Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
12 апреля 1985 г. N 3254-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ
ХРОМАТОГРАФИИ АНАЛОГА ЮВЕНИЛЬНОГО ГОРМОНА П-ХЛОРФЕНИЛОВОГО
ЭФИРА ГЕРАНИОЛА В ЗЕРНЕ ПШЕНИЦЫ, ПОЧВЕ, ВОДЕ
И ЗЕЛЕНЫХ ЛИСТЬЯХ РАСТЕНИЙ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Срок действия временных методических
указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками
Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Марциновского
Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика препарата
п-Хлорфениловый
эфир гераниола-1-(4-хлорфенокси)-3,7-диметил-2,6-октадиен.
--
// \\
CH -CH=CH -CH -CH -C=CH-CH -O-\ __ /-Cl C H
ClO
3 │ 2 2 2 │ 2
-- 16 21
CH CH
3 3 М.м. 264,5.
20
Желтоватая
жидкость со слабым
запахом, п = 1,5291,
температура
Д
кипения при
1 мм рт. ст. 155 °С,
плохо растворим в
воде, растворим в
органических растворителях, стабилен в
нейтральной среде. ЛД для
50
крыс -
более 5000 мг/кг.
Рекомендуется использовать для
борьбы с
вредителями
овощных и оранжерейных культур, зерна.
2. Методика
определения п-хлорфенилового эфира гераниола
в зерне пшеницы, почве, воде и зеленых листьях
растений
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении п-хлорфенилового эфира гераниола
органическим растворителем, очистке экстрактов методом препаративной
хроматографии на окиси алюминия, идентификации методом тонкослойной
хроматографии и количественном определении методом газожидкостной хроматографии
с пламенно-ионизационным детектором на неподвижных фазах SE-30 и XE-60.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Диапазон определяемых концентраций 0,002
- 5,0 мг/кг. В таблицах 1 и 2 приведены средние значения определений, стандартное
отклонение и доверительный интервал для различных концентраций.
Таблица 1
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТСХ МЕТОДА
ОБНАРУЖЕНИЯ П-ХЛОРФЕНИЛОВОГО ЭФИРА ГЕРАНИОЛА
В ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ (ДЛЯ n = 4)
┌────────┬──────────────┬─────────┬───────────┬─────────────┬─────────────┐
│Анализи-│ Диапазон
│Размах │ Среднее
│Относительное│Доверительный│
│руемый │ задаваемых
│варьиро- │ значение │
стандартное │интервал в % │
│объект │концентраций, │вания в %│определения│ отклонение │при Р = 0,95 │
│ │ мг/кг
│ │ в %
│ в
% │ │
├────────┼──────────────┼─────────┼───────────┼─────────────┼─────────────┤
│Зерно │0,10 - 2,87 │83 - 91 │87,1 │1,2 │3,2 │
│ │ -3│ │ │ │ │
│Вода │(2 - 5) х 10 │72 - 99 │88,2 │5,2 │14,0 │
│Почва │0,05 - 1,00 │75 - 96 │86,4 │5,2 │14,0 │
│Листья │0,24 - 5,00 │68 - 86 │74,3 │8,5 │13,4 │
└────────┴──────────────┴─────────┴───────────┴─────────────┴─────────────┘
Таблица 2
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГЖХ МЕТОДА
КОЛИЧЕСТВЕННОГО
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛОВОГО П-ХЛОРФЕНИЛОВОГО ЭФИРА
ГЕРАНИОЛА
В ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
┌───────┬────────────┬────────────┬─────────────┬─────────────┬───────────┐
│Объект
│ Задано, │
Число │ Обнаружено │ Стандартное │ Доверит. │
│ │
мг/кг │параллельных│ в % при │отклонение, %│интервал, %│
│ │ │определений │ Р = 0,95 │ │ │
├───────┼────────────┼────────────┼─────────────┼─────────────┼───────────┤
│Зерно │2,876 │4 │71,6 +/- 4,4 │2,8 │4,4 │
│ │2,014 │3 │73,9 +/- 3,8 │1,6 │3,8 │
│ │0,096 │3 │71,5 +/- 15,2│6,1 │15,2 │
│ │ -3│ │ │ │ │
│Вода │5,03 х 10 │3 │93,4 +/- 12,8│5,2 │12,8 │
│ │ -3│ │ │ │ │
│ │2,02 х 10 │4 │68,7 +/- 4,8 │3,0 │4,8 │
│Почва │1,00 │5 │75,3 +/- 3,6 │2,9 │3,6 │
│ │0,048 │3 │77,2 +/- 5,9 │2,4 │5,9 │
│Листья
│5,00 │4 │76,8 +/- 7,4 │4,7 │7,4 │
│ │0,24 │4 │76,2 +/- 12,7│8,0 │12,7 │
└───────┴────────────┴────────────┴─────────────┴─────────────┴───────────┘
2.1.3. Избирательность метода в
присутствии пестицидов, близких по химическому строению и области применения
Близким по строению и области применения
является р-бромфениловый эфир гераниола,
однако в системах гексан - этилацетат (9:1) и гексан - ацетон (4:1) они четко разделяются.
Фосфорорганические пестициды не мешают определению п-хлорфенилового
эфира гераниола.
2.2. Реактивы и
материалы
Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.
Циклогексан, ч., ТУ 6-09-4357-77.
Диэтиловый эфир, для наркоза.
Натрий сернокислый б/в, х.ч., ГОСТ 4166-81.
Алюминия окись для хроматографии II ст.
активности, ТУ 6-09-3916-83.
Алюминия окись II ст. акт. по Брокману,
пр-во ВНР "Реахим".
Йод кристаллический.
Хроматон N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30.
Хроматон N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм) с 5% XE-60.
Стандартный раствор п-хлорфенилового
эфира гераниола в гексане -
100 мкг/мл и 10 мкг/мл.
2.3. Приборы и
посуда
Хроматограф серии "Цвет" с
пламенно-ионизационным детектором.
Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ
25-11-917-76.
Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75.
Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ
64-1-1081-73.
Колбы конические емк. 250 мл, ГОСТ
10394-72.
Колбы круглодонные емк. 500, 250, 100 мл,
ГОСТ 10394-72.
Фильтр Шотта N
3.
Воронка делительная емк. 2 л, ГОСТ
8613-75.
Воронки химические, ГОСТ 8613-75.
Пипетки 1 - 10 мл, ГОСТ 20292-74.
Микропипетки 0,1 - 0,2 мл, ГОСТ 1770-74.
Стеклянные пластины для ТСХ размером 8 х
16 мм.
Эксикатор для проявления пластин в парах
йода.
Сосуды для ТСХ объемом не менее 1 л с
крышками.
Сосуды для препаративной
ТСХ (кристаллизаторы с крышками).
Микрошприц емк. 10 мкл, МШ, ТУ 5Е.2.833.024.
2.4. Отбор проб и
подготовка к определению
2.4.1. Отбор проб
Отбор проб производят в соответствии с
Унифицированными правилами отбора сельскохозяйственной продукции, пищевых
продуктов и объектов окружающей среды, утвержденными Заместителем Главного
государственного санитарного врача СССР 21.08.1979, N 2051-79.
Для анализа используют средние пробы
измельченной и просеянной почвы массой 50 г, воды объемом 1 л, зерна пшеницы 50
г, зеленых листьев растений - 10 г.
2.5. Проведение
определения
2.5.1. Экстракция, очистка экстракта
Почва. 50 г почвы помещают в коническую
колбу, заливают 150 мл диэтилового эфира и
встряхивают 1 час. Раствор фильтруют через слой сульфата натрия б/в. Повторяют
экстракцию дважды с 70 мл растворителя в течение 15 минут. Объединенные
экстракты концентрируют на ротационном вакуумном испарителе до 1 - 2 мл при
температуре 30°. Остаток количественно переносят на пластину с незакрепленным
слоем окиси алюминия II ст. активности по Брокману.
Толщина слоя - 2 мм. Вещество элюируют циклогексаном
в сосуде для препаративной ТСХ, размещая пластину под
углом 7 - 10°. Зону, соответствующую п-хлорфениловому
эфиру (по сопоставлению со стандартом, который обнаруживают в аналогичных
условиях при проявлении в парах йода), количественно переносят на фильтр Шотта N 3 и промывают подогретым до 40 - 50° гексаном. Фильтрат (очищенный экстракт) при необходимости
концентрируют на ротационном испарителе и анализируют методами ТСХ и ГЖХ.
Вода. Пробу воды объемом 1 л помещают в
делительную воронку и трижды экстрагируют гексаном
порциями 150, 80 и 80 мл по 2 минуты. Органический слой отделяют, сушат
безводным сульфатом натрия, концентрируют при температуре не выше 40° и далее
очищают и анализируют, как описано выше.
Зерно. 50 г зерна помещают в коническую
колбу и экстрагируют гексаном трижды, используя
последовательно 70, 30 и 30 мл растворителя в течение 60, 3 и 3 минут.
Объединенный экстракт очищают и анализируют, как описано выше.
Зеленые листья растений. Навеску 10 г
измельченного растительного материала помещают в коническую колбу и трижды
экстрагируют гексаном порциями по 70 мл в течение 40,
10 и 10 минут. Объединенный растительный экстракт очищают и анализируют, как
описано выше.
2.5.2. Идентификация и количественное
определение п-хлорфенилового эфира гераниола
2.5.2.1. Метод тонкослойной хроматографии
Для качественной идентификации п-хлорфенилового эфира гераниола в
воде,
почве, зерне
пшеницы и зеленых
листьях растений методом
ТСХ см.
"Методические указания
по определению остаточных
количеств некоторых
аналогов
ювенильного гормона: алтосида, алтозара и р-бромфенилового эфира
гераниола в растениях
картофеля и почве
методами тонкослойной и
газожидкостной хроматографии" (часть
XIII, 1983 г.). Нижний предел
обнаружения п-хлорфенилового
эфира гераниола методом ТСХ - 2 мкг или 0,002
мг/л для
воды, 0,04 мг/кг - для почвы и проб растительного происхождения.
В таблице 3 приведены
значения R п-хлорфенилового эфира гераниола в
f
некоторых
системах подвижных растворителей.
Таблица 3
ЗНАЧЕНИЯ R П-ХЛОРФЕНИЛОВОГО ЭФИРА ГЕРАНИОЛА
f
В НЕКОТОРЫХ СИСТЕМАХ (24
°С)
┌───────────────────────────────────┬────────────────────────────┐
│ Элюэнт │ R │
│ │ f │
│ ├────────────┬───────────────┤
│ │на пластинах│на пластинах из│
│ │ Силуфол │окиси алюминия │
├───────────────────────────────────┼────────────┼───────────────┤
│Циклогексан │0,10 │0,50 │
│Гексан - этилацетат, 4:1 │0,78 │- │
│Гексан - этилацетат, 9:1 │0,57 │- │
│Гексан - диэтиловый эфир,
9:1 │0,75 │0,90 │
└───────────────────────────────────┴────────────┴───────────────┘
2.5.2.2. Метод газожидкостной
хроматографии
Носитель - Хроматон
N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм).
Неподвижная фаза - 5% XE-60 либо 5%
SE-30.
Расход азота - 60 мл/мин. - 40 мл/мин.
Температура испарителя - 210 °С - 230 °С.
Температура колонки - 180 °С - 205 °С.
-11
Шкала электрометра - 2 х 10 А.
Линейный диапазон детектирования - 10 -
100 нг.
Минимально детектируемое количество - 10 нг.
Время удерживания - 7,58 мин. (на XE-60)
и 4,11 мин. (на SE-30).
Вводимый в колонку газового хроматографа
объем анализируемого экстракта - 1 - 2 мкл.
2.6. Обработка
результатов
Содержание п-хлорфенилового
эфира гераниола в пробе при определении методом ГЖХ
рассчитывают по формуле:
С х V х
h х V
ст 1 2
3
Х =
------------------,
V х h х
М
2 1
где:
Х - содержание вещества в пробе, мг/кг,
мг/л;
С - содержание вещества в стандарте, мкг/мл;
ст
V -
объем стандарта введенного в колонку газового хроматографа, мкл;
1
V -
объем анализируемой пробы,
введенной в колонку
газового
2
хроматографа, мкл;
V -
общий объем анализируемой пробы, мл;
3
h -
высота пика стандарта, мм;
1
h -
высота пика анализируемой пробы, мм;
2
М - масса пробы, взятой для анализа, г.
3. Требования
техники безопасности
В процессе работы по данным Методическим
указаниям нужно придерживаться правил техники безопасности, рекомендованных при
работе с органическими растворителями и токсическими веществами.
Методические указания подготовлены Албул И.А. - Всесоюзный научно-исследовательский институт
биологических методов защиты растений, г. Кишинев.