Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
28 января 1980 г. N 2126-80
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ НЕОРОНА В МЕДЕ МЕТОДОМ ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим
средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского
и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Характеристика
препарата
Неорон - изопропиловый эфир 4,4-дибромбензойной кислоты.
COO(CH )
│ 3 2
---
│ ---
Br--// \\--C--// \\--Br
\ ___ /
│ \ ___ /
--- │
---
OH
Эмпирическая формула - C H O Br .
17 16 3 2
Молекулярная масса - 428,13.
Синонимы: А-2529, А-2443.
Технический
продукт - твердое вещество кремового цвета. Давление паров
-7
- 5,5 х 10 мм
рт. ст. при 20 °С. Плохо растворяется
в воде, хорошо в
большинстве
органических растворителей. Стабилен при высокой температуре,
нестоек в кислой
и щелочной средах.
Выпускается в форме
25- и
50-процентного концентрата
эмульсии. Неорон относится
к малотоксичным
соединениям. ЛД
его при введении
в желудок крысам составляет 1,5 -
5
50
г/кг.
Применяется неорон в качестве
инсекто-анарицида на
хлопчатнике.
Перспективен в борьбе с вредителями садов и варроатозом пчел.
2. Методика
определения неорона в меде
способом газовой хроматографии
2.1. Основные
положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на экстракции неорона ацетоном, перераспределении его в гексан, очистке последнего в статических условиях смесью
силикагеля и окиси алюминия и идентификации пестицида способом газовой
хроматографии с детектором постоянной скорости рекомбинации.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
Диапазон определяемых концентраций - 0,25
- 25 мкг неорона в анализируемой пробе.
Предел обнаружения - 0,025 мг/кг.
Полнота определения - 77,81%.
Стандартное отклонение - 10,4.
Относительное стандартное отклонение -
0,15.
Доверительный интервал - 6,24.
2.2. Реактивы и
материалы
Ацетон, чда,
ГОСТ 2603-63.
Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-73.
Бензол, чда,
ГОСТ 5955-68.
Натрий сернокислый безводный, ч, ГОСТ 4166-66.
Окись алюминия для хроматографии, ч, 2 степени активности, МРТУ 6-09-5296-68.
Силикагель КСК (или КСС) обрабатывают
методом, общепринятым для тонкослойной хроматографии. Продажный силикагель
заливают на 20 часов соляной кислотой (1:1), затем промывают водой и кипятят с
разведенной азотной кислотой (1:1) в течение 2 - 3 часов. Промывают горячей
водопроводной, а затем дистиллированной водой до нейтральной реакции и до
удаления следов хлоридов (промывные воды контролируются азотнокислым серебром).
Промытый силикагель сушат при 140 °С 6 часов, дробят и просеивают через сито 100 меш.
Вода дистиллированная.
Смесь экстрагентов
- бензол 3 части и гексан 1 часть.
Хроматон N-AW-DMCS с 5% SE-30 (или ДС-550).
Стандартный раствор неорона.
а) Отвешивают 10 мг неорона
в мерную колбу на 100 мл. Неорон растворяют в гексане и доводят его до метки. Получается основной
стандартный раствор с содержанием неорона 100 мкг в 1
мл.
б) Из основного раствора готовят рабочий
стандартный раствор неорона, содержащий 1 мкг
препарата в 1 мл. Для этого в мерную пробирку на 10 мл с притертой пробкой
отмеривают 0,1 мл основного стандартного раствора и доводят объем жидкости до
10 мл.
2.3. Приборы и
посуда
Газовый хроматограф "Цвет-106"
с детектором постоянной скорости рекомбинации. (Допускается использование
другого типа хроматографа с детектором по захвату электронов.)
Вытяжной шкаф.
Воронки делительные - на 100 и 200 мл.
Стаканы химические - на 50 мл.
Воронки химические - диаметр 5 и 3 см.
Цилиндры мерные - на 50 и 10 мл.
Пробирки мерные - цена деления 0,1 мл.
2.4. Ход анализа
Отбирают среднюю пробу меда в
соответствии с имеющимися инструкциями. 10 г меда растворяют в 10 мл
дистиллированной воды. Раствор переносят в делительную воронку. Стакан
ополаскивают 30 мл ацетона и сливают его в ту же делительную воронку.
Содержимое перемешивают 3 минуты. После разделения жидкости нижний слой (водный
раствор сахаров) отбрасывают. Верхний слой (ацетоновый экстракт) переносят в
другую делительную воронку и прибавляют 70 мл дистиллированной воды. Неорон реэкстрагируют из
водно-ацетонового раствора 2 раза гексаном, используя
каждый раз по 10 мл экстрагента. Для этого смесь
перемешивают в делительной воронке каждый раз по 3 минуты. Гексан
(последовательными порциями) фильтруют через воронку со слоем безводного
сернокислого натрия в выпаривательную чашку. Воронку
заправляют следующим образом: в суживающуюся часть воронки диаметром 5 см
вводят тампон из белой ваты (50 мг) и насыпают слой безводного сернокислого
натрия - 1 - 1,5 см. Перед использованием воронку промывают 5 мл гексана, который отбрасывают. После окончания фильтрации
исследуемого экстракта воронку промывают 5 мл гексана,
который сливают в выпаривательную чашку.
В выпаривательную
чашку с гексаном добавляют по 200 мг силикагеля и
окиси алюминия. После этого гексан выпаривают под
тягой вытяжного шкафа при комнатной температуре. Пестициды вымывают из сухого
остатка смесью бензола с гексаном - 3:1. Сначала в
чашку приливают 3 мл смеси и перемешивают содержимое стеклянной палочкой 1
минуту. Надосадочную жидкость отфильтровывают через
воронку со слоем безводного сернокислого натрия в мерную пробирку. (Воронка
диаметром 3 см. В суживающуюся часть воронки вводят тампон из белой ваты - 30
мг и насыпают слой безводного сернокислого натрия - 0,75 см.) Осадок в чашке и
фильтр промывают еще 2 раза, используя каждый раз по 2 мл смеси бензол - гексан. Очищенный таким образом экстракт используют для
газохроматографического анализа. При необходимости полученный экстракт можно
сконцентрировать до объема 2 мл и вводить в хроматограф до 10 мкл жидкости.
2.5. Условия хроматографирования
Идентификацию неорона
в экстракте проводят на газовом хроматографе "Цвет 106" с детектором
постоянной скорости рекомбинации. Допускается использование других приборов с
различными вариантами электронно-захватного детектора. Подготовка прибора к
работе производится в соответствии с его техническими требованиями. В качестве
газа-носителя и на продувку детектора используют азот особой чистоты.
Расход газа:
на колонку - 40 мл/мин.
на продувку детектора - 80 мл/мин.
Режим работы прибора: температура
испарителя - 230 °С, температура колонки - 220 °С,
температура детектора - 250 °С.
В испаритель хроматографа вводят до 10 мкл стандартного раствора или очищенного экстракта. Время
удерживания неорона на колонке - 9 - 10 минут.
Линейный динамический диапазон выдерживается в пределах от 0,5 до 10 нг препарата во введенной в испаритель пробе.
2.6. Обработка
результатов анализа
Количественное определение неорона производится путем сравнения высоты пиков опытной
пробы и стандартного раствора по следующей формуле:
V х Ст
х H х 100
пр пр
X =
--------------------,
V х H
х M х K
вв ст пр
где:
X - количество пестицида в пробе в мг на 1
кг;
V -
объем экстракта в мл;
пр
Ст
- количество пестицида в нг, введенное в испаритель хроматографа со
стандартным
раствором;
H -
высота пика стандартного образца (в см);
ст
V -
количество экстракта, введенного в хроматограф (в мкл);
вв
H -
высота пика испытуемой пробы (в см);
пр
M -
масса пробы, взятой для экстракции (в г);
пр
100
--- - коэффициент для
внесения поправки на
потери пестицида при
K
экстракции и
в процессе подготовки
пробы к исследованиям, где
K -
определяемость неорона в % -
77,8%.
3. Требования
безопасности
Соблюдаются правила по технике
безопасности в химических лабораториях.
Настоящие
Методические указания разработаны О.А. Малининым и В.И. Ярошенко (Лаборатория
фармакологии с токсикологией УНИИЭВ. г. Харьков. Зав. отделом - Академик ВАСХНИЛ И.Н. Гладенко).