Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
22 мая 1985 г. N 3890-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПРЕПАРАТА 320-К
В ЗЕРНЕ И ВОДЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия временных методических
указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками
Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Марциновского
Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика препарата
Препарат 320-К - новый отечественный гаметоцид для стерилизации пыльцы зерновых культур и
подсолнечника. Действующее начало препарата - калиевая соль
цис-2-метил-3-циклогексенкарбоновой кислоты.
CH
│ 3
/ \
COOK C
H O K.
/
\ / 8
11 2
││ │
││ │
Мол. масса 178,264.
\
/
\ /
В
чистом виде соль
320-К - твердое
вещество белого цвета, весьма
гигроскопичное,
хорошо растворимое в
воде, практически нерастворимое в
органических растворителях.
ЛД
для белых беспородных мышей - 1,417
г/кг, введение препарата в
50
желудок белых крыс на
уровне 1000 мг/кг массы тела не
вызывало гибели
животных.
ПДК в зерне и воде еще не установлено.
2. Методика
определения препарата 320-К в зерне и воде
тонкослойной хроматографией
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на превращении соли 320-К в
кислоту 320 (цис-2-метил-3-циклогексенкарбоновую) и экстракции последней
ацетоном, обработкой измельченного зерна смесью 0,1 н HCl
и ацетона. После упаривания ацетона кислоту 320 извлекают из водного слоя
бензолом. Конечное определение проводят хроматографией на пластинках Silufol UV 254.
2.1.2 Метрологическая характеристика
метода
Диапазон измеряемых концентраций
0,1 - 0,5 мг/кг в зерне
0,002 - 0,02 мг/кг в воде
Предел обнаружения - 2 - 10 мкг в хроматографируемой пробе.
Предел обнаружения - 0,1 мг/кг в зерне и
0,002 мг/кг в воде.
_
Среднее
значение определения стандартных
количеств препарата с при
n = 15
85,0% в зерне
80,0% в воде
Стандартное отклонение S при n = 15
+/- 10,0% для зерна
+/- 8,0% для воды
Относительное стандартное S
2
+/- 12,9 для зерна
+/- 10,3 для воды
Доверительный интервал среднего при р = 0,95 и n = 5
85,0 +/- 12,9% для зерна
80,0 +/- 10,3% для воды
Размах варьирования R
70 - 100% для зерна
70 - 95% для воды
2.1.3. Избирательность метода
Метод селективен.
Хлорорганические и фосфорорганические пестициды определению не мешают.
2.2. Реактивы и
материалы
Ацетон, ГОСТ 2603-71, осч
Бензол, ГОСТ 5955-75, осч
Диоксан, ГОСТ 10455-63, хч
Хлороформ, ТУ 6-09-4263-76, хч
Спирт этиловый 96-процентный, ТУ
6-09-1710-77
Муравьиная кислота, ГОСТ 5848-73, хч
Уксусная кислота, ГОСТ 18290-72, хч
Натрий углекислый кислый, ГОСТ 4283-79, хч
Натрий фосфорнокислый двузамещенный,
ГОСТ 11773-76, хч
Магний сернокислый, ГОСТ 4523-77, хч
Соляная кислота, ГОСТ 3118-77, хч
Цис-2-метил-3-циклогексенкарбоновая
кислота (320)
Индикаторная универсальная бумага, ТУ
6-09-1181-71
Бромфеноловый синий индикатор, ТУ 6-09-1058-76, чда
Метиловый красный индикатор, ТУ
6-09-4070-75, чда
Стандартные растворы кислоты 320 в
бензоле с содержанием 100 мкг (раствор А) и 10 мкг (раствор Б)
Спиртовой раствор бромфенолового
синего и метилового красного (раствор В)
Водный 0,1 М раствор натрия фосфорнокисл. двузамещен.
(раствор Г)
Пластинки Silufol
UV 254 15 х 15 см
0,1 н раствор соляной кислоты
5-процентный раствор бикарбоната натрия
2.3. Приборы,
аппаратура и посуда
Гомогенизатор тканей типа РТ-1
Магнитная мешалка типа ММ
2А (Чехословакия)
Ротационный вакуумный испаритель типа
Unipan-350 (Польша)
Весы аналитические типа ВЛА-200М
Микрошприц на 10 мкл типа МШ-10, ТУ 2-833-106
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, емкостью 100
мл
Колбы плоскодонные с притертыми пробками,
ГОСТ 10394-72, на 100 мл
Колбы круглодонные с притертыми пробками,
ГОСТ 10394-72, емкостью 100 мл и 20 мл
Воронки Бюхнера,
ГОСТ 9147-81
Пипетки, ГОСТ 1770-74, на 1 мл и 10 мл
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл,
50 мл и 10 мл
Камеры хроматографические,
ГОСТ 10565-75
Воронки делительные, ГОСТ 10054-75, на
250 мл и 1500 мл
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74
Пробирки калиброванные, ГОСТ 10394-72, на
5 мл
2.4. Подготовка к
определению
2.4.1. Приготовление стандартных
растворов кислоты 320 в бензоле
Для приготовления стандартного раствора А в мерной колбе емкостью 100 мл взвешивают 100 мг кислоты
320 с точностью +/- 0,0002 г. Содержимое колбы растворяют в 30 мл бензола и
затем доводят объем раствора до метки тем же растворителем. Для приготовления
раствора Б из раствора А пипеткой отбирают 10 мл,
переносят в мерную колбу емкостью 100 мл и добавлением бензола доводят объем
раствора до метки.
Растворы А и Б
при хранении при комнатной температуре стабильны в течение года.
2.4.2. Приготовление растворов для
проявления хроматограмм
Для приготовления раствора В в мерной колбе на 100 мл
взвешивают 20 мг бромфенолового синего и 60 мг
метилового красного, растворяют красители в 50 мл спирта и прибавлением спирта
доводят объем раствора до метки.
Раствор красителей при хранении в течение
месяца в холодильнике стабилен.
Для
приготовления раствора Г в
мерной колбе на 100 мл растворяют:
г Na HPO х 12 H O в 50 мл воды и доводят объем
раствора до 100 мл.
2
4 2
Раствор Г стабилен при хранении при
комнатной температуре в течение года.
Раствор для проявления хроматограмм опрыскиванием готовят непосредственно перед
употреблением смешиванием равных объемов растворов В и
Г.
2.5. Отбор проб
Отбор проб для анализа проводят в
соответствии с утвержденными Министерством здравоохранения СССР
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,
продуктов питания и объектов внешней среды для определения микроколичеств
пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
Из партии зерна, подлежащей анализу,
отбирают 11 г (при необходимости зерно предварительно подсушивают), измельчают
с помощью гомогенизатора тканей и отбирают навеску массой 10 г.
2.6. Проведение
определения
Навеску
измельченного зерна (10 г)
помещают в коническую плоскодонную
колбу емкостью
100 мл, добавляют 10 мл 0,1 н HCl и 20 мл
ацетона. Кислоту
320 экстрагируют
перемешиванием в течение
часа на магнитной мешалке.
Экстракт отделяют
от зерна фильтрованием
на воронке Бюхнера с
бумажным
фильтром,
собирая в круглодонную колбу емкостью 100 мл. Экстракцию ацетоном
(порциями по
20 мл) повторяют еще два раза. Из
объединенного экстракта с
помощью ротационного вакуумного испарителя упаривают ацетон (на
поверхности
водного остатка
появляются жирные пятна).
Водный остаток переносят в
делительную воронку
емкостью 250 мл, колбу дважды смывают подкисленной до
pH = 3 водой (порциями по 5 мл) и дважды бензолом (порциями
по 5 мл). Сливы
также переносят в делительную воронку. Далее водный
слой отделяют и трижды
экстрагируют
бензолом (объем бензола каждый раз равен объему водного слоя).
Объединенный бензольный экстракт
энергично перемешивают 10
минут на
магнитной
мешалке с 5-процентным раствором NaHCO ,
прибавляя последний
в
3
количестве,
необходимом для того,
чтобы рН смеси
был 9 - 10. После
обработки
водный слой отделяют на делительной воронке, а бензольный
слой
промывают 3 раза
водой (объем воды равен 1/4 объема бензольного слоя).
Воду
от промывки
объединяют с водным слоем. Суммарный водный слой подкисляют 0,1
н HCl до рН 3 и трехкратно экстрагируют бензолом (объем
бензола каждый раз
равен объему водного слоя). Объединенный бензольный экстракт
сушат над
прокаленным MgSO , далее сушитель
отфильтровывают, промывают сухим
4
бензолом, который
после промывки объединяют
с бензольным экстрактом.
Полученный бензольный раствор
упаривают сначала с помощью ротационного
вакуумного испарителя, а затем струей воздуха до объема
0,5 мл и с помощью
капилляра
количественно наносят на пластинку Silufol UV 254.
Для обнаружения препарата 320-К в воде
пробу воды - 1 литр помещают в делительную воронку емкостью 1500 мл, воду
подкисляют конц. HCl до рН
3 и экстрагируют кислоту 320 бензолом трижды порциями по 100 мл. Бензольный экстракт сушат над прокаленным сульфатом магния,
фильтруют порциями через бумажный фильтр в круглодонную колбу емкостью 20 мл.
Далее поступают, как описано выше для зерна.
Условия хроматографирования.
Сконцентрированный до 0,2 - 0,5 мл
экстракт с помощью стеклянного капилляра количественно с помощью бензола
переносят на пластинку Silufol UV 254 размером 15 x
15 см. Справа и слева на пластинку наносят серию стандартных растворов кислоты
320 с содержанием последней 1, 2, 3, 4 и 5 мкг. Серию стандартных растворов
кислоты 320 получают следующим образом: в градуированные пробирки на 5 мл
пипеткой последовательно помещают 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 и 0,5 мл стандартного
раствора Б, что соответствует 1, 2, 3, 4 и 5 мкг
кислоты 320. В последних трех пробирках концентрируют раствор до 0,2 - 0,3 мл
струей воздуха. Затем из каждой пробирки капилляром количественно с помощью
бензола переносят стандарты на хроматографическую
пластинку.
Хроматограмму развивают
в системе бензол:диоксан:хлороформ:муравьиная
кислота (5:1:2:0,02) или
в системе бензол:диоксан:хлороформ:уксусная
кислота
(10:2:5:0,02). Хроматограмму сушат на воздухе, а
затем обрабатывают
опрыскиванием из
пульверизатора проявителем, приготовленным непосредственно
перед обработкой
смешением равных объемов
растворов В и Г. Кислота 320
проявляется на хроматограмме в виде
красного пятна на зеленом фоне, R в
f
первой системе -
0,39 +/- 0,1, а во второй - 0,64 +/- 0,4.
2.7. Обработка
результатов анализа
Количественное определение препарата
320-К проводят методом соотношения со стандартами по площади и плотности пятна
кислоты 320.
Содержание препарата 320-К в мг/кг или в
мг/л вычисляют по формуле:
А х V х 178,264
Х = ----------------,
Р х V х 140,184
а
где:
А
- количество кислоты
320, найденное в
пробе путем сравнения со
стандартами,
мкг;
Р - навеска зерна
в г или объем анализируемой воды в мл;
178,264 - мол. вес препарата 320-К;
140,184 - мол. вес кислоты 320;
V - конечный объем раствора, мл;
V -
объем аликвоты, взятой для хроматографирования, мл.
а
3. Требования
безопасности
Необходимо соблюдать правила
безопасности, принятые для работы с легко воспламеняющимися жидкостями и
концентрированными кислотами.
4. Настоящая Методика разработана
сотрудниками Института биоорганической химии им. Шемякина АН СССР Егоровым И.В.
и Граменицкой В.Н.
5. Методические указания апробированы во
ВНИИХСЗР (Новикова К.Ф.) и в институте органической химии им. Зелинского
(Громова Г.П.).