Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

19 октября 1979 г. N 2083-79

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ НОРТРОНА В ВОДЕ, ЧЕРНОЗЕМНОЙ

ПОЧВЕ И САХАРНОЙ СВЕКЛЕ

 

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

 

1. Характеристика анализируемого пестицида

 

Активное вещество нортрона/синонимы: трамат, НЦ 8438/-2-этокси-2,8-дигидро-3,3-диметил-5-бензофуранил-метан-сульфонат.

 

                    CH

    CH SO O  /\     │ 3

      3  2 \// \┌───┼───CH

           │   ││   │     3

           │   ││   │

            \\ / \ / OC H                                        C  H  O S.

             \/   O    2 5                                        13 18 5

 

    Молекулярная масса: 286,4. Точка плавления: 71 °С.

    В  воде  растворяется  слабо  0,01%  при  25 °С и хорошо в органических

растворителях - ацетоне, бензоле, хлороформе, этаноле, н-гексане. Гербицид,

форма   препарата   -   20-процентный   или  50-процентный  эмульгирующийся

концентрат. Малотоксичен  для  теплокровных,  ЛД    для  крыс  2000  мг/кг.

                                                50

Применяется против двудольных сорняков на посевах сахарной свеклы.

 

2. Методика определения нортрона в воде, почве и сахарной

свекле методом тонкослойной хроматографии

 

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении пестицида из исследуемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта и хроматографировании препарата в тонком слое силикагеля на пластинках "Силуфол UV-254". Подвижными растворителями служат смеси: I - ацетон - изооктан в соотношении 1:1, II - диэтиловый эфир - изооктан в соотношении 4:1.

Проявление препарата производится реагентами после его фоторазложения в течение 20 минут облучением УФ-светом. Метод специфичен и позволяет избирательно определять нортрон в присутствии гербицидов, таких как бетанал, дуал и карбодимедон. Количественное определение производится путем сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы и стандартных растворов.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 1.

 

Таблица 1

 

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

НОРТРОНА С ПОМОЩЬЮ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

 

Диапазон определяемых количеств (мкг) - 3 - 10. Предел обнаружения в пробе - 3 - 5 мкг

 

┌────────┬───────┬───────┬────────┬────────┬───────┬─────────────┬────────┐

│Анализи-│Предел │Число  │Размах  │Среднее │Стан-  │Относительное│Довери- │

│руемая  │обнару-│парал- │варьи-  │значение│дартное│ стандартное │тельный │

│проба   │жения, │лельных│рования,│опреде- │откло- │отклонение, %│интервал│

│        │мг/л,  │опреде-│%       │ления, %│нение, │             │среднего│

│        │мг/кг  │лений, │        │        │%      │             │при     │

│        │       │n      │        │        │       │             │P = 0,95│

├────────┼───────┼───────┼────────┼────────┼───────┼─────────────┼────────┤

│Вода    │0,02   │5      │20      │88      │5,6    │6,8          │+/- 7,5 │

│Почва   │0,1    │5      │20      │85      │7,8    │9,2          │+/- 9,7 │

│Свекла  │0,2    │5      │20      │86      │8,0    │9,3          │+/- 10,0│

│Ботва   │0,3    │5      │20      │90      │8,7    │9,7          │+/- 10,8│

└────────┴───────┴───────┴────────┴────────┴───────┴─────────────┴────────┘

 

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, х.ч.

Бензидин, х.ч.

Изооктан эталонный, х.ч.

н-Гексан, х.ч.

Хлороформ, х.ч.

Пластинки "Силуфол UV-254"

Натрий сернокислый безводный, х.ч.

Дифениламин, х.ч.

Кислота соляная, х.ч.

Калий марганцевокислый, х.ч.

Метиловый желтый, х.ч.

Натрий едкий, 0,1-процентный раствор.

Алюминий сернокислый, 0,1 н раствор.

Стандартный раствор нортрона (100 мкг/мл) готовят растворением 0,005 г препарата (х.ч.) в 50 мл н-гексана.

Проявляющие реактивы

1. Метиловый желтый: 0,1 г в смеси 75 мл этанола и 25 мл дистиллированной воды.

2. Свежеприготовленный насыщенный раствор дифениламина в ацетоне.

3. 2-процентный раствор бензидина в этаноле.

2.3. Посуда и приборы

Водоструйный или масляный насосы.

Воронки делительные (250, 500 мл).

Воронки химические.

Камера для хроматографирования.

Камера для опрыскивания.

Колбы конические на 150 - 250 мл.

Прибор для отгонки растворителя.

Пульверизатор стеклянный.

Пипетки.

Микропипетки на 10 и 20 мкг.

Мерные цилиндры.

Лампа кварцевая ПРК-4.

Шкаф сушильный.

Эксикаторы.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление пластинок

Пластинки "Силуфол" активируют в сушильном шкафу 20 минут при температуре 130 - 140 °С.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция

Вода. 200 мл анализируемой воды помещают в делительную воронку и трижды по 50 мл экстрагируют н-гексаном (каждый раз по 5 минут). Экстракты объединяют. Фильтруют через слой безводного сернокислого натрия, упаривают почти досуха и хроматографируют.

Черноземная почва. 100 г перемешанной и растертой в ступке почвы помещают в плоскодонную колбу, заливают 125 мл н-гексана или диэтилового эфира. Содержимое колбы взбалтывают 10 - 15 минут и оставляют на 17 - 18 часов. Растворитель отфильтровывают через фильтр со слоем безводного сернокислого натрия. Колбу и фильтр трижды промывают по 25 мл растворителя. Экстракты объединяют и растворитель выпаривают досуха.

Свекла, ботва. Измельченную навеску 50 г свеклы или 25 г ботвы заливают на ночь н-гексаном или диэтиловым эфиром. Экстракт отфильтровывают, пробу промывают растворителем (три раза по 25 мл) и присоединяют его к экстракту. Объединенный экстракт высушивают безводным сернокислым натрием и растворитель испаряют досуха.

Сухой остаток переносят в колбу, используя 75 мл 0,1-процентного раствора едкого натра. Затем прибавляют 25 мл 0,1 н раствора сульфата алюминия, тщательно перемешивают и через 5 - 10 минут раствор отфильтровывают через плотный бумажный фильтр в делительную воронку. В воронку приливают 50 мл гексана и встряхивают в течение 5 минут. Операцию повторяют три раза. Гексановые экстракты фильтруют через слой безводного сернокислого натрия, отгоняют до объема 0,2 - 0,3 мл и наносят на пластинку.

2.5.2. Хроматографирование

    Сухой  остаток растворяют в небольшом количестве н-гексана и наносят на

пластинку.   Рядом   с  пробами  наносят  стандартные  растворы  препарата.

Пластинку  помещают  в  хроматографическую  камеру с системой растворителей

ацетон - изооктан (1:1) или диэтиловый эфир - изооктан (4:1). После подъема

растворителя  на высоту 10 - 12 см пластинку вынимают из камеры и оставляют

на  воздухе  для  испарения  растворителя.  После  пластинку  выдерживают в

УФ-свете  в  течение  20  минут  (лампа  ПРК-4).  При  наличии  нортрона на

хроматограмме проявляются коричневые пятна, аналогичные пятнам стандартного

раствора  с R  = 0,48 +/- 0,05 в системе растворителей ацетон - изооктан, а

             f

в  системе диэтиловый эфир - изооктан с величиной R  = 0,53 +/- 0,02. Затем

                                                   f

пластинку   помещают  в  камеру  для  опрыскивания  и  орошают  проявляющим

реактивом  1.  Нортрон обнаруживается в виде красных пятен на светло-желтом

фоне.  Возможно  проявление  хроматограмм  также  следующим  образом: после

хроматографирования  и высушивания пластинку облучают УФ-светом 20 минут, а

затем  опрыскивают насыщенным раствором дифениламина в ацетоне и подвергают

опять  УФ-облучению  на  10  -  15  минут. Нортрон проявляется в виде синих

пятен.

Высокая чувствительность наблюдается при таком определении, когда после облучения УФ-светом пластинку на 5 минут помещают в камеру, насыщенную парами хлора. Для получения хлора на дно эксикатора насыпают 7 - 10 г перманганата калия и добавляют 15 - 20 мл концентрированной соляной кислоты. После улетучивания паров хлора пластинку опрыскивают раствором бензидина. Препарат проявляется в виде сине-зеленых пятен на светлом фоне, быстро буреющих на воздухе.

2.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение производится путем сравнения площади пятен проб и стандартных растворов. Измерение площади осуществляется с помощью миллиметровой бумаги. Пропорциональная зависимость между площадью пятна и концентрацией препарата наблюдается до 10 мкг. При большом содержании препарата на пластинку наносят часть экстракта.

Содержание препарата в исследуемой пробе, мг/кг, мг/л, находят по формуле:

 

                                    A х S

                                         2

                                X = ------,

                                    P х S

                                         1

 

    где:

    A - количество мкг стандартного раствора препарата;

    S  - площадь пятна стандартного раствора, кв. мм;

     1

    S  - площадь пятна пробы, кв. мм;

     2

    P - вес или объем пробы, взятой на анализ в г или мл.

2.7. Требования безопасности

Соблюдать все требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами, органическими растворителями и УФ-светом.

2.8. Настоящие Методические указания разработаны к.с.-х.н. В.С. Шустровым, к.с.-х.н. М.Ф. Зелениной, Э.В. Кулинцовой, пос. Рамонь, ВНИИЗР, Воронежской области.