Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
19 октября 1979 г. N 2097-79
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДУРСБАНА
В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ, ПОЧВЕ И ВОДЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ
И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Настоящие Методические указания
предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и
научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных,
агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и
лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных
количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней
среде.
Методические указания апробированы и
рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по
химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при
МСХ СССР.
Методические указания согласованы и
одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы
ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского
и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении
Минздрава СССР.
1. Краткая
характеристика препарата
Дурсбан.
О,О-диэтил-О-(3,5,6-трихлорпиридил)-тиофосфат.
Cl Cl
\// \/
S
│ ││
||
│ ││
(C H O) P-O-\\ /\ C H O NCl SP
2 5
2 N Cl 9 11 3 3
Мол. масса 350,59.
Дауко 179, ЕНТ
27311, хлорпирифос.
Чистое
вещество дурсбана -
белые кристаллы со
слабым запахом
-5
меркаптана. Давление пара 1,9 х 10 мм рт. ст. при 25 °С. Растворимость в
воде 0,0002
г в 100
мл. Хорошо растворим
в большинстве органических
растворителей.
Инсектицид стабилен длительный период при
комнатной температуре в нейтральной и слабокислой среде. Скорость химического
распада увеличивается пропорционально повышению температуры и pH.
Устойчивость к воздействию УФ-света снижается при повышении влажности. Дурсбан 40% э.к. рекомендуется для испытаний на хлопчатнике против
хлопковой совки, карадрины и сосущих вредителей (1,5
- 2,0 кг/га), в борьбе с колорадским жуком на картофеле (1,2 - 2,0 кг/га), на
плодовых культурах против яблонной плодожорки, клещей и тлей в концентрации
0,2%, на свекле в борьбе с обыкновенным свекловичным долгоносиком в дозировке
1,5 - 2,0 кг/га.
Гранулированный дурсбан
представляет интерес в борьбе с подгрызающими совками на табаке, хлопчатнике, а
также с проволочниками на кукурузе, картофеле.
Дурсбан высокотоксичен для
теплокровных. ЛД для крыс при оральном
50
введении - 135 - 163 мг/кг.
ПДК и ДОК дурсбана
в продуктах питания, воде и почве еще не установлены.
2. Методика
определения дурсбана
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на экстракции дурсбана из проб смесью ацетона с 0,05 н водным раствором
хлорида кальция (1:1), очистке перераспределением в н-гексан
и хроматографическом (ТСХ и ГЖХ) определении.
Хроматографическое в тонком слое определение проводится на пластинках со слоем
силикагеля марки КСК или на "Силуфоле-UV 254". Хроматографируют в
системе н-гексан - ацетон (9:1), проявляют пластинки
2,6-дибром-N-хлорхинонимином или другими пригодными
для фосфорорганических инсектицидов проявителями.
Для газохроматографического определения
используют детекторы ДТИ, по захвату электронов (ДЭЗ) или постоянной скорости
рекомбинации (ДПР), колонку стеклянную с 5% SE-30 на хроматоне
N-AW-ДМСS длиной 1 м.
2.1.2. Метрологическая характеристика
метода
ТСХ ГЖХ
Минимально
детектируемое количество 0,5 - 3
мкг 1 нг
Нижний предел
определения 0,1 - 0,5
мг/кг 0,005 - 0,01 мг/кг
0,1
мг/л 0,002 мг/л
Р - размах варьирования, % +/- 4,0 +/- 4,0
_
с - среднее значение определения, % 96,4% 96,4%
S - стандартное
отклонение, % 3,3 3,3
Доверительный
интервал среднего при 96 +/- 4 96 +/- 4
р = 0,95 и n = 5, %
2.1.3. Избирательность метода
Другие ФОП не мешают определению.
2.2. Реактивы и растворы
Ацетон, ч., ГОСТ 2603-63.
Гексан, х.ч., МРТУ 6-09-2937-66.
Кальций хлористый, х.ч.,
ГОСТ 4161-67.
Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-66.
Уголь активированный марки КАД или ОУ-А.
Силикагель КСК с флуоресцирующей добавкой
или пластинки "Силуфол-UV
254".
Окись алюминия для хроматографии, МРТУ
6-09-5296-68-4.
5% SE-30 на хроматоне
N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20).
Проявляющие реактивы:
1. 0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане.
2. 1-процентный раствор 4-(р-нитробензил)-пиридина в ацетоне;
10-процентный раствор тетраэтиленпентамина
в ацетоне.
3. Бромфеноловый
синий (0,03 г бромфенолового синего растворяют в 10
мл ацетона, затем смесь разбавляют до 100 мл 0,5-процентным водно-ацетоновым
раствором азотнокислого серебра (1 ч. воды : 3 ч.
ацетона)); 5-процентный раствор уксусной кислоты.
Азот особой чистоты.
Стандартные растворы дурсбана:
0,1 - 1,0 мкг/мл в гексане.
2% полиэтиленгликольсукцинат
на хроматоне N-AW-ДМСS (0,16 - 0,2 мм (для
альтернативной колонки)).
Водород.
2.3. Приборы и посуда
Хроматограф Цвет-106 или аналогичный
прибор с детектором термоионным или по захвату электронов (постоянной скорости
рекомбинации).
Аппарат для встряхивания.
Ротационный вакуумный испаритель или
другой прибор для отгонки растворителей под вакуумом.
Хроматоскоп (хемоскоп)
с излучением 250 - 280 нм.
Колбы конические со шлифами на 250 - 500
мл.
Колбы круглодонные на 100 - 500 мл.
Делительные воронки на 0,5 - 1,0 л.
Колбы мерные на 100 мл.
Колонки для адсорбционной хроматографии
длиной 30 см, внутренним диаметром 15 мм.
Хроматографическая камера.
Камера для опрыскивания хроматограмм.
Пульверизаторы.
Пипетки на 0,1 мл, 1 мл, 5 мл, 10 мл.
Почвенное сито.
Микрошприц на 10 мкл.
Центрифуга с центрифужными
пробирками на 500 мл.
Цилиндры мерные с притертой пробкой на 50
мл.
2.4. Отбор проб и подготовка их к
анализу.
Растительную пробу (картофель, лук,
яблоки, сено, силос и листья зеленых растений, в том числе хлопчатника)
измельчают ножом на кусочки 0,5 куб. см и отбирают среднюю пробу 25 г.
Почву в естественно-влажном состоянии или
воздушно-сухую просеивают через почвенное сито и отбирают для анализа среднюю
пробу 10 г.
Проба воды - 100 мл.
2.5. Проведение определения
Анализируемые навески помещают в
конические колбы, пробы воды - в делительные воронки, куда добавляют по 5 г
хлористого кальция.
Из растений дурсбан
экстрагируют смесью ацетона с водой (1:1) трижды по 40 - 50 мл, из почвы - 50
мл смеси ацетона с 0,05 н водным раствором хлористого кальция (1:1). К пробам
воды в делительные воронки добавляют равный объем ацетона. Экстракцию
инсектицида из проб производят с помощью механического встряхивания в течение
30 мин. (для воды и растений) или 1 - 1,5 час. для почвы при комнатной температуре. Далее пробы
центрифугируют при 3000 об./мин.
(центрифугирование можно заменить фильтрованием). Объединенные экстракты из
растительных проб, а также пробы воды охлаждают в холодильнике или в смеси льда
с солью. Выпавший осадок отфильтровывают. Объем центрифугата (фильтрата) замеряют и количественно переносят
(весь или аликвотную часть) в делительную воронку, куда приливают н-гексан в количестве, составляющем меньше половины объема,
находящегося там центрифугата, взбалтывают 3 - 5 мин.
После расслоения жидкостей нижний водно-ацетоновый слой сливают в другую
делительную воронку, а гексан-ацетоновую фракцию
собирают в коническую колбу на 100 мл. Реэкстракцию
гексаном проводят еще два раза. Объединенную гексан-ацетоновую смесь сушат над безводным сульфатом
натрия и количественно переносят в колбу для отгона растворителей (сушить гексановую фракцию можно путем фильтрования через безводный
сернокислый натрий). Растворитель выпаривают на ротационном
испарителе досуха при температуре не выше 40 °С. Дальнейшее определение
проводят хроматографическими методами.
В некоторых случаях для растительных проб
требуется еще дополнительная очистка. С этой целью применяют колоночную
хроматографию, а именно пробу, сконцентрированную до 3 - 5 мл, вносят в колонку
(30 см х 1,5 см), заполненную слоем сернокислого натрия (2 - 3 см), окиси
алюминия (3 см), активированного угля КАД-молотый или ОУ-А (3 см) и снова
безводного сернокислого натрия (1 см). Предварительно через колонку пропускают
30 - 40 мл хлороформа для уменьшения сорбционной емкости. Из колонки дурсбан элюируют 100 мл
хлороформа. Хлороформ удаляют под вакуумом, остаток растворяют в гексане и определяют количество инсектицида хроматографическими методами.
2.5.1. Методы аналитического определения
Проба с помощью капилляра или
микропипетки наносится на хроматографическую
пластинку со слоем силикагеля или на "Силуфол".
Параллельно на пластинку наносят серию стандартных растворов с содержанием 1; 5
и 10 мкг дурсбана. Хроматографируют
в системе гексан - ацетон (9:1). Когда фронт
растворителя поднимется от линии старта на 10 см, пластинку вынимают,
проветривают и опрыскивают одним из проявляющих реагентов:
1. Хроматограмму
опрыскивают 0,5-процентным раствором 2,6-дибром-N-хлорхинонимина
в гексане, затем нагревают в течение 5 - 7 мин. в
термостате при 110°. Дурсбан проявляется в виде
оранжевых пятен на светлом фоне. Нижний предел обнаружения 0,5 мкг.
2. Хроматограмму
опрыскивают 1-процентным раствором 4-(р-нитробензил)-пиридином, нагревают в термостате 3 - 5 мин. при 110°,
затем снова опрыскивают 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина
в ацетоне. Дурсбан проявляется в виде сине-фиолетовых
пятен на светлом фоне. Нижний предел обнаружения 0,5 мкг.
3. Хроматограмму
опрыскивают бромфеноловым реагентом с последующим
снятием фона обработкой пластинки 5-процентным раствором уксусной кислоты. На
пластинке проявляются сине-фиолетовые пятна дурсбана
на светло-желтом фоне. Нижний предел обнаружения 3 мкг.
Пластинки со слоем силикагеля, в который
внесен флуоресцирующий краситель, или "Силуфол-UV 254" можно без проявления просматривать в хемоскопе. Инсектицид определяют по тушению флуоресценции.
Нижний предел обнаружения 1 мкг.
R
для дурсбана в указанной системе растворителей
на "Силуфоле" 0,65.
f
Содержание дурсбана
в пробе вычисляют по формуле:
С
пр
С = ---,
А
где:
С -
количество препарата, найденное по хроматограмме, при
сравнении
пр
со стандартами,
мкг;
А - навеска исследуемой пробы в мг или
объем воды в мл;
С - содержание дурсбана
в пробе, мкг/кг или мг/л.
Условия определения газожидкостной
хроматографией
После отгонки растворителя к сухому
остатку добавляют 1 - 2 мл гексана, колбу закрывают
пробкой, тщательно обмывают внутреннюю поверхность колбы. Аликвотную часть
раствора (2 - 5 мкл) вводят в испаритель
хроматографа.
Для
количественного определения дурсбана используют
хроматограф
Цвет-106 или
другой модели с
детекторами ДТИ или
ДЭЗ (ДПР), колонки
стеклянные (1000 х 3 мм), заполненные 5% SE-30 на хроматоне N-AW-ДМСS (0,16
- 0,20 мм). Температура испарителя 220° (для
ДЭЗ) или 250°
(для ДТИ),
температура колонки
190° (для ДЭЗ)
или 210° (для
ДТИ), температура
детектора 220°
(для ДЭЗ). Скорость газа-носителя при работе на ДЭЗ (ДПР) 60
мл/мин., продув
детектора 150 мл/мин.; скорости газов при работе на ДТИ -
азота 21
мл/мин., водорода 15 мл/мин.,
воздуха 420 мл/мин. Рабочая шкала
-10
электрометра 1 х 10
. Скорость движения ленты самописца 240 мм/час (при
работе на ДЭЗ)
или 600 мм/час (при работе на ДТИ).
Время удерживания дурсбана
в указанных условиях работы ДЭЗ (ДПР) 3 мин. 5 сек. или в указанных условиях
работы ДТИ 6 мин. 20 сек.
Количество дурсбана
в пробе проводят методом соотношения со стандартами по высоте пиков.
В хроматограф вводят 2 мкл рабочего раствора. Линейность детектирования
сохраняется в пределах 1 - 20 нг.
2.6. Содержание дурсбана
в анализируемой пробе вычисляют по формуле:
Н х С х V
пр ст
С = -------------,
Н х V х А
ст а
где:
С - содержание дурсбана
в анализируемой пробе, мг/кг (мг/л);
Н -
высота пика анализируемой пробы, мм;
пр
Н -
высота пика стандарта, мм;
ст
С -
содержание дурсбана в стандарте, нг;
ст
V -
объем аликвоты, вводимой в
хроматограф, мкл (2 мкл);
а
V - общий объем рабочего раствора, мл;
А - навеска анализируемой пробы (в
пересчете на сухое вещество), г, или
объем воды, мл.
Если при введении в хроматограф
получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание",
готовят более разбавленные растворы, добавляя к конечному раствору пипеткой
известное количество гексана.
В качестве альтернативной колонки можно
использовать стеклянную колонку длиной 2 м и внутренним диаметром 3 мм,
заполненную хроматоном N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм) с
2% полидиэтиленгликольсукцинатом.
Требования безопасности
Общепринятые требования безопасности при
работе с горючими растворителями и фосфорорганическими пестицидами.
Авторы
Петрова Т.М., Андреев Ю.Б. - Всесоюзный
научно-исследовательский институт защиты растений, Ленинград.