Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

12 апреля 1985 г. N 3253-85

 

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЛЕНТАГРАНА В ПРОДУКЦИИ, ПОЧВЕ И ВОДЕ

ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ

 

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

 

1. Краткая характеристика препаратов

 

1.1. Лентагран.

1.2. S-Октил-О-(6-хлоро-3-фенилпиридазинил-4)тиокарбонат.

1.3. Структурная формула:

 

          N---N

         //   \\

    C H -\ ___ /-Cl                                       C  H  ClN O

     6 5   --- \                                            19 23   2 2

                OCOSC H

                     8 17                                 Мол. масса 378,9.

 

1.4. Пиридат, СЛ 11344.

1.5. Химически чистое соединение - белое кристаллическое вещество с температурой плавления 27 °С. Растворимость в воде 90 мг/л. Хорошо растворяется в большинстве органических растворителей.

    Препарат  малотоксичен  для  теплокровных  животных. ЛД   для крыс 2000

                                                           50

мг/кг.

Выпускается в форме смачивающихся порошков, содержащих различные количества действующего вещества.

 

2. Методика определения лентаграна

 

2.1. Основные положения

 

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении лентаграна из растительных проб, почвы и воды органическим растворителем (ацетон, н-гексан), очистке экстрактов путем перераспределения между двумя несмешивающимися жидкостями. Количественное определение проводят хроматографией в тонком слое.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

 

Минимально детектируемое количество                           1 - 2 мкг

Нижний предел определения

Р - размах варьирования, %:

  в растениях                                                 70,0 - 90,0

  в почве                                                     80,0 - 95,0

  в воде                                                      81,0 - 100.

_

С - среднее значение определения, %:

  в растениях                                                 78,6

  в почве                                                     87,5

  в воде                                                      89,5.

S - стандартное отклонение:

  в растениях                                                 +/- 9,0

  в почве                                                     +/- 8,7

  в воде                                                      +/- 7,9.

Доверительный интервал среднего при альфа = 0,95 и n = 5%:

  для растений                                                78,6 +/- 9,0

  для почвы                                                   87,5 +/- 8,7

  для воды                                                    89,5 +/- 7,9.

 

2.1.3. Избирательность метода

Метод специфичен, другие соединения в данных условиях хроматографирования определению не мешают.

 

2.2. Реактивы и растворы

 

Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79.

Аммиак, ч.д.а., ГОСТ 3760-79.

Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-74.

Висмут азотнокислый, ч.д.а., ГОСТ 4110-75.

Калий йодистый, х.ч., ГОСТ 4232-74.

н-Гексан, ТУ 6-09-3375-78.

Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, ч.д.а., ГОСТ 4233-77.

Силикагель для хроматографирования ЛС 5/40 (ЧССР).

Кальций сернокислый, ч.д.а., ГОСТ 3210-77.

Серная кислота, х.ч., ГОСТ 4204-77.

Дистиллированная вода.

Стандартный раствор лентаграна в ацетоне с концентрацией 100 мкг/мл.

Серебро азотнокислое, ч., ГОСТ 1277-75.

Проявляющие реактивы

1. Реактив Драгендорфа в модификации А.С. Тищенко. Растворяют 1,5 г нитрата висмута и 7,5 г йодида калия в 100 мл 2-процентной серной кислоты.

2. 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, добавляют 7 мл аммиака и доводят до 100 мл ацетоном.

 

2.3. Приборы и посуда

 

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.

Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Прибор для облучения УФ-светом с лампой ПРК-4, ТУ 16-535-280-74.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74.

Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.

Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-75.

Воронки химические, ГОСТ 8613-81.

Колбы конические со шлифом и пробками на 250 - 500 мл, ГОСТ 10394-72.

Колбы круглодонные со шлифом на 100 - 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Делительные воронки на 250 - 500 мл, ГОСТ 8613-81.

Пипетки на 0,1 мл, ГОСТ 20292-74.

Цилиндры мерные на 50 - 100 мл, ГОСТ 1770-81.

 

2.4. Отбор проб

 

Отбор и хранение проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб", утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР, N 2051-79 от 21 августа 1979 года.

 

2.5. Подготовка к определению

 

2.5.1. Приготовление пластинок

Стеклянные пластинки размером 9 х 12 см тщательно моют. 3,5 г силикагеля смешивают в ступке с 1,5 г сернокислого кальция, добавляют 30 мл дистиллированной воды, хорошо перемешивают и равномерно наносят на 5 пластинок. Сушат их при комнатной температуре 17 - 18 часов, затем в сушильном шкафу 20 минут при температуре 170 - 180 °С и хранят в эксикаторе над слоем осушителя.

 

2.6. Проведение определения

 

Вода. 200 мл воды помещают в делительную воронку и добавляют 10 - 15 г хлористого натрия. Лентагран экстрагируют тремя порциями н-гексана по 50 мл каждый раз в течение 5 минут. Объединенный экстракт фильтруют над слоем безводного сернокислого натрия. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе до 0,2 - 0,3 мл при температуре воды в бане около 50 °С. Остаток удаляют в токе воздуха.

Почва. 100 г измельченной почвы помещают в коническую колбу с притертой пробкой, заливают 200 мл водного ацетона (1:1) или 80 мл ацетона. Экстракцию пиридата проводят путем энергичного встряхивания в течение одного часа. Раствор фильтруют и переносят в делительную воронку, добавляют 200 мл дистиллированной воды (в случае экстракции водным ацетоном) и экстрагируют лентагран тремя порциями гексана по 50 мл. Растворитель объединяют, сушат над безводным сернокислым натрием, концентрируют до 0,2 - 0,3 мл. Остаток удаляют в токе воздуха. Ацетоновый экстракт отгоняют на ротационном испарителе.

Зеленая масса кукурузы. 40 г измельченной зеленой массы кукурузы помещают в коническую колбу с притертой пробкой, заливают до покрытия поверхности н-гексаном или этилацетатом. Экстракцию проводят путем энергичного встряхивания в течение одного часа. Экстракт отфильтровывают через складчатый фильтр со слоем безводного сернокислого натрия. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе до объема 0,2 - 0,3 мл. Остаток удаляют в токе воздуха.

2.5.2. Очистка экстрактов

Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетонитрила, добавляют 100 мл воды и отфильтровывают через складчатый фильтр.

Лентагран экстрагируют 3 порциями н-гексана по 70 мл в течение 5 минут.

Экстракты объединяют, сушат над безводным сернокислым натрием и отгоняют на ротационном испарителе до 0,3 мл.

2.5.3. Идентификация и количественное определение лентаграна

Пробу, концентрированную до 0,3 мл, количественно переносят на пластину с сорбентом.

Параллельно наносят серию стандартных растворов с содержанием 3, 5, 10 мкг действующего вещества лентаграна.

При необходимости используют двумерную хроматографию, используя в качестве первой подвижной фазы хлороформ. Затем пластину помещают в камеру с системой подвижных растворителей н-гексан - ацетон 4:1 по объему.

    После  обработки  стеклянных  пластинок реактивом Драгендорфа лентагран

проявляется  в  виде  красных  пятен с величиной R  = 0,65 +/- 0,05. Нижний

                                                  f

предел обнаружения - 2 мкг.

После обработки хроматограмм азотнокислым серебром их помещают под источник УФ-света до четкого появления пятен препарата.

Содержание лентаграна в исследуемой пробе вычисляют по формуле:

 

                                     А

                                 Х = -,

                                     Р

 

где:

А - количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;

Р - навеска или объем воды, г, мл;

Х - содержание лентаграна в пробе, мг/кг, мг/л.

 

3. Техника безопасности

 

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.

 

4. Методика разработана Красных А.А., Чебышевой В.М. (ВНИИ защиты растений).