Утверждены
Минздравом СССР
31 июля 1984 г. N 3061-84
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БОТРАНА В ПОЧВЕ, ВОДЕ, РАСТИТЕЛЬНОЙ
ПРОДУКЦИИ МЕТОДАМИ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ
ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны
А.А. Красных, М.Ф. Зелениной, В.Ф. Логачевым, А.А.
Меланьиной (ВНИИЗР).
Ботран -
2,6-дихлор-4-нитроанилин.
Брутто-формула C H O N Cl .
6 4 2 2 2
Молекулярная масса
207,0. Общепринятое название - дихлоран. Химически
Чистое вещество
ботрана - кристаллы желтого цвета с т. пл. 192 - 194 °C.
Ботран практически нерастворим в
воде, растворим в большинстве органических
растворителей. Устойчив к
гидролизу и окислению,
не воспламеняется.
Выпускается в
виде 75-процентного смачивающегося
порошка. Ботран
обладает
хорошим
профилактическим действием против возбудителей болезней, вызываемых
грибами: ботридис, ризопус и склеротиния.
ДСД 0,03 мг/кг.
Принцип метода. Метод основан на
извлечении ботрана из исследуемой пробы органическим
растворителем (ацетон, хлороформ), очистке экстракта путем перераспределения
между двумя несмешивающимися жидкостями с последующим определением ТСХ или ГЖХ.
Метрологическая характеристика метода
приведена в таблице 48.
Таблица 48
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ БОТРАНА
┌──────────────────────────────────────────────┬─────────────────┐
│ Параметры │ Метод
│
│ ├─────────┬───────┤
│ │ ТСХ │ ГЖХ │
├──────────────────────────────────────────────┼─────────┼───────┤
│Минимально
детектируемое количество препарата │1 - 3 мкг│1 нг │
│Нижний
предел определения, мг/кг: │ │ │
│ в воде │0,01 │0,005 │
│ в почве │0,02 │0,001 │
│ в растениях │0,08 │0,004 │
│Среднее
значение определения (n = 15), %: │ │ │
│ в растениях │78,6 │82,5 │
│ в почве │88,0 │92,5 │
│ в воде │92,5 │92,5 │
│Стандартные
отклонения, %: │ │ │
│ в растениях │+/-
9,0 │+/- 5,0│
│ в почве │+/-
8,7 │+/- 3,3│
│ в воде │+/-
7,8 │+/- 7,9│
│Доверительный
интервал среднего │ │ │
│(p
= 0,95 и n = 5), %:
│ │ │
│ в растениях │+/- 5,6
│+/- 4,0│
│ в почве │+/-
8,7 │+/- 6,8│
│ в воде │+/-
4,5 │+/- 5,0│
└──────────────────────────────────────────────┴─────────┴───────┘
Избирательность метода. Метод специфичен
в присутствии ароматических аминов растительного происхождения. Другие
препараты, имеющие ароматическую аминогруппу (пирамин,
азулокс и др.), в данных условиях хроматографирования
определению не мешают.
Реактивы
и растворы. Ацетон
х.ч. н-Гексан х.ч. Хлороформ х.ч.
Ацетонитрил ч. Сульфат
натрия безводный ч.д.а. Нитрит
натрия х.ч.
Хлороводородная кислота
х.ч.
Этилацетат ч.д.а. Этанол
х.ч.
Пластинки
"Силуфол" УФ .
Азот особой чистоты. Хроматон N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм)
254
с 5%
SE-30. Хроматон N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм) с 5% XE-60.
Проявляющий
реагент -
1-процентный раствор 1-нафтиламина в этаноле.
Раствор хранят в
холодильнике не
дольше 15 дней. Стандартный раствор ботрана
(1 и 100 мкг в
1 мл ацетона) хранят в холодильнике не дольше 30 дней.
Приборы и посуда. Аппарат для
встряхивания. Испаритель ротационный. Воронки: делительные на 250 мл;
химические. Хроматографическая камера. Камера для
опрыскивания. Пульверизатор стеклянный. Колбы: конические нормального шлифа; остродонные; мерные на 100 мл. Микропипетки на 0,1 мл.
Камера для диазотирования. Газовый хроматограф
"Цвет-106" или другой марки с ДПР. Микрошприц
на 10 мкл. Колонка хроматографическая
стеклянная длиной 1 м с внутренним диаметром 3 мм. Баллоны газовые. Секундомер.
Холодильник.
Ход анализа. Экстракция. Анализируемую
пробу воды помещают в делительную воронку, препарат экстрагируют трижды
хлороформом порциями по 40 мл в течение 5 мин. Объединенный экстракт сушат над
безводным сульфатом натрия и концентрируют на ротационном испарителе до объема
0,3 мл при температуре воды в бане не выше 50 °C. Остаток удаляют в токе
воздуха.
Свежеотобранную пробу почвы (100 г)
заливают 70 мл ацетона. Ботран экстрагируют,
встряхивая в течение 1 ч. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр со слоем
безводного сульфата натрия, колбу и фильтр промывают тремя порциями того же
растворителя по 10 мл. Объединенный экстракт отгоняют на ротационном испарителе
до объема 0,2 - 0,3 мл. Остаток удаляют в токе воздуха.
Из 25 г измельченной
пробы растительного материала (зеленая масса, капуста, морковь, лук-репка) ботран экстрагируют 50 мл хлороформа или этилацетата путем
встряхивания в течение 1 ч. Измельченные клубни картофеля (25 г) заливают до
покрытия поверхности хлороформом и оставляют на ночь, экстракты
отфильтровывают, сушат над безводным сульфатом натрия и отгоняют до небольшого
объема на ротационном испарителе. Остаток
удаляют в токе воздуха.
Очистка экстракта. Сухой остаток из почвы
и растительного материала растворяют в 5 мл ацетонитрила,
добавляют 50 мл дистиллированной воды и отфильтровывают через плотный бумажный
фильтр. Из водно-ацетонитрильного раствора ботран
экстрагируют н-гексаном трижды порциями по 40 мл в
течение 3 мин. Экстракт объединяют, сушат над безводным сульфатом натрия и
отгоняют досуха на ротационном испарителе.
Условия
определения методом ГЖХ. Хроматограф "Цвет-106" с ДПР.
Сухой
остаток растворяют
в точно известном
количестве ацетона (5 - 10 мл). С
помощью микрошприца в
испаритель хроматографа вводят
аликвотную часть
исследуемого
раствора (2 - 4 мкл). Используют стеклянную колонку
длиной 1 м
с внутренним диаметром 3 мм,
заполненную хроматоном N-AW-DMCS (0,16 - 0,20
мм) с 5%
SE-30. Температура (°C): термостата колонки - 130, термостата
детектора - 190,
испарителя - 240. Скорость тока азота (газа-носителя) 60
-12
мл/мин. Шкала электрометра 20 x 10 А. Скорость движения ленты самописца
200 мм/ч. Время
удерживания 4 мин. 25 с.
Можно
использовать альтернативную колонку
длиной 1 м с внутренним
диаметром 3
мм, которую заполняют
хроматоном
N-AW-DMCS с 5%
XE-60.
Температура (°C):
термостата колонки - 150;
испарителя - 240; термостата
детектора -
210. Скорость тока
азота 60 мл/мин. Шкала
электрометра
-12
20 x 10 А.
Скорость движения ленты
самописца 200 мм/ч. Время
удерживания 6
мин. 30 с.
Условия определения методом ТСХ. Сухой
остаток растворяют в 0,2 - 0,3 мл ацетона (хлороформа) и переносят на хроматографическую пластинку. Стенки колбы обмывают
несколькими каплями того же растворителя, который переносят в центр пятна.
Справа наносят стандартные растворы препарата. Пластинки помещают в камеру с
системой растворителей гексан-ацетон в соотношении
5:1 по объему. После подъема фронта растворителей на высоту 10 см пластинку
вынимают из камеры, сушат на воздухе и помещают на 20 мин. в камеру
(эксикатор), насыщенную парами оксидов азота. Пары оксидов азота получают следующим
образом: на дно помещают стаканчик с 1 - 2 г нитрита натрия, осторожно
приливают 10 - 15 мл 20-процентной хлороводородной
кислоты и закрывают крышкой.
Пластинку
вынимают из камеры и обрабатывают
1-процентным раствором
альфа-нафтиламина в этаноле. Препарат проявляется в виде
ярко-красных пятен
на светлом
фоне с величиной
R 0,45 - 0,47. Количественное
определение
f
проводят путем
сравнения интенсивности окраски
и площади пятен проб и
стандартных растворов.
Обработка
результатов анализа. Содержание препарата (X, мг/кг, мг/л)
при определении
методом ГЖХ рассчитывают по формуле:
A H V
ст пр к
X = --------,
H V P
ст х
где:
A -
количество препарата в стандартном растворе, нг;
ст
H
- высота пика
соответственно стандартного и
анализируемого
пр
растворов, мм;
V -
объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл;
х
V -
объем конечного экстракта, в котором растворен сухой остаток, мл;
к
P - масса или объем пробы, г, мл.
Содержание ботрана
при определении методом ТСХ рассчитывают по формуле:
AS
2
X = ---,
PS
1
где:
A - содержание препарата в стандартном
растворе, мкг;
S
и S - площадь пятна соответственно стандартного
раствора и пробы,
1
2
кв. мм;
P - масса или объем анализируемой пробы, г, мл.
Требования безопасности. Следует
соблюдать все требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с
органическими растворителями.