе
N-AW-HCMS (80 - 100 меш). Температура (°C): испарителя - 280, колонки - 270.
Скорость потока азота 30 мл/мин., водорода - 34, воздуха - 300 мл/мин. Рабочая
шкала электрометра 1:10. Время удерживания 9 мин. 36 с. В колонку хроматографа
вводит аликвоту ацетонового раствора (5 - 10 мкл).
Обработка результатов анализа.
Количественное определение проводят путем сравнения рассчитываемого пика с
пиком, полученным при введении известного количества стандартного вещества, при
условии, что пики близки по величине и определение ведется в диапазоне
линейности детектора. Количественную оценку пиков хроматограммы
проводят по площади пика.
Количество препарата в пробе (X, мг/кг)
рассчитывают по формуле:
C
V S
ст 2
X = ------,
S V P
ст 1
где:
C
- количество препарата
во введенном в хроматограф стандартном
ст
растворе, мг;
S и S
- площади пика рабочей пробы и стандартного раствора препарата,
ст
введенных в
хроматограф, кв. мм;
V -
объем экстракта, введенный в хроматограф, мл;
1
V -
общий объем экстракта после упаривания, мл;
2
P - масса анализируемой пробы, кг.
Требования безопасности. Необходимо
соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими
растворителями и токсичными веществами.